自身抗体的实验室检测及临床意义.ppt

1、自身抗体的实验室检测及临床意义,北京友谊医院风湿科 宋淑菊,主要内容,自身抗体的概念 自身抗体的分类 自身抗体的命名 自身抗体的检测方法 常见的自身抗体,自身抗体的概念,各种原因造成的机体B细胞产生的针对自身组织成分的抗体，称为自身抗体（autoantibodies）。 自身抗体可以是生理性的，如针对衰老或死亡的自体细胞，机体产生少量的自身抗体，以便被脾、肝及单核吞噬细胞系统的巨噬细胞吞噬，维持机体内环境的生理稳定； 自身抗体也可以是病理性的，引起自身免疫病。,自身抗体的分类,按照自身抗原在体内分布的不同可分为： 器官/组织特异性自身抗体 非器官/组织特异性自身抗体 按照检测自身抗体所用的基质

2、不同可分为： 细胞抗体（以游离的细胞为实验基质） 细胞非特异性自身抗体，如抗核抗体 细胞特异性自身抗体，如ANCA、抗血小板抗体、抗红细胞抗体 组织抗体（以动物组织切片为实验基质）,自身抗体的命名,以首先被检测到该抗体的患者名字的缩写命名：如抗Sm、抗Ro、抗La抗体 以相关疾病的名字的缩写命名：如抗Scl-70、抗SS-A、抗SS-B抗体 以抗原的化学性质进行分类命名：如抗DNA、抗RNP抗体 以抗原的部位进行命名：如抗板层素抗体、抗核膜抗体。,自身抗体的检测方法,对流免疫电泳、免疫双扩散 免疫荧光检测法 免疫印记法 酶联免疫吸附检测法（ELISA） 放射性核素法 酶免疫斑点技术 免疫沉淀法

3、,间接免疫荧光方法,金标法,免疫双扩散法,ANA (anti-nuclear antibodies),免疫印记法,ENA (extractable nuclear antigen),间接免疫荧光法,自身抗体,病人血清(一抗),玻片,二抗,荧光抗体,荧光显微镜下阅片,ANAHep-2细胞 dsDAN抗体短膜虫 SMA大鼠胃组织 AMA大鼠肾组织,间接免疫荧光法,底物,病人血清,金标记的抗体,dsDNA抗原,阴性,阳性,金标法,抗原,1:4,1:16,1:32,1:64,病人血清,标准抗体,免疫双扩散,琼脂板,不同分子量的抗原,病人血清,酶标抗体,显色剂,判断结果,免疫印记法,间接免疫荧光法,细胞

4、核阳性 核仁阳性 细胞浆阳性 分裂期细胞阳性,细胞核阳性,细胞核均质型（Homogeneous）：抗dsDNA、组蛋白抗体、核小体抗体 细胞核周边型（Membranous）：板层素抗体 细胞核颗粒型（Speckled）： 粗颗粒：抗Sm、RNP抗体 细颗粒：抗SSA、SSB抗体,抗dsDNA抗体,荧光模式： 绿蝇短膜虫：动基体均质的或边缘亮度增强的荧光。 Hep-2细胞：细胞核的均质型荧光。,抗dsDNA抗体,自身抗原：位于DNA脱氧核糖磷酸框架上。 临床意义：对系统性红斑狼疮（SLE）特异性高。抗体滴度与疾病活动性存在相关性，因此抗体滴度的检测可为监控治疗提供有用的依据。,抗RNP/Sm抗体

5、,荧光模式： Hep-2片：细胞核粗颗粒，核仁阴性。 肝组织切片：同上。 荧光法不能区分抗RNP和抗体Sm。,抗RNP/Sm抗体,自身抗原：抗原RNP和Sm属于一组小核糖核蛋白（snRNP），由低分子量的RNA和多种蛋白质组成，RNA中尿苷（U-RNA）含量较高。 临床意义：高滴度的抗RNP抗体为 混合结缔组织病（MCTD）的特征，发生率为95100%。也可出现于SLE，但总是与抗Sm抗体同时出现。抗Sm抗体对SLE具有高度特异性，发生率为2040%。,抗SSASSB抗体,荧光模式 Hep-2片：细胞核呈细颗粒荧光，核仁不发光。 肝组织片：细颗粒荧光。,抗SSASSB抗体,自身抗原：SSA抗原

