鹿衔草中总黄酮提取工艺的优选

1、鹿衔草中总黄酮提取工艺的优选朱玲（渭南职业技术学院，陕西 渭南 714000）【摘要】目的:研究鹿衔草总黄酮的最佳提取工艺。方法:采用单因素和正交实验法,以总黄酮的提取率为考察指标，综合探讨了提取条件对总黄酮提取率的影响。结果：鹿衔草总黄酮最佳提取工艺为以10倍80乙醇为提取溶剂，采用热回流提取法，提取时间为2小时，提取1次。结论: 优选得到的提取工艺合理、操作可行、质量可控。【关键词】鹿衔草;总黄酮;正交实验Zhuling(Weinan Vocational and Technical College, Weinan 714000) Abstract to Study of flavonoi

2、ds deer bit grass extract craft .Methods: The single factor and orthogonal experimental method, with the yield of flavonoids, comprehensive index for extracting conditions are discussed for active substances extracted. Results: Deer bit grass flavonoids from 10 times for 80% of ethanol extraction so

3、lvent, using the hot reflux extraction, extracting time for 2 hours, extraction. Conclusion: Get the extraction process of reasonable selection, quality control and operation feasible. Key word Deer hoof grass, Flavonoids, The orthogonal experiment,作者简介：朱玲（1985）,女，陕西渭南人，陕西中医学院2010级中药学硕士研究生。研究方向：中药药剂

4、学。鹿衔草（别名鹿寿草、破血丹、鹿含草）为鹿蹄草科鹿蹄草属多年生草本植物。其性平，味微苦涩，具有调经活血、收敛止血、祛风除湿、补肾壮阳的作用，用于治疗风湿麻痹、腰膝无力、月经过多、久劳咳嗽等疾病。鹿衔草总黄酮为其主要有效成分。本试验以鹿衔草总黄酮为目的物,以总黄酮含量为考察指标，优选其最佳提取工艺。以期为鹿衔草总黄酮的开发利用提供依据。1 仪器、试剂与试药11仪器：UV1102型紫外-可见分光光度计（上海天美科学仪皿有限公司）；电子天平GB-204（MADE IN SWITZERL AND）; 旋转蒸发仪RE-52（上海亚荣生化仪器厂）；SB5200DT超声波清洗器(宁波新芝生物科技股份有限公

5、司)1.2 试剂与试药：乙醚，乙醇，亚硝酸钠，硝酸铝，氢氧化钠。均购自西安市恒茂化玻实化有限公司；大孔树脂HPD-826、HPD-722、AB-8、D-101、ADS-17均购自沧州宝恩化工有限公司，槲皮素标品（批号：100081-200406）购自西安药检所。2 实验方法2. 1.标准曲线的制备分别精确称取干燥至恒重的槲皮素标品2、4、6、8、10mg于10ml容量瓶中，加95%的乙醇使溶解，再加50%的乙醇至刻度，摇匀，即得02、0.4、0.6、0.8、1.0mg/ml的标准溶液。精密吸取各标准溶液1ml分别置于10ml的容量瓶中，各加50%的乙醇溶解使成5ml,精密加5%的亚硝酸钠0.3

6、ml,摇匀放置6分钟，加10%硝酸铝0.3ml，摇匀放置6分钟，加4%的氢氧化钠4ml，再分别用50%的乙醇定容至刻度，摇匀，静置15分钟，以第一份为空白，于510nm波长下测其吸光度。得总黄酮标准曲线：A=0.6785C-0.0463(r=0.9998),结果表明总黄酮在0.21.0 mgml-1时进样量与峰面积呈良好线性关系。2.2提取方法的选择称1g鹿蹄草药材粗粉3份，分别用50ml的乙醚回流2h除去叶绿素，放冷过滤，滤渣分别采取渗漉法和热回流法为提取方法，渗漉法用80%的乙醇30ml，液流速控制约为3ml/min，收集渗漉液，水浴蒸干，定容于10ml的容量瓶中;热回流法用80%的乙醇回

7、流2次，每次两小时，过滤后滤液蒸干，定容于10ml的容量瓶中。按标准曲线的制备项下方法，测定含量。结果见表1表1提取方法的考察结果类 型总黄酮含量（%）123平均值回流法1.48021.27361.43621.3967渗漉法0.41020.47850.43740.4420由表1可知回流法所得的总黄酮含量高于渗漉法，且回流装置已广泛应用于工业生产，因此拟选用回流法。2.3提取溶剂的选择称2份1g剪碎的鹿蹄草药材分别置烧瓶中，加50ml乙醚水浴回流2h除去叶绿素，放冷过滤，分别加入不同溶剂30ml（水，80%乙醇）回流提取2次，每次2h,放冷过滤，浓缩，定容于10ml容量瓶中按标准曲线的制备项下方

8、法，测定含量。结果见表2表2 提取溶剂的考察结果类 型总黄酮含量（%）123平均值醇提1.39761.40181.43251.4106水提0.21020.23740.24850.2320由表2知醇提法得到的总黄酮含量高于水提法，因此采用乙醇作鹿蹄草的提取溶剂。2.4 提取工艺的优化2.4.1 正交因素水平设计表根据上述选定的条件，以鹿衔草总黄酮的含量为指标，考察不同乙醇浓度、溶剂用量、提取次数、提取时间对提取工艺的影响。正交试验设计因素水平见表5。表3 因素水平表水平因 素A 乙醇浓度(% )B 溶剂用量(倍)C提取时间(h)D提取次数(次) 1601011270202238030332.4.

9、2 供试品溶液的制备称取鹿蹄草药材粉1g，乙醚热水浴回流2小时除去叶绿素后按正交试验表进行回流提取，合并提取液，浓缩，定容于10ml容量瓶中按标准曲线的制备项下各加50%的乙醇后方法，测定含量。2.4.3 样品含量测定按标准曲线的制备项下方法对样品进行含量测定，结果见表4.表4正交实验结果序 因素号 A B C D 总黄酮含量（mg/g） 1 1 1 1 1 4.5292 1 2 2 2 10.6753 1 3 3 3 10.8374 2 1 2 3 13.1665 2 2 3 1 6.3296 2 3 1 2 8.5987 3 1 3 2 12.3148 3 2 1 3 11.9579 3

10、3 2 1 14.802K1 8.6803 10.003 7.6947 8.5533 K2 8.6977 9.6537 12.881 9.8623 CT=102.7002K3 13.0243 10.7457 9.8267 11.9867 R 4.344 1.092 5.1863 3.4333表5 方差分析表方差来源离差平方和自由度方差 F比F值PA4.1767 2 2.0984 20.235319.00P0.05B0.2073 20.1037 19.00C4.5303 2 2.2652 21.843819.00P0.05D2.0016 21.0008 9.6509F0.05(2，2)=19.0

11、02.4.4 验证实验为考察上述优选提取工艺的稳定性,按该工艺条件进行重复试验3次,分别测定鹿衔草总黄酮含量,结果总黄酮含量为1.4289%,1.4255%和1.4361%,说明该工艺稳定、可行。3.讨论通过正交试验法对鹿衔草的提取工艺条件进行了优选,由实验结果可知,B因素极差很小，所以把它当所因素误差项来考虑，从方差分析表可以得出，A因素及C因素对总黄酮含量有显著影响(PADB。因此得出最佳提取方案A3B3C2D3，为了节省溶解用量、节约时间，根据方差分析结果结合生产实际最终确定最佳工艺为A3B1C2D1，即加10倍量80%乙醇进行提取，每次2小时，提取1次。 参考文献1 郑占虎 中药现代研究与应用