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文档简介

1、,电脑已调好 务请同学暂时不要使用 谢谢合作,凝 胶 层 析,一 原 理,当含有大、小不同分子量的样品溶液加入到凝胶层析柱内后，样 品溶液流经层析柱，加之向层析柱内连续不断加入洗脱溶液，小分子 通过扩散作用进入凝胶颗粒的微孔中，而大分子则被排阻在颗粒之 外，因此，大、小分子向下移动的速度发生差异，必然导致大、小分 子分开的距离随之增大。大分子物质行程较短，先流出层析柱，小分 子物质善在行经中，从而将大、小分子分离开来，达到了分离的目的。,凝胶层析的简单原理图,凝胶层析的简单原理图,二 实验目的与要求,用凝胶柱，分离一含有溶质分子大小不同的样品溶液。 并绘出洗脱曲线。通过实验了解并熟悉凝胶渗透层

2、析 的原理和实际应用,三 主要仪器与器主材,1、主要仪器,（1）、 电 脑 （2）、 色谱工作站 （3）、 紫外检测仪 （4）、 恒 流 泵,2、主要器材,（1）、 层 析 柱 （2）、 自动取液器 （3）、 量 筒 （4）、 试 剂 瓶 （5）、 烧 杯 （6）、 滴 管 （7）、 玻棒、等等,四 试剂与配制,4-1、试剂,(1)、葡聚糖凝胶 （Sephades G-25） (2)、磷酸氢二钠 (3)、磷酸二氢钠 (4)、血红蛋白 (5)、核黄素,4-2、试剂配制,(1)、 洗脱液（0.05 mol / L,pH 7.3磷酸缓冲）的配制： 分别称取磷酸二氢钠 克；磷酸氢二钠 克于一烧杯中，加

3、蒸馏 水毫升，搅拌溶解即可。 (2)、样品溶液的配制： 分别称取血红蛋白、核黄素各20.0毫克于一烧杯中，加磷酸缓冲 液10.0毫升，搅拌溶解即可。,五 实验装置连接图,实验装置的连接图,实验装置的连接图,1-恒流泵的进口端放入容器中，出口端与层析柱的进口端（上端）相连接。 2-层析柱的出口（下端）与紫外检测仪比色管进口端（下端）相连接。 3-紫外检测仪比色管出口端（上端）放入回收的容器中。 4-紫外检测仪信号线路输出端与工作站采集器接收端相连接。 5-采集器信号线路输出端与电脑进口端相连接。,六 实验操作步骤,实验操作步骤,1、装 柱 柱高：15 cm 2、平 衡 2-3倍柱床体积 3、上 样 上样量：0.5 ml 4、洗 涤 用量：0.5 ml，2次 5、洗 脱 流速：0.5 ml/分 6、收 集 免 7、测 定 色谱工作站,友情提醒,（1）、在装柱的同时应接通各仪器电源进行预热，并按要求不 断调试各仪器。 （2）、在柱子平衡时，应将柱下端出口与紫外检测仪进口端相 连接，由紫外检测仪出口端流出，并在此条件下，进行 仪器零点调节。 （3）、在开始上样之前，必须事先启动控制工作站的电脑。,七 面韶仪器的使用,紫外检测仪和色谱工作站介绍 思考题： 1、凝胶过滤柱层析为什么也要预先进

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