食品添加剂的测定.ppt

1、第十一章 食品添加剂的测定,2020/9/1,1,目 录,2020/9/1,2,第一节 概述,一、食品添加剂的定义与用途 在食品的生产加工过程中，由于某些需要，有意识地向食品中添加少量化学合成物质或天然物质，在食品工艺学上把这些物质称为食品添加剂。 中华人民共和国食品卫生法对食品添加剂的定义为“为了改善食品品质和色、香、味以及为满足防腐和加工工艺的需要而加入食品中的化学合成物或者天然物质。” 该法还规定了食品强化剂的定义是“为增强营养成分而加入食品中的天然或人工合顾的属于天然营养范围的食品添加剂”。,2020/9/1,3,食品添加剂按其来源分为天然与合成两类： 天然食品添加剂主要来自于动、植物

2、组织或微生物的代谢产物。 人工合成食品添加剂是通过化学手段使元素或化合物发生氧化、还原、缩合、聚合、成盐等一系列化学反应而制成。 食品添加剂种类有： 防腐剂、抗氧化剂、发色剂、漂白剂、酸味剂、凝固剂、疏松剂、增稠剂、消泡剂、甜味剂、着色剂、乳化剂、品质改良剂、抗结剂、酶制剂、香料、营养强化剂、食品加工助剂、增味剂、保鲜剂及其它添加剂等。,2020/9/1,4,使用食品添加剂应该遵循以下原则： 1.经过规定的食品毒理学安全评价程序的评价证明在使用限量内长期使用对人体安全无害。 2.不影响食品感官性质和原味，对食品营养成分不应有破坏作用。 3.食品添加剂应有严格的质量标准，其有害杂质不得超过允许限

3、量。 4.不得由于使用食品添加剂而降低良好的加工措施和卫生要求。 5.不得使用食品添加剂掩盖食品的缺陷或作为伪造的手段。 6.未经卫生部允许婴儿及儿童食品不得加入食品添加剂。,2020/9/1,5,二、食品添加剂的卫生学问题 1.急性和慢性中毒 2.引起变态反应 3.体内蓄积问题 4.食品添加剂的转化问题,2020/9/1,6,三、食品添加剂的测定 食品添加剂的分析测定一般包括三部分的内容，即： 添加剂本身的测定，以保证其应有的质量标准和安全性，主要有鉴别试验、含量分析、质量指标分析等； 食品中食用添加剂的定性、定量分析； 食品中禁用添加剂的测定。 日常检验中经常遇到的食品添加剂主要有防腐剂、

4、抗氧化剂、着色剂、发色剂、甜味剂等， 测定方法：比色法、紫外分光光度法、薄层色谱法、HPLC法,2020/9/1,7,食品中常见添加剂的测定,2020/9/1,8,第二节 甜味剂的测定,一、主要甜味剂的性质 甜味剂是赋予食品甜味的添加剂，可分为天然甜味剂和人工合成甜味剂。 天然甜味剂中包括蔗糖、果糖、葡萄糖、麦芽糖等天然糖类和糖的衍生物（如木糖醇、麦芽糖醇等）以及其它天然甜味物（如甜菊糖甙、甘草酸、某些蛋白质等）。 人工合成甜味剂主要是一些具有甜味的化学物质，其甜度一般比蔗糖高数十倍仍至数百倍，但不具有任何营养价值。 我国批准并广泛使用的主要有糖精钠、环已基氨基磺酯钠（甜蜜素）、天门冬酰氨酸甲

