动物细胞融合与单克隆抗体超好1.ppt

1、生命科学学院2010级生科一班续集却,大家好,2.2 动物细胞工程,2.2.2 动物细胞融合与单克隆抗体,杂合的原生质体,杂种细胞,愈伤组织,杂种植株,温故知新:,植物体细胞杂交过程,材料1: 1970年，有两位科学家做了一个人鼠细胞融合的实验，以证明细胞膜的流动性。那么，如何实现人鼠细胞的融合，动物细胞融合后还有什么用途呢？,人-鼠(想像图),一、动物细胞融合,1.概念：,动物细胞融合（cell fusion）也成细胞杂交，是指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程。,融合和形成的具有原来两个或多个细胞遗传物质的单核细胞，称为杂交细胞。,2、原理：,细胞膜的流动性,3.融合过程：,诱导融合

2、的方法？,诱导方法：,物理方法：,化学法：,生物法：,灭活的病毒,电激等,聚乙二醇（PEG),为什么灭活的病毒能作为诱导剂,3.融合过程：,灭活病毒诱导细胞融合的原理：,病毒表面含有的糖蛋白和一些酶能够与细胞膜上的糖蛋白发生作用，使细胞互相凝聚，细胞膜上的蛋白质分子和脂质分子重新排布，细胞膜打开，细胞发生融合。 灭活是指用物理或化学手段使病毒或细菌失去感染能力，但并不破坏这些病原体的抗原结构。,P52生物技术资料卡,植物细胞杂交与动物细胞融合的比较,细胞膜的流动性细胞的全能性,细胞膜的流动性,纤维素酶、果胶酶,胰蛋白酶,物理方法 （离心、振荡、电激） 化学方法（PEG）,物理、化学方法 灭活的

3、病毒,去除细胞壁后诱导原生质体融合,使细胞分散后诱导细胞融合,4.意义：,突破了有性杂交方法的局限，使远缘杂交（种间、属间、科间、动植物之间）成为可能。,5.应用：,最重要的用途是 制备单克隆抗体,动物细胞融合,物理法： 化学法： 生物法：,诱导融合的方法,原理：,细胞膜的流动性,过程：,离心、震动、电激,聚乙二醇（PEG),灭活的病毒,动、植物细胞融合的主要区别,用途：,最重要的用途是 制备单克隆抗体,1. 抗体由何种细胞产生？如何产生？ 2. 抗体的化学本质是什么？ 与抗原作用的特点？ 主要分布在哪里？ 3. 用传统的方法如何获得抗体？,(三)单克隆抗体,1. 抗体由何种细胞产生？如何产生

4、？ 2. 抗体的化学本质是什么？ 与抗原作用的特点？ 主要分布在哪里？ 3. 用传统的方法如何获得抗体？,(三)单克隆抗体,抗体的传统生产方法,从血清中分离抗体,该法制备抗体的特点： 产量低、纯度低，且抗体的特异性差、灵敏度低。,多种效应B细胞,动物体内,多种抗体,抗原,单克隆抗体的制备,单克隆抗体:单个细胞克隆产生的化学 性质单一特异性强的抗体,利用效应B细胞产生抗体的功能 利用肿瘤细胞无限增殖的特性 利用细胞融合的技术将两种细胞融合获得杂交瘤细胞 利用动物细胞培养技术大量培养杂交瘤细胞,设计方案：,1、过程,注射抗原,细胞融合、筛选,足够数量的、能产生特定抗体的细胞群,单克隆抗体,单克隆抗

5、体的制备,骨髓瘤细胞,免疫小鼠,（选择培养基）,（抗体检测）,1、（只考虑两两融合）融合细胞几种类型？ 2、本过程中进行了两次筛选，目的分别是什 么？第1次筛选要淘汰哪些细胞？ 3、杂交瘤细胞有何特点？ 4、本过程利用的哪些技术？,思考以下问题：,2、单克隆抗体的优点,特异性强、灵敏度高,3、单克隆抗体的应用,（1）作为诊断试剂最广泛应用 准确、高效、简易、快速,（如同位素标记单克隆抗体，可诊断肿瘤、心血管畸形等）,（2）运载药物,生物导弹=单克隆抗体+药物，治疗肿瘤）,(“生物导弹” 单抗导向，药物为弹头),看书上53页图，分组讨论，单抗制备过程分哪几步？请用箭头把以下代表单克隆抗体制备过程

6、步骤的图解的字母按正确顺序连接起来。顺序是？,有梦想，才会有创造！,已成功的动物细胞融合实例有很多，如人小鼠、人兔、人鸡、鼠兔、鸡鼠等上百种融合细胞。甚至已成功完成了酵母菌鸡 、人胡萝卜 等细胞的融合。,想了解更多信息，可通过网络、电视、杂志等途径关注细胞融合和单克隆抗体的最新信息。,生物种间杂交想像图,1、科学家用小鼠骨髓瘤细胞与某种细胞融合，得到杂交细胞，经培养可产生大量的单克隆抗体，与骨髓瘤细胞融合的是（ ） A.经过免疫的B淋巴细胞 B.没经过免疫的T淋巴细胞C.经过免疫的T淋巴细胞 D.没经过免疫的淋巴细胞,A,巩固练习,2.动物细胞融合与植物体细胞杂交的比较中，正确的是（ ） 诱导

7、融合的方法完全相同 B.所用的技术手段基本相同 C. 操作步骤基本相同 D. 都能形成杂种细胞,D,3. 单克隆抗体制备过程中培育的杂交细胞是（ ） A.由小鼠能产生抗体的B淋巴细胞与肝细胞融合 B.由小鼠一个B淋巴细胞诱导融合而成 C.由小鼠一个B淋巴细胞与肌瘤细胞诱导融合而成 D.由小鼠一个B淋巴细胞与骨髓瘤细胞诱导融合而成,D,4.只能使动物细胞融合的常用诱导方法是（ ） APEG B灭活的病毒 C电刺激 D离心,B,5. 单克隆抗体制备过程中，骨髓瘤细胞和B淋巴细胞诱导融合后，要用特定培养基筛选出杂交瘤细胞，在这种培养基上不能存活增殖的细胞是 （ ） 淋巴细胞 小鼠骨髓瘤细胞 B淋巴细

8、胞自身融合细胞 小鼠骨髓瘤细胞自身融合细胞 杂交瘤细胞 A. B. C. D.,C,6.“生物导弹”是指 （ ） A.单克隆抗体 B.杂交瘤细胞 C.产生特定抗体的B淋巴细胞 D.在单克隆抗体上连接抗癌药物,D,A 、 B细胞为动物细胞,请据图回答问题:,A细胞,B细胞,C细胞,D细胞,(1)若A细胞为骨髓瘤细胞B细胞为淋巴细胞,那么D细胞称为 细胞,D细胞具有两个亲本细胞的特征,一方面因具有骨髓瘤细胞的 性质,通过 方式产生大量细胞,我们称之为 过程;另一方面能分泌大量的抗体,我们把该过程分泌的抗体称 .,杂交瘤,连续分裂,有丝分裂,单克隆,单克隆抗体,练一练,(2)D细胞中产生的抗体其化学本质是 ,合成该物质的场所是 ,它是由 控制合成的,合成过程包括 和 两个重要步骤.,球蛋白,核糖体,基因,转录,翻译,(3)D细胞中产生的抗体具有 作用,与血清抗体相比其优越之处在