《诊断学》教学课件：病原微生物检查

1、,临 床 病 原 体 检 测,P444,临床病原体检查目的,明确感染是否发生以及病原体的类型。 提供体外微生物药物敏感实验的结果。 密切监视烈性传染病与新的传染病的发生，及时向行政主管部门报告。 配合相关机构进行流行病学调查。,本章主要内容 一、标本采集、运送和检测方法 二、细菌耐药性检查 三、临床感染常见病原体检查 四、院内感染,一、细菌检验标本采集与送检的基本原则,1.注明被检人姓名、性别、年龄、临床诊断、标本来源及检验目的、抗生素使用情况。 2.尽量在抗生素使用前采集标本。 3.在采集血液、脑脊液、穿刺液等标本时，应严格执行无菌操作，避免杂菌污染。 4.立即送到实验室，某些细菌还应注意保

2、温、保湿。 5.盛标本容器须经灭菌处理，勿用消毒剂。,二、常见标本的采集：血液与骨髓,1.采血部位多为肘静脉，切忌在静滴抗菌药物的静脉处采集血标本，无菌操作。 2.每次采血量为1020ml左右，婴幼儿15ml 培养基与血液之比以10:1为宜， 以稀释血液中的抗生素、抗体等杀菌物质。 3.选择发热初期、发热2小时或发热高峰期采血。对已用 抗菌药物而又不能停药者，应在下次用药前采血。 4.每例建议不同时间不同部位采血3次，注意区别 感染菌和皮肤污染菌。,尿液标本的采集,1.中段尿采集：最常用的方法。采样前须消毒尿道口将中段或近后段的尿液留于无菌容器中。 2.导尿管采集尿液：可减少污染，但易引起逆行

3、感染。不可从集尿袋下端管口留取标本。 3.膀胱穿刺采集尿液：病人耻骨上皮肤消毒后，以无菌针筒作膀胱穿刺。此法主要用于尿液厌氧菌培养或婴幼儿。,粪便标本的采集,1.挑取有脓血粘液部分的新鲜粪便约23克盛于灭菌容器中送检，也可用拭子挑取粪便插入Cary-Blair运送培养基中送检。 2.对不易获取粪便者，如婴幼儿可用直肠拭子采集送检。,呼吸道标本的采集,1.自然咳痰：清水反复漱口后用力咳嗽，从呼吸道深部咳出,以清晨第一口痰为好。 2.气管镜下采集法、气管穿刺法：下呼吸道病原学的理想标本，可减少污染，但病人有一定的痛苦，不易接受和推广。 3.应及时送检和处理(1小时)，放置时间长可导致肺炎链球菌，流

4、感嗜血杆菌等的检出率明显下降。,脑脊液等无菌体液标本的采集,1.严格无菌条件下采集标本。 2.尽量采集多的标本送检。 3.尽快送检或床旁接种可 提高阳性率，特殊标本 需保温送检。如脑膜炎奈瑟菌、 肺炎链球菌、流感嗜血杆菌等。,其它标本的采集(伤口、烧伤创面、脓肿等),1.无菌生理盐水清洗病灶表面后，用无菌拭子取病灶深部的脓液和分泌物，立即送检。 2.对未溃破的脓肿直接用碘酒、酒精消毒皮肤后，以无菌注射器抽取脓液送检，也可以切开排脓时用无菌拭子采样。 3.生殖道标本包括尿道口分泌物、外阴糜烂物、宫颈口分泌物、前列腺液等，应注意保温。,三、检查方法,1.直接涂片、镜检：初步诊断但阳性率低。如抗酸染

5、色找结核杆菌。,阴道毛滴虫,革兰氏染色,2.分离、培养、鉴定：金标准较费时（3天）,同时可进行药物敏感试验。 3.病原体核酸检测 PCR、分子杂交、DNA测序等。 4.血清学检查：如肥达氏试验、军团菌抗体检查等。抗体检测应进行双份血清检测，两次抗体效价相差4倍以上有现症诊断价值，但无早期诊断意义。 （但IgM有早期诊断意义）,本章主要内容 一、标本采集、运送和检测方法 二、细菌耐药性检查 三、临床感染常见病原体检查 四、院内感染,耐药性及发生机制,1.当前临床分离的常见细菌 (1)革兰阴性菌 大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、铜绿假单胞菌、阴沟肠杆菌、不动杆菌、嗜麦芽窄食单胞菌等，占70%。 (2)革

