林选修动物细胞工程.ppt

1、克隆羊“多利”,动物细胞工程,2.2,动物细胞培养,动物细胞融合,单克隆抗体技术,细胞核移植,动物细胞工程常用技术,其它动物细胞工程的基础,怎样进行动物细胞的培养？（P44-50阅读）,（1）动物细胞培养概念？ （2）动物细胞培养的原理？ （3）为什么选用幼龄动物胚胎或其组织、器官做动物细胞培养材料？ （4）怎样将组织细胞分散成单个细胞？ （5）培养的细胞为何贴壁生长？ （6）何为接触性抑制？ （7）如何界定原代培养和传代培养？ （8）动物细胞培养能否像植物组织细胞培养那样，最终培养成生物个体？,1、概念： 动物细胞培养就是从动物有机体中取出相关的组织,将它分散成单个细胞,然后,放在适宜的培养

2、基中,让这些细胞生长和增殖.,2、原理：细胞增殖,3.培养过程：,胶原蛋白酶,（特点： 细胞贴壁生长成单层细胞。 有接触抑制现象）,原代培养,人们通常将动物组织消化后的初次培养称为原代培养。,会损伤细胞吗？,胃蛋白酶可以吗？,如：幼龄动物胚胎或组织,胶原蛋白酶,（特点： 细胞贴壁生长成单层细胞。 有接触抑制现象）,原代培养,传代培养,贴满壁的细胞用胰蛋白 酶处理,分瓶继续培养， 让细胞继续增值的过程。,3.培养过程：,如：幼龄动物胚胎或组织,细胞悬浮液,10代细胞,-传代培养-,正常的二倍体核型,遗传物质改变，不死，不接触抑制,遗传物质一般未变,分瓶,-原代培养-,保持,可能保持,改变,一、动

3、物细胞培养 1.概念与操作流程,胶原蛋白酶,为什么要分散？,幼龄动物,2.条件 (1)无菌、无毒：对_无菌处理，添加 _，定期更换培养液以清除代谢产物。 (2)营养：除正常的有机和无机营养外，加入_。 (3)适宜的温度和pH：温度为_(哺乳动物)，pH 为_。 (4)气体环境：含_的空气加_的混合气体。,培养液和所有培养用具,抗生素,血清、血浆,36.50.5 ,7.27.4,95%,5%CO2,（）大规模生产有重要价值的蛋白质生物制品 （疫苗、干扰素、单克隆抗体等）。,（5）解决为大面积烧伤病人移植皮肤问题。 （利用贴壁生长和接触抑制原理）,（）检测有关物质毒性(实验设计，镜检看细胞或染色体

4、变异多少)。,（）细胞的生理、药理、病理研究 （如用于筛选抗癌药物等，为治疗和预防癌症及其他疾病提供依据）,（2）为基因工程技术提供受体细胞.,3.应用：生物制品的生产、检测_、医学研究。,有毒物质,二、动物体细胞核移植技术和克隆动物 1.动物核移植概念 是将动物的一个细胞的_移入一个_中， 使其重组并发育成一个新的胚胎，这个新胚胎最终发育为_ _。如克隆动物,细胞核,去核的卵母细胞,动,物个体,2.原理,细胞核的全能性,克隆个体：多利 克隆细胞：细胞培养 克隆分子：PCR,3.类型,4.例：多莉羊/高产奶牛的克隆-无性生殖,体细胞核移植过程流程图：高产奶牛的克隆过程,受体细胞的遗传物质尽量去

5、掉或者破坏,体积大，易操作，含有促使细胞核全能性表达的物质和营养条件,10代以内,2.动物细胞核移植过程,供体体细胞,细胞培养,供体细胞核,重组细胞,卵巢卵 母细胞,去核,无核卵母细胞,胚胎,代孕母体,生出与供体遗传物质 基本相同的个体,囊胚或桑椹胚,技术手段？,两大阶段：核移植、胚胎移植,动物细胞培养、核移植、早期胚胎培养、胚胎移植等,3.应用 (1)加速家畜遗传改良进程，促进优良畜群繁育。 (2)保护_。 (3)生产医用蛋白:转基因，生物反应器 (4)作为异种移植的_。 (5)用于组织器官的_。 【点拨】核移植过程中供体理论上是提供细胞核，但操作过程中可以把整个体细胞注入去核的卵母细胞中去