5、酯（甜味素）等。,2020/9/1,9,糖精化学名称为邻-磺酰苯甲酰亚胺其分子式为C7H5O3NS，白色结晶或白色晶状粉末，难溶于水，溶于乙醚、乙醇、氯仿等有机试剂，化学性质不稳定，遇热易分解。 糖精钠为糖精的钠盐，是含有两个水分子的无色或白色结晶，无臭，稍有苦味，在空气中风化失去结晶水后成粉末状。溶于水，不溶于乙醚、乙醇、氯仿等有机试剂，化学性质较为稳定。,2020/9/1,10,糖精对人体无营养价值，一般认为糖精钠在体内不被利用，大部分由尿排出。 有试验表明，过量摄入糖精钠可导致实验动物肿瘤发生率增大。国际上对糖精钠的利用普遍采取限制态度。美国允许使用在软饮料0.072g/L；冷饮0.15

6、0g/L；糖果2.12.6g/kg；烘焙食品0.012g/kg。FAO/WHO规定糖精的ADI为2.5mg/kg体重，在膳食治疗中为10mg/kg体重。,2020/9/1,11,甜蜜素化学名称为环已基氨基磺酸钠，分子式为C6H12NaO3S，结构式为： 甜蜜素纯品为白色结晶粉末，甜度为蔗糖的40-70倍，易溶水，微溶于乙醇，不溶于三氯甲烷、乙醚。摄入体内后，40%由尿排出，其余的由粪便排出。主要供糖尿病患者使用，使用浓度不超过0.4%，FAO/WHO规定ADI为11mg/kg体重。,2020/9/1,12,二 食品中甜味剂的允许量标准,2020/9/1,13,2020/9/1,14,食品中的糖

7、精钠的分析,糖精钠的测定方法较多，国家标准GB/T5009.28-1996中规定了高效液相色谱法、薄层色谱法及离子选择电极法测定食品中糖精钠的标准方法。 另外气相色谱法、比色法、紫外吸收分光光度法、荧光法等方法也常用于测定糖精钠。 应用气相色谱法测定时，样品提取液中的糖精钠需要通过甲基化或三甲基硅烷化处理，然后才能进行气相色谱分离测定。 比色法测定糖精钠是应用糖精钠与苯酚-硫酸在175下反应，生成酚磺肽，在碱性条件下生成红色产物的原理进行测定。,2020/9/1,15,（一）高效液相色谱法 1 原理 样品加温除去二氧化碳和乙醇，调pH至近中性，过滤后进高效液相色谱仪经反相色谱分离后，根据保留时

8、间和峰面积进行定性和定量分析。 2 试剂 （）甲醇：经滤膜（0.5m）过滤 （）氨水（）：氨水加等体积的水混合 （）乙酸铵溶液（0.02mol/L)：称取1.54g乙酸，加水至1000mL溶解，经滤膜（0.45m）过滤 （）糖精钠标准储备溶液（1.0mg/mL）：准确称取0.0851g经120烘干小时后的糖精钠，加水溶解定容至1000mL。 （）糖精钠标准使用溶液（0.1mg/mL）：吸取糖精钠标准储备液10.0mL放入100mL容量瓶中，加水至刻度，经滤膜（0.45m）过滤。,2020/9/1,16,仪器 高效液相色谱仪，紫外检测器 分析步骤 （）样品处理 汽水：称取5.0010.00g样品

9、，放入小烧杯中，微温搅拌除去二氧化碳，用氨水(1+1)调pH约为。加水定容至适当体积，经滤膜（0.45m）过滤。 果汁类：称取5.0010.00g样品，放入小烧杯中，用氨水(1+1)调pH约为。加水定容至适当体积，离心沉淀，上清液经滤膜（0.45m）过滤。 配制酒类：称取10.00g样品，放入小烧杯中，水浴加热除去乙醇，用氨水(1+1)调pH约为。加水定容至适当体积，经滤膜（0.45m）过滤。,2020/9/1,17,（）高效液相色谱条件 色谱柱：YWG-C18 4.6mm250mm 10m不锈钢柱。 流动相：甲醇：乙酸铵溶液(0.02mol/L) (5+95)。 流速：1mL/min 检测器

