第三节动物的克隆.pptx

1、思路整理：,已知： 1.动物细胞克隆技术 2.动物细胞融合技术,未知： 动物细胞融合技术与克隆技术的综合应用,免疫治疗史上有个很著名的病人美国前总统卡特 卡特在90岁高龄查出黑色素瘤，全身多处扩散转移。治疗团队采取传统的抗体导向治疗方案，但是效果并不理想。,传统抗体药物制备：对实验动物多次注射抗原，取全部血液，离心、纯化收集血清（含抗体）,1.含有其他多种抗体，纯度低，所以灵敏度和特异性较差,2.不同批次动物之间的差异较大，不易于稳定和大量生产,弊端：,免疫治疗史上有个很著名的病人美国前总统卡特 卡特在90岁高龄查出黑色素瘤，全身多处扩散转移。治疗团队采取传统的抗体导向治疗方案，但是效果并不理

2、想然而一种新药的出现竟然让这个高龄老人被神奇地治愈了。这种新药叫做帕博利珠单克隆抗体,自主学习任务,要求： 1.独立自主学习P31-33 “杂交瘤技术与单克隆抗体制备” 2.学习时长：5min 3.尝试理解该过程整体的流程框架， 同时标记好自己暂时无法充分理解的环节,小组任务1：流程图构建,要求： 1.四人一小组 2.讨论并从多个词条中选取合适词条贴在框架相应位置 （注意：词条中含干扰项，充分讨论后再选择）,材料：框架、x个词条,获取细胞环节,细胞融合环节,筛选与检验环节,克隆培养环节,获取 单克隆抗体环节,注射特定的抗原蛋白,体外培养的骨髓瘤细胞群,B淋巴细胞,骨髓瘤细胞,聚乙二醇介导细胞融

3、合,灭活的仙台病毒 介导细胞融合,筛选杂交细胞,抗体检验,抗体检验,克隆阳性细胞,拓展概念,抗原决定簇：决定抗原特点的关键化学基团，又称抗原表位，一个病原体上可有多种和多个决定簇，且一般分子量越大抗原决定簇越多。,小组任务2：细胞融合模拟,要求： 1.四人一小组 2.决定一位汇报者 3.讨论并利用所给材料进行细胞融合模拟过程，寻找可能出现的组合类型,材料：两种细胞若干,讨论总结：,可能出现的结果有：,结论：B淋巴细胞与骨髓瘤细胞的融合过程中可能出现多种融合结果，欲获得正确的杂交瘤细胞，必须经过筛选。,筛选方法资料补充,（上海高考）已知细胞合成DNA有D和S两条途径，其中D途径能被氨基嘌呤阻断。

4、 淋巴细胞中有DNA合成的S途径，但一般不分裂增殖，连续培养过程中无法长期存活。 鼠骨髓瘤细胞中尽管没有S途径，但有D途径，能不断分裂增殖。,小组讨论任务3: 利用所给的一段资料，尝试讨论筛选的思路,加入氨基嘌呤后，使D合成途径阻断，仅有该合成途径的骨髓瘤细胞及其彼此融合的瘤细胞就不能增殖，但人淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合后的杂交细胞可以利用淋巴细胞中的S途径合成DNA而增殖,筛选思路：,方法：目前普遍采用HAT选择性培养基 需在普通的动物细胞培养基中加入氨基喋呤（A）,关于抗体检验,1.为什么要抗体检验（目的是什么）？,2.为什么要两次抗体检验？,3.怎么检验？,选出能产生特定抗体的杂交瘤细胞,抗体检验方法资料补充,有限稀释法：把杂交瘤细胞悬液多倍稀释后，转移到多孔培养板中，理论上希望每孔一个细胞，并且对每一个孔进行抗体的特异性检测，正确抗体对应的孔则为阳性孔。 但是，具体操作中，往往进行2-3次稀释并抗体检验,为什么要2-3次稀释并抗体检验？,目的： 确保所选取的阳性细胞为单个细胞,对筛选和检验后的单一杂交瘤细胞进行克隆培养,获得足够数量的细胞，在体外培养或注射到小