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文档简介

1、,专题2 微生物的培养和应用,课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数,1、筛选菌株,无机盐,碳源,氮源,凝固剂,尿素是唯一氮源，只有能利用尿素的 微生物才能生长。,计数板是一块特制的载玻片，上面有一个特定的面积（1 mm2）和高（0.1 mm）的计数室， 1 mm2的面积=25个（或16）中格*16个（或25）小格（即400个小格组成。）,计数室,操作：将清洁干燥的血球计数板盖上盖玻片，再将稀释的样品滴在计数板上，然后在显微镜下统计5个中格中的细菌数，并求出每个小格所含细菌的平均数，再按下面公式求出每毫升样品中所含的细菌数。,计算公式：每毫升原液所含细菌数每小格平均细菌数40010000稀释

2、倍数。,（二）统计菌落数目,2.稀释涂布平板法:,应用：,统计样品中活菌的数目,原理：,当样品的稀释度足够高时，培养基表面 生长的一个菌落，来源于样品稀释液中 的一个活菌，通过统计平板上的菌落数， 就能推测出样品中大约含有多少活菌。,注意：一般选择菌落数在30-300的平板进行记数。,（三）设置对照,主要目的是排除实验组中非测试因素对实验 结果的影响，提高实验结果的可信度。,二.实验的具体操作 .土壤取样 从肥沃、湿润的土壤中取样。先铲去表层土3cm左右，再取样，将样品装入事先准备好的信封中。 .制备培养基： 制备以尿素为唯一氮源的选择培养基。,二 实验设计,（2）样品的稀释,分离不同微生物采

3、用不同的稀释度原因：土壤中各类微生物数量不同。 (保持获得菌落数在30-300个的平板),注意：第一次做实验，稀释范围要放宽。,将待测样品经一系列10倍稀释，然后选择三个稀释度的菌液，分别取0.1 mL接种到已制备好的平板上，为使结果接近真实值，可将同一稀释度分别加到三个平板上,然后用无菌涂布棒将菌液涂布整个平板表面，放在适宜的温度下培养，计算出同一稀释度菌落平均数。,注意事项 为了保证结果准确，一般选择菌落数在30300的平板上进行计数。 为使结果接近真实值可将同一稀释度加到三个或三个以上的平皿中，经涂布，培养计算出菌落平均数。,计算公式 每克样品中的菌落数（CV）M，其中C代表某一稀释度下

4、平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积（mL），M代表稀释倍数。,某同学在稀释倍数为106 的培养基中测得 平板上菌落数的平均数为234，那么每克样 品中的菌落数是（涂布平板时所用稀释液 的体积为0.1ml） ( ) A. 2.34108 B. 2.34109 C. 234 D. 23.4,B,四、操作提示,无菌操作,做好标记,规划时间,结果： 酚红指示剂变_，初步鉴定该细菌能够分解尿素,分析：细菌能分解尿素产生_，使培养基呈碱性，氨增加pH升高，酚红由无色变为红色。,操作：在以_为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂,尿素,（鉴别培养基）,红色,氨,5、实验结果的鉴定,测定饮水中大肠杆菌数量的方法是将一定体积的水

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