10、：紫外检测器，波长230nm，灵敏度0.2AUFS （）测定 取样品处理液和标准使用液各10L（或相同体积）注入高效液相色谱仪进行分离测定，根据峰保留时间定性，峰面积定量。,2020/9/1,18,（）计算 式中: 1样品中糖精钠含量，g/kg； m1进样体积中糖精钠的质量，mg； V1样品稀释液总体积，mL； V2进样体积，mL； m2样品质量，g。 结果表达：报告算术平均数的三位小数。 允许相对相差小于10%.,2020/9/1,19,（二）薄层色谱法 原理在酸性条件下，食品中的糖精钠用乙醚提取、浓缩、薄层色谱分离，显色后与标准比较，进行定性和半定量分析。 试剂 (1)乙醚：不含过氧化物。

11、 (2)无水硫酸钠 (3)无水乙醇及95%乙醇 (4)聚酰胺粉：200目 (5)盐酸（1+1）：取100mL盐酸加水稀释至200mL。 (6)展开剂：正丁醇氨水无水乙醇(7+1+2)，异丙酮氨水无水乙醇(7+1+2) (7)显色剂：溴甲酚紫溶液(0.4g/L)称取0.04g溴甲酚紫，用95%乙醇溶解，加氢氧化钠溶液(4g/L)1.1mL调节pH为，定容至100mL。,2020/9/1,20,(8)硫酸铜溶液(100g/L) (9)氢氧化钠溶液(40g/L)。 (10)糖精钠标准溶液：准确称取0.0851g经120烘干小时后的糖精钠，加乙醇溶解，移入100mL容量瓶中，加95%乙醇稀释至刻度。此

12、溶液每毫升相当于1mg糖精钠（C6H4CONNaSO22H2O）。 3 仪器 (1)玻璃纸：生物制品透析袋或不含增白剂的市售玻璃纸。 (2)玻璃喷雾器 (3)微量注射器 (4)紫外灯：波长253.7nm (5)薄层板：10cm20cm 或20cm20cm (6)展开槽,2020/9/1,21,4 分析步骤 (1)样品提取 饮料、冰棍、汽水：取10mL均匀试样（如样品中含有二氧化碳，先加热除去，如样品中含有酒精，加4%氢氧化钠溶液使其呈碱性，在沸水浴中加热除去）置于100mL分液漏斗中，加2mL盐酸(1+1)，用30,20,20mL乙醚提取次，合并提取液，用5mL盐酸酸化的水洗涤一次，弃去水层，

13、乙醚层通过无水硫酸钠脱水后，挥干乙醚，加2.0mL乙醇溶解残留物，密塞保存，备用。 酱油、果汁、果酱等：称取20.0g磨碎的均匀试样，置于100ml容量瓶中，加水至约60ml，加20ml硫酸铜溶液（100g/L），混匀，再加4.4ml氢氧化钠溶液（40/L），加水至刻度，混匀，静置30min，过滤，取50ml滤液置于250ml分液漏斗中，以下按自“加2ml盐酸（1+1）”操作。,2020/9/1,22,固体果汁粉等：称取20.0g磨碎的均匀试样，置于200ml容量瓶中，加100ml水，加温使之溶解、放冷，以下按自“加20ml硫酸铜溶液（100g/L）”操作。 糕点、饼干等蛋白质、脂肪、淀粉含量

14、高的样品：称取25.0g均匀试样，置于透析用玻璃纸中，放入大小适当的烧杯中，加50ml氢氧化钠溶液（0.8g/L）调成糊状，将玻璃纸口扎紧，放入盛有200ml氢氧化钠溶液（0.8g/L）的烧杯中，盖上表面皿，透析过夜。量取125ml透析液（相当于12.5g样品），加约0.4ml盐酸（1+1）使成中性，加20ml硫酸铜溶液（100g/L），混匀，再加4.4ml氢氧化钠溶液（40g/L），混匀，静置30min，过滤。取120ml（相当于10g样品），置于250ml分液漏斗中，以下按自“加2ml盐酸（1+1）”操作。,2020/9/1,23,（2）薄层板的制备 称取1.6g聚酰胺粉，加0.4g可溶性

