奴卡菌的培养与鉴定

1、,奴卡菌的培养及鉴定,1,一、分类与命名,分类： 细菌域-放线菌纲-放线菌亚纲-放线菌目-棒杆菌亚目-诺卡菌科-诺卡菌属 与医学有关的菌种： 脓肿诺卡菌 非洲诺卡菌 星形诺卡菌 巴西诺卡菌 短链诺卡菌 肉色诺卡菌 皮疽诺卡菌 新星诺卡菌 豚鼠耳炎诺卡菌 假巴西诺卡菌,二、生物学特性,（一）形态与染色 1、革兰氏染色： 革兰氏阳性或不定，无芽孢和鞭毛。菌体呈多向的分枝丝状，直径0.5-1.2 m。 培养早期可见丰富的菌丝体，常有次级分枝。 培养后期菌体裂解为球形或杆状。,巴西奴卡菌,星形奴卡菌,星形奴卡菌,形态染色,星形奴卡菌 24 h,星形奴卡菌 72 h,2、改良抗酸染色为弱阳性（1%硫酸水

2、溶液），呈不均匀性，易被脱色呈阴性。,奴卡菌,星形奴卡菌,星形奴卡菌,形态染色,3、痰标本直接涂片革兰氏染色可见典型的分枝菌丝，菌丝呈90 分枝角。有时不易着色或不均匀。,痰涂片 菌丝呈90 分枝,痰涂片 菌丝团,痰涂片 着色不均,形态染色,4、组织中细菌易聚集形成团块或微粒，在脓性分泌物中肉眼可见“硫磺颗粒”,痰涂片 弱抗酸染色,血培养涂片 革兰氏染色,形态染色,痰直接涂片,抗酸染色,革兰氏染色,形态染色,二、生物学特性,（二）培养特性 严格需氧，可在普通琼脂上室温或35 缓慢生长，初代分离常需孵育1周。在不同培养基或培养时间菌落形态差异大，可出现光滑到颗粒状、不规则、皱褶或堆积的菌落。都能

3、形成气生菌丝，使菌落表面出现粉状或天鹅绒样气生菌丝体，菌落有泥土气味。 可产生不同的色素，如橙红、粉红、黄色、黄绿、紫色等。,星形奴卡菌,巴西奴卡菌,培养特性,星形奴卡菌的菌落,11d，橙黄色，血平板,12d，粗糙黄色，血平板,血平板11d 气生菌丝,11d，MHA，黄色有棘突,培养特性,2 d，血平板,革兰氏染色,血平板11d 气生菌丝,11d，MHA，黄色有棘突,武国芬肺泡灌洗液和刷检物培养,抗酸染色,弱抗酸染色,三、鉴定与鉴别,（一）属间鉴定 诺卡菌属于其他需氧放线菌属如链霉菌属、拟诺卡菌属、红球菌属、马杜拉放线菌属以及棒状杆菌等形态形似的革兰氏阳性杆菌的属间鉴定： 1.与链霉菌属、放线

4、菌属和拟诺卡菌属的鉴别 四者镜下形态均为分枝丝状，但诺卡菌属改良抗酸染色弱阳性，后者阴性。,革兰氏染色,菌丝与孢子链,白色链霉菌,拟诺卡菌 MHA，9d，气生菌丝,属间鉴定,2.与分枝杆菌属的鉴别 分枝杆菌抗酸性强，盐酸酒精不易脱色。而诺卡菌盐酸酒精易脱色。,脓液涂片，条索状，V字形排列,痰涂片，V，Y，X字形排列,痰涂片，细胞内吞噬,属间鉴定,3.与红球菌属的鉴别 两者均可呈现弱抗酸性，但马红球菌不产生气生菌丝。,马红球菌 48h 粘液型,马红球菌 SBA 粗糙型,属间鉴定,马红球菌 24h 弱抗酸,马红球菌 5d 革兰氏染色,属间鉴定,4.与棒状杆菌的鉴别 棒状杆菌不形成菌丝，菌体呈栅栏状

5、排列。,属间鉴定,三、鉴定与鉴别,（二）属内鉴定 乙酰胺水解、抗生素敏感试验、芳香基硫酸酯酶、利用糖产酸、利用碳水化合物、七叶苷水解、明胶液化、硝酸盐还原、温度耐受、脲酶试验等。 1.生化试验 明胶液化试验:将菌液用白金针刺入明胶培养基内，35温育7d.取出放415min,反复摇动试管至45，观察有无液化的明胶流动。 乙酰胺利用试验： 将菌液接种于乙酰胺斜面，于35温育7d. 斜面由淡黄橙色变为鲜明粉色为阳性。 枸橼酸盐利用试验：将菌液接种于枸橼酸盐斜面， 于35温育7d，如斜面呈蓝色为阳性。,与人体感染有关的诺卡菌种的生理生化特性,2.药敏试验： 方法：将0.5麦氏单位的菌液接种于MH琼脂培

6、养基，约10min后加药敏纸片：庆大霉素10g,妥布霉素10g，阿米卡星30g,红霉素15g,温育于35经72h。 判定耐药的标准为： 庆大霉素抑菌环15mm， 妥布霉素20mm, 阿米卡星20mm, 红霉素30mm， 环丙沙星35mm。,属内鉴定,属内鉴定,庆大霉素 妥布霉素 阿米卡星 红霉素,SSSS,RSSR.,RRSR,SSSR,RRRR,新星诺卡菌,星形诺卡菌,短链诺卡菌,皮疽诺卡菌 星形诺卡菌,巴西诺卡菌 假巴西诺卡菌 星形诺卡菌 / 豚鼠耳炎诺卡菌,Cit,星形诺卡菌,皮疽诺卡菌,MH明显黄色菌落,巴西诺卡菌 假巴西诺卡菌,星形诺卡菌 / 豚鼠耳炎诺卡菌,+,-,+,-,环丙沙星

7、35m,Ino,+,+,-,-,假巴西诺卡菌,巴西诺卡菌,豚鼠耳炎诺卡菌,星形诺卡菌 /,四、临床意义,诺卡菌在自然界分布广泛，多为腐生寄生菌，与人类关系最大的是星形诺卡菌复合体（星形、鼻疽和新星，引起90%的非皮肤部位感染）；巴西诺卡菌（热带的足分枝菌病和非热带肺部感染，CNS），多为外源性感染。,临床与感染部位,1、足分枝菌病：巴西诺卡菌，热带地区，可通过损伤的皮肤侵犯皮下组织，产生慢性化脓样肉芽肿，表现为脓肿及多发性瘘管，好发于足和腿部。 2、孢子丝菌病：星形诺卡菌，皮肤淋巴 3、肺部-吸入性：星形诺卡菌，慢性，X光显示渗入性结节，空洞，多结节，类似结核病。星形诺卡菌肺炎患者的痰标本呈肺结核样乳酪样痰。 4、播散性：由肺部感染引起，90%为星形诺卡菌，CNS占40%，脓肿或肉芽肿；其他部位：眼，肾，关节，心脏。,五、治疗,一、原则：依宿主、感染部位及体外活性用药；首选磺胺类，必须治疗6-12个月，对耐药菌株，首选阿米卡星和（或）亚胺培南。