6、是一个小核糖核蛋白，由一个RNA分子和两种不同的蛋白质组成。蛋白质的分子量为52KD和60KD。抗体直接针对蛋白质的抗原决定簇。SSB抗原是分子量为48kD的磷酸化蛋白。 临床意义；最常见于干燥综合征（SS）,也见于SLE、原发性胆汁性肝硬化（PBC），偶见于慢活肝。抗SSA抗体在新生儿红斑狼疮的发生率几乎为100%。,核仁阳性(Nucleolar),核仁荧光增强，核浆均质型-Scl-70抗体。 核仁均质型-PM-Scl及其他抗原抗体。 核仁细颗粒型-原纤维蛋白抗体。 核仁粗颗粒型-RNA多聚酶-1抗体。,抗Scl-70抗体,荧光模式： Hep-2片：细胞核几乎均质的荧光，核仁荧光加强而且也为

7、均质型，胞浆无荧光。 肝组织片；细胞核颗粒或均质型荧光，常见到细胞核荧光。,抗Scl-70抗体,自身抗原：为DNA拓扑异构酶1，分子量为100KD。在DNA双链的复制和转录中起作用。 临床意义：2570%的系统性硬化症（PSS）弥漫型患者阳性，局限型硬皮病患者阴性。,细胞浆阳性,胞浆均质型-抗核糖体抗体 细颗粒-抗Jo-1抗体 胞浆颗粒型 粗颗粒-AMA抗体 滴状点状-溶酶体抗体 核周颗粒-高尔基体抗体 胞浆纤维型 细纤维-波形蛋白抗体 环状纤维-原肌球蛋白抗体 针状纤维-肌动蛋白抗体,抗核糖体抗体,荧光模式： Hep-2：胞浆细颗粒到均质状、非常致密的荧光 。 肝组织片：岛状荧光。 临床意义

8、：SLE的特异性抗体，与精神症状有关。,抗Jo-1抗体,荧光模式： Hep-2：胞浆颗粒到细块状荧光。 肝组织片：胞浆中弱荧光。 自身抗原：组氨酰tRNA合成酶。 临床意义：见于PM，发生率2535%。,抗线粒体抗体,荧光模式： Hep-2：胞浆内粗的颗粒型荧光。 大鼠肾组织切片：肾小管明显荧光，肾小球荧光较弱。,抗线粒体抗体,自身抗原：位于真核细胞线粒体膜的内面。线粒体自身抗原为2-氧酸脱氢酶复合体的亚单位，为一组自身抗原，其中与PBC有关的包括： （1）丙酮酸脱氢酶复合体（PDC） （2）支链2-氧酸脱氢酶复合体（BCOADC） （3）a-酮戊二酸脱氢酶复合体（OGDC）,抗线粒体抗体,临

9、床意义：AMA-M2对PBC具有诊断意义。 AMA亚型与疾病的相关性： AMA-1：梅毒、干燥综合征 AMA-2：PBC AMA-3：药物性红斑狼疮 AMA-4：PBC与AIH重叠 AMA-5：SLE、自身免疫性溶血性贫血 AMA-6：异烟肼引起的药物性肝炎 AMA-7：AIH AMA-8：AIH、闭塞性血栓性血管炎 AMA -9：药物性肝炎 AMA-10：SLE,分裂期细胞阳性,染色体阳性-染色体相关抗体，相关疾病？ 纺锤体纤维阳性-纺锤体纤维抗体，如燕麦细胞型支气管肺癌 中间体阳性-中间体抗体，相关疾病？ 细胞两极阳性-中心粒抗体，相关疾病？ 着丝点阳性-抗着丝点抗体,抗着丝点抗体(ACA

10、),荧光模式： Hep-2：细胞核细的、相同大小的颗粒荧光，分裂期颗粒荧光带状位于细胞中间。 肝组织片：分布于细胞核的1020个颗粒，荧光弱，易被忽略。,抗着丝点抗体,自身抗原：着丝粒中的三种不同的蛋白质：着丝点蛋白A、B、C，主要抗原为着丝点蛋白B。 临床意义：对进行性系统性硬化症亚型（CREST综合征）有诊断意义。阳性率8095%。还可见于PBC、SS等。,器官/组织特异性自身抗体,抗中性粒细胞胞浆抗体（ANCA） 抗平滑肌抗体 抗角蛋白抗体 抗肝肾微粒体抗体 抗肝细胞膜抗原抗体 抗可溶性肝抗原抗体 抗肝特异性蛋白抗体,抗中性粒细胞胞浆抗体（胞浆型）cANCA,荧光模式： 猴肝：肝血窦区粒