15、淀粉，加约7.0mL水，研磨35min，立即涂成0.250.30mm厚的10cm20cm的薄层板，室温干燥后，在80下干燥1h。置于干燥器中保存。 （3）点样 在薄层板下端2cm处，用微量注射器点10mL和20mL的样液二个点，同时点3.0,5.0,7.0,10.0mL糖精钠标准溶液，各点间距1.5cm。 （4）展开与显色 将点好的薄层析放入盛有展开剂的展开槽中，展开剂液层约0.5cm，并预先已达到饱和状态。展开至10cm，取出薄层板，挥干，喷显色剂，斑点显黄色，根据样品点和标准定性，根据斑点颜色深浅进行半定量。,2020/9/1,24,5 计算 式中： X2样品中糖精钠的含量，g/kg或g/

16、L； m3测定用样液中糖精钠的质量，mg； V4点板样液质量（体积），g或ml； V3样品提取液残留物加入乙醇的体积，mL;M4样品质量，g,2020/9/1,25,(三)离子选择电极测定法 1.原理 糖精选择电极是以季铵盐所制薄膜为感应膜的电极，它和作为参比电极的饱和甘汞电极配合使用以测定食品中糖精钠的含量。当测定温度、溶液总离子强度和溶液接界电位电位条件一致时，测得的电位遵守能斯特方程式电位差随溶液中糖精钠离子的活度（或浓度）改变而变化。 被测溶液中糖精钠含量在0.021mg/ml范围内。电极电位值与糖精离子浓度负对数成直线关系。,2020/9/1,26,2. 试剂 （1）乙醚：使用前用盐

17、酸（6mol/L）饱和。 （2）无水硫酸钠 （3）盐酸（6mol/L） （4）氢氧化钠溶液：0.06mol/L、0 .02mol/L、 40g/L （5）硫酸铜溶液（100g/L） （6）磷酸二氢钠c(NaH2PO42H2O)=1mol/L溶液 （7） 磷酸氢二钠c(Na2HPO412H2O)=1mol/L溶液 （8）总离子强度调节缓冲液：87.7ml磷酸二氢钠溶液（1mol/L）和12.3ml 磷酸氢二钠溶液（1mol/L）混合。 （9）糖精钠标准溶液：准确称取0.0851g经120烘干小时后的糖精钠结晶，移入100mL容量瓶中，加水稀释至刻度。此溶液每毫升相当于1mg糖精钠。,2020/9

18、/1,27,3 仪器 精密级酸度计或离子活度计或其它精密级电位仪，准确至1mV。 糖精选择电极。 217型甘汞电极：具双盐桥式甘汞电极，下面的盐桥内装入含1%琼脂的氯化钾溶液（3mol/L）。 磁力搅拌器 透析用玻璃纸。,2020/9/1,28,4.测定步骤 样品提取 提取方法同前法 测定 标准曲线的绘制：准确吸取0，0.5，1.0，2.5，5.0，10.0mL糖精钠标准溶液(相当于0，0.5，1.0，2.5，5.0，10.0mg糖精钠)，分别置于50ml容量瓶中，各加5mL总离子强度调节缓冲液，加水至刻度，摇匀。 将糖精选择电极和甘汞电极分别与测量仪器的负端和正端相连接，将电极插入盛有水的烧

19、杯中，按其仪器的使用说明书调节至使用状态，在搅拌下用水洗至电极起始电位(例如某些电极起始电位达-320mV)。取出电极用滤纸吸干。将上述标准系列溶液按低浓度到高浓度逐个测定，得其在搅拌时的平衡电位值(-mV)。 在半对数纸上以毫升(毫克)为纵坐标；电位值(-mV)为横坐标绘制标准曲线。,2020/9/1,29,样品的测定：准确吸取20mL乙醚提取液置于50mL烧杯中，挥发至干残渣，加5mL总离子强度调节缓冲液。小心转动，振摇烧杯使残渣溶解，将烧杯内容物全部定量转移入50mL容量瓶中，原烧杯用少量水多次漂洗后，并入容量瓶中，最后加水至刻度摇匀。依法测定其电位值(-mV),，查标准曲线求得测定液中