6、兰阳性菌 葡萄球菌、肠球菌、肺炎链球菌等，占30%。,滥用抗生素的后果耐药,2.耐药机制 (1)耐药基因的整合子系统 (2)产生灭活抗生素的水解酶或钝化酶 (3)改变抗生素作用的靶位 (4)细菌膜的外排泵出系统 (5)生物膜的形成，提高耐药性,3、药物敏感试验,(1)K-B纸片琼脂扩散法：最常用，操作相对方便 (2)稀释法 包括琼脂稀释法和肉汤稀释法 可获得最小抑菌浓度（MIC），但较麻烦 (3)E试验 ：结合稀释法和扩散法，价格昂贵,4.重点耐药菌株监测试验 (1)耐甲氧西林葡萄球菌(MRS)的筛选 (2)氨基糖苷类抗生素高耐药肠球菌 (HLAR)筛选 (3)耐青霉素肺炎链球菌(PRSP)筛

7、选 (4)染色体型-内酰胺酶AmpC酶的检测 (5)超广谱内酰胺酶(ESBL)检测,2.重点监测耐药菌株 (6)持续高产染色体型-内酰胺酶(AmpC)阴沟肠杆菌、产气肠杆菌、枸橼酸杆菌 (7)多重耐药的铜绿假单胞菌、不动杆菌、嗜麦芽窄食单胞菌 （8）泛耐药菌株 对现有抗菌药物都耐药 （9）“超级细菌” 如产NDM-1肠杆菌科细菌,5.病原菌耐药基因的检测 (1)适全生长缓慢的细菌如结核分枝杆菌 (2)对病原菌的耐药具有确证意义 (3)考核其它耐药性检查方法的金标准,可能成为未来耐药性检查的主导方法。,本章主要内容 一、标本采集、运送和检测方法 二、细菌耐药性检查 三、临床感染常见病原体检查 四

8、、院内感染,一、流行病学和临床类型,流行病学特征 新的病原体不断被发现，如SARS病毒、禽流感染病毒等。 老传染病死灰复燃 如结核、梅毒、霍乱等 多重耐药菌株不断出现 器官移植、放/化疗、侵入性医疗检查或治疗导致医院感染发生率不断增加,二、检查项目和临床应用,1.细菌感染：细菌培养是最重要的确诊方法 2.病毒感染：常用血清学检查，如HIV 3.真菌和寄生虫感染：形态学检查,本章主要内容 一、标本采集、运送和检测方法 二、细菌耐药性检查 三、临床感染常见病原体检查 四、院内感染,医院感染常见病原体检测,院内感染的概念：入院时无症状，在入院48小时后 发生的感染，或出院后48小时发生的感染。,患者

9、或陪护人员,医护人员,环境或医疗器械,三大环节：传染源，传播途径，易感人群,医院感染的特点 感染源和病原体：感染源主要是患者、医务人员、医院环境、医疗器械等。最常见病原体是细菌，以革兰阴性杆菌为主 易感人群：常见于免疫力低下的住院患者。多发生于具有基础性疾病或接受侵入性治疗的患者。 常见临床类型：下呼吸道感染（机械通气）为最常见医院感染类型，其它如尿路感染（插管）、手术切口感染、胃肠道感染、血液感染（静脉留置和透析常见）、皮肤和软组织感染等。 病原体：条件致病菌和机会致病菌 传播方式：接触传播多见,医院感染的常见细菌,1.铜绿假单胞菌 呼吸道和烧伤常见 2.大肠埃希菌 泌尿道、表浅切口感染、菌

10、血症常见 3.鲍曼不动杆菌 呼吸道感染常见 4.肺炎克雷伯菌 呼吸道感染 5.金黄色葡萄球菌 深部切口感染和皮肤、软组织化脓,掌握 临床常见病原体检测标本的采集运送原则、要求及方法； 熟悉 病原体耐药性发生机制、药敏试验及耐药菌监测试验； 掌握 院内感染。,本 章 重 点,实验诊断学考试,单选题70个 多选题 6题左右 名词解释 2个 简答题 1个 判断题 10个,大课课件上课内容为主，实验内容可能有部分牵涉。 实验操作不考核，实验报告成绩占总分的15%。,K-B 法,back,E-试验,1.测定方法 OX纸片法：苯唑西林 FOX纸片法：头孢西丁 2.MRS 对所有内酰胺类耐药,OX,OX,FOX,FOX,OX,MRS筛选试验,FOX,HLAR的筛选,CN120,AMP,1.测定方法 纸片法 2.CN120：高浓度庆大霉素 AMP：氨苄西林,ESBLs双纸片确证试验,1.CTX/CA比CTX抑菌 圈或CAZ/CA比CAZ 5mm即为阳性 2.若ESB