实验动物基本操作

1、动物实验基本操作技术,实验动物中心,为了确保实验研究结果的可靠性、准确性和可重复性，必须掌握规范的动物实验操作技术。 娴熟的动物实验操作技术和技巧，是实验研究的保证。 动物具有自卫能力，不会讲话，不领人情，更不会自动服从。 减少动物的应激反应或伤害，避免实验人员出现意外和受伤。,实验前准备,理论准备： 了解动物实验基础知识 查阅关于实验方法的参考文献 制定研究计划和方案 条件准备： 动物、仪器、器械、药品 实验场所和饲养场所,实验动物的抓取与固定 性别鉴定 年龄的大致判断 妊娠检查 分组与编号,本章主要内容,常规采血方法 给药途径与方法 麻醉方法 处死方法,第一节 实验动物的抓取与固定,原则：

2、 安静环境 动作轻柔和熟练 善待动物： 多一份爱就多一份收获,小鼠,大鼠,豚鼠,家兔,狗,猫,猴,第二节 性别鉴定,实验设计时有雌雄各半、雌雄不限等。 性成熟后，雌雄动物易区分： 外生殖器 第二性征 新生动物？冬季天冷时的兔子？,大鼠和小鼠,兔、豚鼠,第三节 年龄的大致判断,提供实验动物时要有动物出生和生长记录。根据卡片记录来准确判断年龄。 如无记录则要根据该动物的生长曲线、牙齿、爪子或者毛色特征来大致判断。,常用实验动物成年体重, 动物 小鼠 大鼠 豚鼠 家兔 猫 狗 体重 18-28g 180-280g 350-650g 2-3kg 1.5-2.5kg 9-15kg ,小鼠,ICR生长曲线

3、,CBA/J生长曲线,初生小鼠即可发声，嗅觉和味觉敏感,3日脐带脱落，开始长毛并出现胡须,46日双耳耸立,78日开始爬行，下门齿长出，被毛浓密,911日有听觉，被毛长齐,911日听觉发育完全，被毛长齐,1214日开眼，上门齿出，开始采食、饮水,能跳跃，能抓取东西,3周后可断奶独立生活,雄鼠：6.90g 雌鼠：6.40g,SD生长曲线,大鼠,初生仔鼠无毛、闭眼、耳孔闭合、6-7克,耳朵张开,开始长毛,被毛明显,8-10天下门齿长出,14-17天开眼,19天第一对臼齿长出,21天第二对臼齿长出、可以断乳,雄鼠：52g，雌鼠：50g,豚鼠,一般年幼豚鼠牙齿短而白，爪软而短，眼睛圆亮，行动活泼，被毛有

4、光泽，且紧贴身体 。而老年豚鼠则相反，牙齿和爪均较长，眼睛朦胧，行动迟缓。 可根据体重粗略地判断年龄。同日龄豚鼠，雌性体重略高于雄性。实验对年龄要求比较严格时，必须由卡片记录提供准确年龄。,兔,年龄判断的重要标志：门齿和爪。 门齿： 青年兔：洁白、短小、整齐。 老年兔：暗黄、厚长、不整齐、破损。 趾爪： 1岁，红多于白， =1岁，红色与白色相当， 1岁，白多于红色。 另外，家兔皮薄而紧，眼神明亮，行动活泼的为青年兔；皮厚而松，眼神颓废，行动迟缓的为老年兔。,狗,主要依据牙齿的生长情况、磨损程度、外形、 颜色等来综合鉴定: 2030 天开始长牙，第 10 个月牙 齿已全部长出。 随着年龄的增长，

5、乳齿脱落而长出恒齿。2-4个月，更换门齿，56 个月更换犬齿。 幼年狗的牙齿洁白而无磨损，12 岁时，下 颌的前门齿逐渐被磨损，23 岁时，前门齿的尖锐端被磨损而消失。而上颌 前门齿在 23 岁时才开始磨损。在 45 岁时，其尖锐端也被磨损消失，且 牙齿发黄。到 1012 岁时，牙根全部磨损。,第四节 妊娠检查,临床检查和实验室检查： 外部检查法:外表观察；试情法 摸胎法：兔、犬、猫 阴道检查法：大小鼠、豚鼠、地鼠 直肠检查法：大动物 超声波检查法 孕酮含量测定法 青蛙试验：猴,大小鼠阴道涂片检查,阴栓检查,第五节 分组与编号,动物实验之前，必须对动物进行随机分组，再编号标记。 随机化分组：避

6、免人为影响,一、分组,例1：将14只小鼠随机分成两组。 先将小鼠编为114号， 在随机数字表上任点一数，按任意方向连续抄14个随机数字。或者用计算器产生随机数字。 编排如下：,动物编号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 随机数日 16 22 77 94 39 49 54 43 54 82 17 37 93 23 归 组 B B A B A A B A B B A A A A 奇数代表A织，偶数代表B组 A组： 3 5 6 8 11 12 13 14 B组： 1 2 4 7 9 10 调整分组：接刚才随机数字23继续抄表得随机数字78，用78除以8（因为需要把A组