20、糖精钠毫克数。 计算 m5 1000 X3= m6 (V6/V5)1000 式中：X：样品中糖精钠的含量，gkg或g/L； m5测定液中糖精钠的质量，mg6 V5乙醚提取液的体积，m山 V6分取乙醚提取液的体积，mL； m6样品的质量或体积，g或mL。,2020/9/1,30,食品中环已基氨基磺酸钠的测定,GB13112-91规定了气相色谱法、比色法、薄层色谱法测定食品中环已基氨基磺酸钠的测定方法。其中气相色谱法及比色法适用于饮料、凉果等食品中环已基氨基磺酸钠的测定，薄层层析法适用于饮料、果汁、果酱、糕点中环已基氨基磺酸钠的测定。 （一） 气相色谱法 本方法适用于饮料、凉果等食品中环已基氨基磺

21、酸钠的测定。 1 原理 在硫酸介质中环己基氨基磺酸钠与亚硝酸反应，生成环己醇亚硝酸酯，利用气相色谱法进行定性和定量。,2020/9/1,31,2 试剂 （1）正己烷 （2）氯化钠。（3）层析硅胶(或海砂)。 （4）50gL亚硝酸钠溶液。 （5）100gL硫酸溶液。 （6）环己基氨基磺酸钠标准溶液：精确称取1.0000g环己基氨基磺酸钠，加水溶解并定容至100mL，此溶液每毫升含环己基氨基磺酸钠10mg。,2020/9/1,32,3 仪器 （1）气相色谱仪附氢火焰离子化检测器。 （2）旋涡混合器。 （3）离心机。 （4）微量注射器。 4 分析步骤 （1）试料制备 液体试样：称取20.0g试样于1

22、00mL带塞比色管，置冰浴中。 固体试样：称取2.0g已剪碎的试样于研钵中，加少许层析硅胶(或海砂)研磨至呈干粉状，经漏斗倒入100mL容量瓶中，加水冲洗研钵，并将洗液一并转移至容量瓶中，加水至刻度，不时摇动，1h后过滤，即得试料，准确吸取20mL于100mL带塞比色管，置冰浴中。,2020/9/1,33,（2）色谱条件 色谱柱：长2m，内径3mm，U形不锈钢柱。 固定相：Chromosorb W AW DMCS 80100目，涂以10SE30。 测定条件 柱温：80；汽化温度：150；检测温度：150。 （3）测定 标准曲线的制备：准确吸取1.00mL环己基氨基磺酸钠标准溶液于100mL带塞

23、比色管中，加水20mL，置冰浴中，加入5mL 50g/L亚硝酸钠溶液，5mL 100g/L硫酸溶液，摇匀，在冰浴中放置30min，并经常摇动，然后准确加入10mL正己烷，5g氯化钠，摇匀后置旋涡混合器上振动1min(或振摇80次)，待静止分层后吸出己烷层于10mL带塞离心管中进行离心分离，每毫升己烷提取液相当1mg环己基氨基磺酸钠，将标准提取液进样l5L于气相色谱仪中，根据响应值绘制标准曲线。,2020/9/1,34,样品管按自“加入5mL 50g/L亚硝酸钠溶液”起依法操作，然后将试料同样进样l5mL，测得响应值，从标准线图中查出相应含量。 5计算 式中：X样品中环己基氨基磺酸钠的含量，gk

