影响ELISA试验因素ppt课件

1、,实验过程中应注意的问题,1,试剂保存及使用前准备,试剂盒保存于2-8 使用前应先将检测试剂盒放置室温平衡15-30分钟，保证酶等液体的初始反应温度及活性剂的溶解。 真空包装袋漏气一般不影响试剂盒质量，如须拼组板条于板架上，必须保证板条放平，以免影响洗板机的操作。,2,不加抗凝剂的标本处理,标本采集后，应先将标本度放置分钟 标本应进行离心：采用转速离心1520分钟 3.取上清液加样.,3,加抗凝剂的标本处理,标本采集后，应先将标本度或者室温放置一定时间 标本应进行离心：采用转速离心1015分钟 3.取上清液加样.,4,标本处理的意义,标本处理过程严谨，可最大限度避免由 于标本因素造成的非特异反

2、应对实验的 影响，最大限度避免重复实验,增加不 必要的工作量.,5,试剂,1.观察外包装，内组份有无漏液。 2.仔细阅读说明书，严格按照试剂说明书进行操作。,6,加 样,.仔细注意加样全部过程. 2.加样后及时放入孵育箱，避免包被板在室温放置时间过长。 3.标本较多时，请分批操作。,7,温 育,1.按规定加盖封板膜。 2.按说明步骤严格控制孵育时间。 3. 严格控制温育仪器（水箱、温箱、全自动酶免）的温度，建议在仪器内放置测量工具（全自动酶免除外）。,8,洗 板 1,1.要有适当的浸泡时间（3060秒）。 2.洗板机吸液要彻底,残余量低于5ul。 3.洗板次数应与说明书要求一致，尽量不要私自

3、增加或减少洗板次数。,9,洗 板 2,4.洗板后，拍干包被板，应垂直扣在备好的 干净吸水纸或毛巾上，且每次拍板应换掉 前次拍过的毛巾或吸水纸,避免交叉污染. 5.洗液应调至适当的注出量，每孔应在 350ul-450ul之间，但不要溢出孔外。,10,洗 板 3,6.稀释洗液应用蒸馏水或去离子水，pH 值不宜过酸或过碱，保证配出的洗液 pH值7.40.2，水质宜新鲜，长菌或 有沉淀不宜使用，水保存应用非金属 容器。 7.稀释好的洗液4度情况下可保存3-5天. 8.由于洗涤液系高浓度磷酸盐，可能会形成 结晶，配制洗液时应完全溶解.,11,显 色 1,1.试剂显色时先加A液，后加B液，二者不要颠倒.

4、2.前后加入的间隔时间不要超过10分钟. 3.若把A液和B液先混和，再加样显色，需要求二 者等体积混合。 4.底物溶液B应是澄清透亮，如倒出发现溶液已呈 微兰色，表明液体已受污染，应废弃不用。,12,显 色 2,5. 将加样槽清洗干净。 6.A、B液应避免接触污物 。 7.不同厂家显色液不得混用。,13,终止和读数,1加完终止后30分钟内读取数据。 2读板时板底如果不清洁，就会导致所读的 数据不准确，所以在读数前尽量保证酶标 板的底部是清洁的。,14,灰区的定义 灰区又称灰色带反应。就是把 OD值在Cut off 值正负10%这个范围内的标本称为灰区标本。 这个范围称为灰区。,15,灰区的处理

5、,1.灰区是客观存在的，没有不存在灰区的试剂。我们只是尽量减少灰区的出现比例。 2.减少灰区最有效的方法就是尽量将板洗涤干净。 3.严格控制温浴时间。,16,问题1：只有单次实验出现灵敏度偏低或 者偏高。,处理意见：重新实验，并在实验中注意试 剂盒的温度平衡、温育的时间、 显色的时间等影响因素的控制 。,17,问题2：质控品漏检,处理意见：检查质控品是否有反复冻融 的情况、质控品是否有批内 差异、质控品是否为4摄氏度 久置。,18,问题：日常使用中出现弱阳性标本漏检。,处理意见：A标本本身由于各种因素影响而表现 为弱阳性，实际上为阴性标本。 B由于标本自身含量较低，易随实 验水平位试剂盒调整等

6、因素波动， 对这部份标本的处理应格外慎重， 有条件的地区应进行确证实验。,19,处理意见：C注意检查实验中所用的仪器设备 是否定期校准。 D注意检查实验中所用的板、酶标 试剂的批号是否在有效期之内.,20,问题：质控品灵敏度偏高 。,处理意见：卫生部临检中心的质控品存在 批间批内差异。 实验室相关条件改变导致质控变化。,21,问题：多次实验灵敏度一直偏低。,处理意见：A保存环境不规范。 B孵箱温度不足。 C温育时间不足。,22,问题：单次实验中出现假阳性,处理意见：注意实验过程中的影响因素，特 别是实验中的洗板应设置浸泡 30-60秒时间。,23,问题：临床实验中出现假阳性偏高。,处理意见：A注意检查洗涤液中结晶部份是否 完全溶解。 B注意检查实验中所使用的仪器设 备是否定期校准 。 C注意检查实验中所用的板、酶标 试剂的批号是否相同，不同批号 试剂不得混用。,24,处理意见：D假阳性标本表现在临界值附近较 多，通常与当时实验的水平有关， 注意检查实验条件的波动 。 E避免加样时间过长 。 F由于试