11、细胞强荧光，而肝细胞阴性。甲醛固定的中性粒细胞：胞浆内粗大到细的荧光颗粒。,抗中性粒细胞胞浆抗体（胞浆型）,自身抗原：为丝氨酸蛋白酶-蛋白酶3（PR3）。该靶抗原为可溶性蛋白，存在于正常中性粒细胞的嗜苯胺蓝颗粒中。 临床意义：cANCA可见于多种系统性血管炎。主要见于Wengeners肉芽肿，约占ANCA阳性率的8095%。cANCA被认为是活动性Wengeners肉芽肿和微多动脉炎的特异和敏感的标志性抗体。还见于Churg-Strauss综合征。,抗中性粒细胞胞浆抗体（核周型）pANCA,荧光模式： 乙醇固定的中性粒细胞：细胞核周围平滑的带状荧光，细胞核阴性。 猴肝：肝血窦区粒细胞强荧光，而

12、肝细胞阴性。,抗中性粒细胞胞浆抗体（核周型）,自身抗原：主要抗原为髓过氧化物酶（MPO），其他抗原还有白细胞弹性蛋白酶，组织蛋白酶G、溶菌酶及乳铁蛋白等。 临床意义：见于多种系统性血管炎。可见于Wengeners肉芽肿、微多动脉炎、Churg-Strauss综合征、炎性肠病、自免肝、系统性风湿病（RA、SLE、SS、PM/DM）。,抗平滑肌抗体（SMA）,荧光模式： 大鼠胃组织，呈现肌膜、黏膜肌层和肌膜腺体间收缩纤维的明显细胞浆荧光 。 大鼠肾组织，肾小管细胞内原纤维、肾小球膜细胞及血管肌层的荧光。,抗平滑肌抗体（SMA）,自身抗原：主要的靶抗原为肌动蛋白，肌动蛋白可以单体（G-肌动蛋白）或聚

13、合体（F-肌动蛋白）形式存在于微丝中， F-肌动蛋白自身抗原与自免肝关系密切，而G-肌动蛋白自身抗原则与酒精性肝硬化有关。 临床意义：见于自身免疫性肝炎、PBC、酒精性肝硬化。,抗角蛋白抗体（AKA）,荧光模式： 大鼠食管，仅限于上皮角质层的较强的线性分层的均质荧光。,抗角蛋白抗体（AKA）,自身抗原：丝聚蛋白（filaggrin）为AKA的靶抗原。 临床意义：见于RA，阳性率3659%，特异性9599%。还是一个潜在的预后标志，高抗体滴度可能预示着较严重的RA类型。,抗肝肾微粒体抗体（LKM）,有三种荧光模式： LKM-1：肝细胞胞浆明显荧光，呈细颗粒到均质状，肾脏近近端肾小管有荧光。 LK

14、M-2：门静脉周围的肝组织荧光比其他部位强，肾脏近近端肾小管有荧光。 LKM-3：肝和肾均为阴性，灵长类睾丸间质细胞荧光明显。,抗肝肾微粒体抗体（LKM）,自身抗原： LKM-1：细胞色素P450 D6，为50KD蛋白。 LKM-2：细胞色素P450同工酶，药物替尼酸的结合部位 LKM-3：UDP葡萄糖醛酸基转移酶，为55KD蛋白。 临床意义：自免肝按血清学分型可分为三型 型：出现ANA、SMA、肝细胞膜抗体（LMA抗体）为特征。 型：以出现LKM抗体为特征。 型：以出现可溶性肝抗原抗体（SLA抗体）为特征。 LKM-1为型自免肝的血清学标志。LKM-3抗体见于1015的慢性丁型肝炎患者。,抗肝细胞膜抗原抗体（LMA）,荧光模式： 肝细胞膜的线性荧光。,抗肝细胞膜抗原抗体（LMA）,自身抗原：肝细胞膜抗原，可能为26KD蛋白。 临床意义：为非疾病特异性，最常发生于病毒性及原发性自身免疫性肝炎型，在非肝病患者，其发生