24、g； m样品质量，g； V进样体积，L； 10正己烷加入量，mL， A测定用试料中环己基氨基磺酸钠的含量，g。 两次平行测定相对允许误差绝对值10，平行测定结果用算术平均值表示，保留二位小数。,2020/9/1,35,（一） 比色法 本方法适用于饮料、凉果等样品中环已基氨基磺酸钠的测定。 1 原理 在硫酸介质中环己基氨基磺酸钠与亚硝酸钠反应，生成环己醇亚硝酸酯，与磺胺重氮化后再与盐酸萘乙二胺偶合生成红色染料，在550nm波长测其吸光度，与标准比较定量。 2 试剂 （1）三氯甲烷。 （2）甲醇。 （3）透析剂：称取05g二氯化汞和125g氯化钠于烧杯中，以001mol儿盐酸溶液定容至100mL。

25、 （4）10gL亚硝酸钠溶液。（5）100g/L硫酸溶液。,2020/9/1,36,（6）100g/L尿素溶液(临用时新配或冰箱保存)。 （7）100g/L盐酸溶液 （8）10g/L磺胺溶液：称取1g磺胺溶于10盐酸溶液中，最后定容至100mL （9）1g/L盐酸萘乙二胺溶液 （10）环己基氨基磺酸钠标准溶液：精确称取0.1000g环己基氨基磺酸钠，加水溶解最后定容至100mL, 此溶液每毫升含环己基氨基磺酸钠1mg。 临用时将环己基氨基磺酸钠标准溶液稀释10倍。此液每毫升含环己基氨基磺酸钠0.1mg。 3 仪器 （1）分光光度计。 （2）旋涡混合器。 （3）离心机。 （4）透析纸。,2020

26、/9/1,37,4 分析步骤 （1）试样处理 同气相色谱法。 （2）提取 液体试料：称取10.0g试料于透析纸中，加10mL透析剂，将透析纸口扎紧，放入盛有100mL水的200mL广口瓶内，加盖，透析2024h得透析液。 固体试料：准确吸取10.0mL经上述处理后的试料提取液于透析纸中，以下操作按项下进行。,2020/9/1,38,（3）测定 取2支50mI带塞比色管，分别加入10mL透析液和10mL标准液，于03冰浴中，加入1mL l0g/L亚硝酸钠溶液，1mL 100g/L硫酸溶液，摇匀后放入冰水中不时摇动，放置1h，取出后加15mL三氯甲烷，置旋涡混合器上振动1min，静置后吸去上层液，

27、再加15mL水，振动1min，静止后吸去上层液，加10mL l00g/L尿素溶液，2mL l00g/L盐酸溶液，再振动5min，静置后吸去上层液，加15mL水，振动lmin，静置后吸去上层液，分别准确吸出5mL三氯甲烷于2支25mL比色管中。另取一支25mL比色管加入5mL三氯甲烷作参比管。 于各管中加入15mL甲醇，1mL 10gL磺胺，置冰水中15min，取出回复常温后加入1mL 1g/L盐酸萘乙二胺溶液，加甲醇至刻度，在1530下放置2030min，用1cm比色杯于波长550nm处测定吸光度，测得吸光度A及As。 另取2支50mL带塞比色管，分别加入10mL水和10mL透析液，除不加10

28、gL亚硝酸钠外，其他按项下进行，测得吸光度As0及A0 。,2020/9/1,39,5计算 C A-A0 100+10 1 1000 X= m As-As0 V 1000 1000 式中：X样品中环己基氨基磺酸钠的含量，gkg； m样品质量，g； V透析液用量，mL； C标准管浓度，gmL； As标准液吸光度； As0水的吸光度； A试料透析液吸光度； A0不加亚硝酸钠的试料透析液吸光度。 两次平行测定相对允许误差绝对值10，平行测定结果用算术平均值表示，保留二位小数。,2020/9/1,40,食品中天门冬酰苯丙氨酸甲酯的测定,目前无测定食品中天门冬酰苯丙氨酸甲酯的标准方法。但有高效液相色谱法

