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文档简介

1、实验二叶绿体的分离及离体叶绿体的还原活性,1,一、实验目的,学习制备具有活性的离体叶绿体和测定离体叶绿体还原活性的方法。 通过学习分离制备叶绿体的技术方法，加深对希尔反应的理解及对光反应的认识。,2,1、叶绿体的分离: 采用离心分级分离。 即利用叶绿体的直径和沉降系数与其他细胞器不同的特点，先用低速离心除去细胞碎片，后用高速离心沉降叶绿体。,二、实验原理,3,2、希尔反应（Hill reaction）,离体的完整叶绿体，在合适的氧化剂（ 2.6-二氯吲哚叮酚 ，一种蓝色染料） 存在下，当被照光时，可以使水光解释放氧气，接受电子和 H+后被还原成无色。 实验中可以直接观察颜色的变化，也可用分光光

2、度计对还原量进行精确测定，该变化在45min内呈线性关系。,4,三、实验材料,菠菜叶片,5,四、设备与试剂,分光光度计，离心机，照光装置，试管，移液管，烧杯，纱布，研钵等。 NaCl、Tris缓冲液、2.6-二氯吲哚叮酚,6,五、实验步骤,1. 提取叶绿体： 称鲜菠菜叶5g，加10 ml 0.35M NaCl、1ml Tris缓冲液、石英砂，研磨。 匀浆用脱脂棉过滤。,1,2,3,4,5,7,用天平将各组滤液调平。 1000转/分离心5分钟，取上清液； 3000转/分离心5分钟，去除上清液，保留沉淀。,8,在沉淀中加入5ml NaCl，搅匀，得到叶绿体悬浮液。,9,2.希尔反应测定,10,将三支试管中的溶液倒入对应的比色杯中，以3号试管调零，620nm处比色。,11,将比色杯置于光源60cm处照光。 每隔1分钟快速读下光密度的变化，连续进行56次读数。,12,六、实验结果,请对结果作出解释,1,2,3,13,七、注意事项,2.6-二氯吲哚叮酚 必须在煮沸加热后滴加。 溶液加入比色杯就开始计时。 每次测光时都应调零和百分比。,14,八、思考题,1.

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