7、的8个数字调整掉一个），得余数6，所以把A组的第6个动物，即12号动物调整到B组。, 最终分组 A组： 3 5 6 8 11 13 14 B组： 1 2 4 7 9 10 12 注意： 如果A组多3个，则再取1个随机数字，除以7。 如果除尽，则写下除数当做余数。,例2：12只大鼠随机分为3组 大鼠编号112 在随机数字表上任点一数，按任意方向连续抄12个随机数字。 每个数分别用3除，记录余数（整除记下3） 根据余数分组 大鼠编号：1， 2， 3， 4， 5， 6， 7， 8， 9， 10， 11， 12 随机数字：08，27，01，50，15，29，39，39，43，79， 69，10 余数：

8、 2， 3， 1， 2， 3， 2， 3， 3， 1， 1， 3， 1 组别： B， C， A， B， C， B， C， C， A， A，C， A, A：3，9，10，12 B；1， 4， 6 C：2， 5， 7， 8，11 调整分组：接刚才随机数字10继续抄表得随机数字61，用61除以5（因为需要把C组的5个数字调整掉一个），得余数1，所以把C组的第1个动物，即2号动物调整到B组。 最终分组 A：3，9，10，12 B；1， 2 ，4，6 C：5，7，8，11,例2：6只大鼠随机将每只分为1组 大鼠编号16 在随机数字表上任点一数，按任意方向连续抄6个随机数字。 每个数分别用6、5、4、3、

9、2、1除，记录余数（整除记下除数） 根据余数分组:余数3则把C记下； 余数1 ，则把剩下的第1个字母A记下；第3个余数1，把剩下的第1个字母B记下 大鼠编号：1， 2， 3， 4， 5， 6 随机数字：33，46，10，52，68，07 除数： 6， 5， 4， 3， 2， 1 余数： 3， 1， 2， 1， 2， 1，,A,组别：,B,C,D,E,F,二、编号和标记,1、染色法：浅色动物 3.5-5苦味酸溶液（黄色） 0.5%中性红或碱性品红溶液（红色） 2硝酸银溶液（咖啡色，涂后光照10分钟） 煤焦油酒精溶液（黑色） 龙胆紫溶液（紫色）,2、打耳孔法：小型动物,3、剪趾法：小型动物,139

10、号？,4、剪尾法：大、小鼠，仅限与两组间区分 5、针刺法(纹身) ：刺号钳，中、大型动物 6、号牌法：耳标签、项圈、腿圈，中、大 型动物 7、剪毛法：大动物 8、 笼子标号,三、去毛,1、剪毛：弯头剪毛剪 2、拔毛：大小鼠尾静脉、家兔耳缘静脉注射 3、剃毛：将剃毛部位先用剪刀粗剪一遍，蘸温肥皂水润湿，用剃刀顺着被毛方向剃毛；如用电动剃毛推剪，则逆被毛向剃毛。,4、化学脱毛： 常用脱毛剂 8%硫化钠水溶液 硫化钠3份，洗衣粉1份、淀粉7份，加水调成糊状 硫化钡50克，氧化锌25克，淀粉25克，加水100毫升调成糊状 硫化钠10克，生石灰15克，加水到100毫升，适合犬和其他大动物。,第六节 常规

11、采血方法,正式实验前后，常需采血测定生化指标。,1、大小鼠： 眶静脉丛（窦）： 少量多次采大小鼠血。 小鼠0.20.3ml，大鼠0.40.6ml 摘眼球：用于一次大量采小鼠血，可得到45体重的血量。 尾静脉：用于少量多次采大小鼠血。,眶静脉丛采血,摘眼球采血,尾静脉采血,剪头：用于一次性大量采小鼠血，可得到0.51.0ml的血量 大血管：包括颈动脉（静脉），股动脉（静脉），腋下动脉（静脉），腹主动脉。此方法不常用于小鼠采血，而多用于大鼠一次性大量采血。可得5ml左右血量。 心脏采血：小鼠少用，可用于大鼠一次性（开胸，右心室）或多次采血（不开胸）。,鼠断头器,2 、家兔 ： 耳缘静脉：可反复采血

12、，每次510ml。 耳中央静脉：可反复采血，每次1015ml。,心脏采血 可用于一次性（开胸）或 多次采血（不开胸）。 一次性开胸采血可得到80100ml血量。 颈动静脉采血： 用于一次性采血，需要手术，可得血量80100ml。,3、豚鼠： 心脏采血：可用于一次性（开胸）或多次采血（不开胸）。 一次性开胸采血可得到510ml血量。 背跖静脉采血：用于少量反复采血。,4、犬猫：前肢内侧头静脉、后肢外侧小隐静脉。也可颈静脉（动脉）或心脏采血 5、猪：前腔静脉采血或耳大静脉采血 6、羊：颈静脉采血 7、猴：前肢头静脉、后肢皮下静脉或耳缘静脉等。 8、禽类：翼下静脉,常用实验动物的最大安全采血量与最小