29、测定饮料中天门冬酰苯丙氨酸甲酯的报导。 1原理 样品经加温除去二氧化碳，经微孔滤膜过滤后直接注入高效液相色谱仪，经反相色谱分离后，根据保留时间和蜂面积进行定性定量。 2试剂 (1)甲醇。 (2)氢氧化铵。 (3)天门冬酰苯丙氨酸甲酯。 (4)天门冬酰苯丙氨酸甲酯标准溶液：称取天门冬酰苯丙氨酸甲酯0.0250g，用移动相溶解并稀释至50mL，混匀后，通过0.45m微孔滤膜脱气。,2020/9/1,41,3仪器 岛津LC-4A高效液相色谱仪 紫外检测器、超声波清洗器等。 4操作方法 (1)样品处理：饮料先微温赶气，然后经过0.45m的微孔滤膜过滤。 (2)样品测定 a色谱条件： 流动相：甲醇200

30、mL+水250mL+氨(1+99)0.7mL+硫酸(1+4) l mL，调混合液pH为44.5，使用前通过0.45m微孔滤膜脱气或超声脱气。流速：1mLmin， 色谱柱：EorbaxC18，4.6mm250mm，粒度为10m。 检测器：214nm；灵敏度：0.08AUFS。 柱温：40,2020/9/1,42,b制备标准曲线：分别进天门冬酰苯丙氨酸甲酯标准液2,4,10,20L(即相当于天门冬酰苯丙氨酸甲酯1,2,5,10g)，每个浓度连续测定3次，取其峰面积平均值。以峰面积为纵坐标、天门冬酰苯丙氨酸甲酯量(g)为横坐标作曲线。 c样品进样20L，与标准同样条件进行测定，测得样品中天门冬酰苯丙

31、氨酸甲酯的峰面积，然后从标准曲线上查得测定液中所含天门冬酰苯丙氨酸甲酯的量。 5计算 A10001000 X= V10001000 式中：X每升饮料中含有天门冬酰苯丙氨酸甲酯量,g/L； A由标准曲线查得的测定液中相当于天门冬酰-苯丙氨酸甲酯量，g； V测定时进样的体积，L。,2020/9/1,43,第三节 防腐剂的测定,防腐剂是能防止由微生物作用引起食品腐败变质、延长食品保存期的一种食品添加剂，它还有防止食物中毒的作用。在GB2760中允许使用的防腐剂适用范围一般只限于蛋白质含量较低有食品。 我国允许使用的防腐剂品种分为无机防腐剂和有机防腐剂两类，有机防腐剂主要有苯甲酸（及其钠盐）、山梨酸（

32、及其钾盐）、对羟基苯甲酸丙酯、乳酸及醋酸、脱氢乙酸和乙酸衍生物、丙酸、2-（4-噻唑）-苯并咪唑（TBZ）、低级脂肪酸甘油酯、氨基酸、维生素等，无机防腐剂主要有硝酸盐和亚硝酸盐、亚硫酸及其盐类、游离氯与次氯酸盐、二氧化碳等。,2020/9/1,44,允许使用的防腐剂中使用其钠盐或钾盐的主要原因一般是为了提高其溶解度。这些防腐剂的毒性都较低，苯甲酸、山梨酸等由于代谢过程参与体内现有的代谢渠道，因此毒性很低。有些防腐剂还有其它用途，如亚硫酸及其盐类常用作漂白剂；硝酸盐与亚硝酸盐主要用作肉类制品腌制时的发色剂，国外使用山梨酸、山梨酸钾代替发色剂亚硝酸盐，既防止肉毒梭菌芽孢的发育又降低亚硝酸盐的含量。