6、，原因是体细胞体积相对较小，取核难度较大，另外细胞膜对核融合的障碍性较小。,濒危物种,供体,移植,植物组织培养、动物细胞培养和核移植的比较,与外植体完全相同的个体,相同分化程度的细 胞群,与供体基本相同的 个体,细胞的脱分化、再分化、 分化,细胞分化、细胞癌变,核融合、细胞分化,【高考警示钟】圈红字 1.植物组织培养和动物细胞培养过程都存在细胞的培养过程，但植物细胞可以先分裂再分化，而动物细胞可以不分化只分裂。 2.区分原代培养和传代培养的关键是是否分瓶培养。贴壁生长到一定程度需要用胰蛋白酶处理，然后再分瓶培养，原代培养结束，开始了传代培养。 3.植物组织培养成的植株与提供外植体的植株完全相同

7、，而动物细胞核移植形成的个体与供体大部分性状相同，也有部分性状与受体相同。,三、动物细胞融合与单克隆抗体 1.动物细胞融合 (1)概念：指两个或多个动物细胞结合形成_的过程。 (2)融合方法：_、_、电激等。 (3)意义：突破了_的局限,使_成为可 能，也为制造_开辟了新途径。,一个细胞,聚乙二醇(PEG),灭活的病毒,有性杂交方法,远缘杂交,单克隆抗体,原理：细胞膜的流动性,1、为什么选用小鼠骨髓细胞与B淋巴细胞融合？ 2、骨髓瘤细胞是癌细胞吗？ 3、整个制备过程经过哪两次筛选？ 4、杂交瘤细胞在小鼠的腹腔内培养与在体外培养有何区别？ 5、杂交瘤细胞在小鼠的腹腔内是否会造成小鼠死亡？ 6、小

8、鼠单克隆抗体能否用于人体疾病的治疗？,什么是单克隆抗体？制备过程中应该注意的问题（P53阅读）,单克隆抗体的制备（补充）,（灭活的仙台病毒，PEG）,(可产生某种抗体),（第一次筛选：具双亲细胞遗传物质的杂交瘤细胞）,细胞融合,细胞培养,提取,(第二次筛选：能无限增值和产生抗体),(某种),2.单克隆抗体 (1)制备 (2)优点：特异性强、_，可大量制备。 (3)用途：作为_；用于治疗疾病和_。,灵敏度高,诊断试剂,运载药物,B淋巴细胞,骨髓瘤细胞,培养、筛选,解释名字,P208.圈红字： 单克隆抗体的制备 (1)取相应B淋巴细胞前必须先注射相应抗原，否则不能获得单克隆抗体。 (2)细胞融合后

9、需经二次筛选： 第一次：在特定的选择性培养基上，未融合的亲本细胞(B淋巴细胞和骨髓瘤细胞)和融合的具有同种核的细胞(BB融合细胞、瘤瘤融合细胞)都会死亡，只有融合的杂种细胞(杂交瘤细胞)才能生长。这种杂种细胞的特点是既能迅速大量繁殖，又能产生单一的特异性抗体。,第二次：经选择性培养的杂交瘤细胞并非都是能分泌所需抗体的细胞(很多种杂交瘤细胞)，需经克隆化培养和抗体检测，经筛选后才可获得足够数量的能分泌所需抗体的细胞。,小结,两个过程,动物细胞培养过程,单克隆抗体制备过程,三个“一”,一个诱导细胞融合的新方法灭活病毒,一个新细胞杂交瘤细胞,一个优势单克隆抗体特异性强、灵敏度高,动物细胞融合与单克隆抗体 1.植物体细胞杂交与动物细胞融合的比较,细胞A、B,原生质体A、B,融合的原生质体,杂种细胞,杂种植株,细胞A、B,杂交细胞,多个相同杂交细胞,细胞