13、致死采血量,采血场所有充足的光线；室温夏季最好保持在2528，冬季，1520为宜； 采血用具有采用部位一般需要进行消毒； 采血用的注射器和试管必须保持清洁干燥； 若需抗凝全血，在注射器或试管内需预先加入抗凝剂。,采血时要注意,常用抗凝剂： 肝素：抑制凝血酶活力，阻止血小板凝集。纯品肝素1mg125U，10U20U抗1ml血凝集，但通常应用23倍剂量。 用法：可配成1%肝素溶液，用时取0.1ml于试管内，100烘干，每管可抗凝510ml血。或用1%肝素溶液湿润采血注射器。 肝素可改变蛋白质等电点，当用盐析法分离蛋白作分类测定时，不可用肝素抗凝。,枸橼酸钠：使凝血必需的钙离子失活。常用35%水溶液

14、，碱性较强。 草酸盐合剂：草酸铵1.2g，草酸钾0.8g，福尔马林1.0ml，加蒸馏水至100ml。使凝血必需的钙离子失活。每毫升血加草酸盐合剂0.1ml。 氟化钠：每毫升血加6mg。,其他体液采集,1、胸水、腹水采集：穿刺 2、消化液采集：唾液，胃液，胰液，胆汁 3、精液采集：中、大动物用假阴道，小动物穿刺附睾来采集精液。 4、脑脊液采集：手术或小脑延髓池抽取 5、骨髓采集：大动物活体穿刺，小动物处死后取股骨或胸骨骨髓,6、尿液采集： 代谢笼收集 导尿管采集 膀胱穿刺 压迫排尿,第七节 给药途径与方法,在动物实验过程中，应根据不同的实验目的、动物种类、药物类型来决定动物的给药途径与方法。,1

15、、自动口服：加入饲料或饮水 2、投喂药片：掰开口，放到舌根部 3、灌胃（i.g) 4、直肠给药 5、呼吸道给药 6、滴鼻 7、点眼,8、经皮肤给药：常用于检测药物、毒物、化妆品等的透皮吸收、局部作用、致敏作用等。家兔和豚鼠选择脊柱两侧皮肤，大小鼠常采取浸尾方式。 9、皮内注射(i.d)：一般用于接种或过敏实验。将药液注射在真皮和表皮之间。,10、皮下注射(s.c)： 颈背部、腋下、腿、侧腹。,11、肌肉注射(i.m)：股内侧部肌肉。,12、腹腔注射(i.p)：下腹部腹中线两侧,13、静脉注射(i.v)： 小鼠：尾静脉 大鼠：尾静脉、阴茎静脉、舌下静脉、浅背侧跖静脉 大小鼠尾部有4对动静脉，其中

16、背腹各有1根动脉、两侧各有1根静脉很明显。,尾静脉注射,阴茎静脉注射,舌下静脉注射,猴的后肢皮下静脉注射,浅背侧跖静脉,豚鼠：浅背侧跖静脉、耳静脉注射 家兔：耳静脉注射 猪：耳缘静脉,猫、狗：前肢内侧头静脉、后肢外侧小隐静脉注射,14、脑腔注射 15、关节腔注射： 16、椎管内注射：注射入蛛网膜下腔 17、淋巴囊内注射：蛙和蟾蜍,几种动物不同给药途径的常用注射量（毫升）,第八节 麻醉方法,对动物实施麻醉，是动物福利的措施。 如不实施麻醉，动物严重应激，影响实验结果，甚至死亡。 动物清醒状态下，可能会伤及人员。,1、麻醉方法： 全麻 吸入麻醉，静脉注射、腹腔注射。 局麻 浸润麻醉。根据手术，按皮

17、下、筋膜、肌肉、腹膜、骨膜等顺序逐步深入注射到术野周围。,常用麻醉剂的用法及剂量,使用全身麻醉剂的注意事项 动物禁食1012h，麻醉前动物禁用泻药 ，麻醉后动物必须保持呼吸道通畅和暴露组织( 眼球、肠等 ) 的湿润和营养。 动物在麻醉期体温容易下降，要采取保温措施。 注射麻醉剂必须缓慢，同时观察肌肉紧张性、角膜反射和对皮肤夹捏的反应，当这些活动明显减弱或消失时，立即停止注射。 配制的药液浓度要适中，不可过高，以免麻醉过急；也不能过低，以减少注人溶液的体积。 犬、猪、猴等大动物可在麻醉前给予一些药物以减少动物紧张，减少支气管分泌。,2局部麻醉 猫的局部麻醉一般应用0.51.0%盐酸普鲁卡因注射。粘膜表面麻醉宜用2%盐酸可卡因。 兔在眼球手术时，可于结膜囊滴入0.02%盐酸可卡因溶液，数秒钟即可出现麻醉。 狗的局部麻醉用0.51%盐酸普鲁卡因注射。眼鼻、咽喉表面麻醉可用2%盐酸可卡因。,4、实验动物的急救 呼吸停止： 人工呼吸 尼可刹米：适用于各种原因的中枢性呼吸衰竭，每次0.25g0.5g，静脉注射。 戊四氮：对抗巴比妥类和氯丙嗪过量导致的呼吸衰竭，每次0.1g，静脉注射或心内注射。 美解眠：对抗巴比妥类和水合氯醛中毒，每次50mg，静脉缓慢注射