33、,2020/9/1,45,一、主要防腐剂的性质与毒性 苯甲酸及其钠盐（Benzoic acid 饮料中为0.075g/kg；焙烤食品为0.05g/kg；冰淇淋、冻果汁为0.030g.kg，香肠、腊肠、红肠表面0.125g/kg。ADI为07mg/kg体重。,2020/9/1,134,二、主要人工合成着色剂的卫生标准 1.我国食品中着色剂的使用标准（GB2760-1996） 2.FAO/WHO规定的ADI值 苋菜红：00.5mg/kg体重 胭脂红：04mg/kg体重 赤藓红：00.1mg/kg体重 诱惑红：07mg/kg体重 日落黄：05mg/kg体重 柠檬黄：07.5mg/kg体重 亮蓝：01

34、2.5mg/kg体重 靛蓝：07mg/kg体重,2020/9/1,135,三、测定方法,食品中添加的色素大多是调配后使用，食品本身的颜色也是多元的，因此测定时关键在于各种色素的分离，常见的分离技术主要有纸色谱、薄层色谱、气相色谱、高效液相色谱、羊毛吸附等。导数光谱、双波长吸收光谱等光谱分析方法及极谱等电化学方法也被应用于色素的测定。 测定食品中人工合成色素时，必须对样品进行前处理，去除样品中的糖、蛋白质、还原性物质等干扰物质，然后进行色素的提取、测定工作。,2020/9/1,136,提取色素的方法也有很多，如聚酰胺吸附法、羊毛染色法、离子交换法、分子筛分离法、吸附柱色谱法、溶剂抽提法、喹啉等化

35、合物结合法。 国家标准方法（GB5009.35-1996）采用聚酰胺吸附法。对吸附和分离两种以上色素是目前较为理想的方法，并广泛使用。聚酰胺在酸性溶液中能与色素牢固地结合，并能在很稀的溶液中吸附色素，但对天然色素的吸附不紧密，能被甲醇-甲酸洗脱下来。,2020/9/1,137,（一）高效液相色谱法（GB/T5009.35-1996） 本方法适用于清凉饮料、配制酒、糖、果汁等食品中酸性人工合成色素的测定。 1.原理 食品中人工合成着色剂用聚酰胺吸附法或液液分配法提取，制成水溶液，注入高效液相色谱仪，经反相色谱分离，根据保留时间定性和与峰面积比较进行定量。 2.试剂 3.仪器,2020/9/1,1

36、38,4.分析步骤 （1） 样品处理 桔子汁、果味水、果子露汽水等：称取20.040.0g样品，放入100ml烧杯中。含二氧化碳样品加热驱除二氧化碳。 配制酒类：称取20.040.0g，放100ml烧杯中，加小碎瓷片数片，加热驱除乙醇。 硬糖、蜜饯类、淀粉软糖等；称取5.0010.00g，粉碎样品，放入100ml小烧杯中，加水30ml，温热溶解，若样品溶液pH较高，用柠檬酸溶液调pH值到6左右。 巧克力豆及着色糖衣制品：称取5.0010.00g，放入100ml小烧杯中，用水反复洗涤色素，到巧克力豆无色素为止，合并色素漂洗液为样品溶液。,2020/9/1,139,（2） 色素提取 聚酰胺吸附法：样品溶液加柠檬酸溶液调pH值到6, 加热至60，将1g聚酰胺粉加少量水调成粥状，倒入样品溶液中，搅拌片刻，以G3垂融分液漏斗抽滤，用60pH=4的水洗涤35次，然后用甲醇-甲酸混合液洗涤35次（含赤藓红的样品用液液分配法），再用水洗至中性，用乙醇-氨水-水混合溶液解吸35次，每次5ml。收集解吸液，加乙酸中和，蒸发至近干，加水溶解，定容至5ml。经滤膜（0.45m）过滤，取10L进高效液相色谱仪。,2020/9/1,140,液-液分配法（适用于含赤藓红的样品）：将制备好的样品溶液放入分液漏斗中，加2ml盐酸、三正辛胺正丁醇溶液（5%）1020mL，振摇提取，分取有机相，重复提取至有