AES显色培养基.ppt

1、传统培养基方法,微生物分析的主要方法,原理: 糖发酵 Ex: 乳糖发酵用于大肠菌群检测 氧化还原 Ex: 如H2S基础培养基用于Salmonella spp.,缺点: 大部分生化反应只是用于检测微生物种群(属).,需要转代 浪费金钱和时间 : 大部分需要确认实验,传统培养基方法,显色及荧光底物技术,专一性酶活性，目视观察,减少和降低确认测试量,显色及荧光底物技术,底物结构,糖类 脂类 蛋白胨,色 原,底 物 结 构,共价键结合,专一酶,ALOA : L.monocytogenes detection and enumeration in food samples 食品中单增李斯特菌检测,CHR

2、OMOGENIC CULTURE MEDIA NEW APPLICATIONS,ASAP : Salmonella detection in food, veterinary and clinical samples 食品、兽药及临床样品中沙门氏菌检测,ESIA : Enterobacter sakazakii detection in dehydrated food and environmental samples脱水食品及环境样品中阪崎肠杆菌检测,ALOA ,Agar Listeria acc. Ottaviani & Agosti Chromogenic medium 单增李斯特菌检测

3、和计数培养基,ALOA ,原理:,Beta-glucosidase activity Blue colonies -葡萄糖苷酶活性，蓝色,Phospholipase activity Opaque halo 磷酸酶活性，混浊晕,Aloa,单增李斯特菌的选择性,Listeria monocytogenes,可非常清晰地分辨单增李斯特菌,混合李斯特氏菌存在的问题,单增李斯特菌和其它无毒李斯特菌在LEB培养基中生长对比 (Mac Donald and coll. - 1996) 种类 繁殖一代的时间 总代数. (24H - LEB) L.mono 70 min 21 L.innoc 55 min 2

4、6 例如: 在225mL增菌培养基中各有1 个细胞 24小时增菌后 - 在 5 l (在 PAL/OXF上的接种量) : 5 个 L.mono(单增李斯特氏菌) 和 150 个 L.innocua(无毒李斯特菌),混合李斯特氏菌存在的问题,假如随机挑取5个菌落确认，在X个无毒李斯特菌中 有1个单增李斯特菌，被检出的可能性如下：,可能性 66% 1/4 15% 5%,X = ratio L.i/L.m 4 19 29 99,ALOA One Day alternative method : 分析方法图,25 g 食品样品 + 225 ml HALF FRASER BROTH 24 H / 30C

5、 涂布 0.1 ml on ALOA 24 H / 37C 存在典型菌落 : 不存在典型菌落 : 确认* 不存在单增李斯特氏菌 * : 糖 /溶血试验,ALOA 认证,AFNOR validation (ALOA ONE DAY METHOD - France) Compendium Canada registered BAM registered (FDA approval) NMKL approval (Sweden) ISO : preferred reference culture media for Listeria monocytogenes detection and enume

6、ration (ISO 11290 1&2 revision publication in January 2005),ASAP ,食品、兽药及临床样品中沙门氏菌检测,ASAP,Principle:,C8 酯酶活性,Beta-葡萄糖苷酶活性,ASAP ,Examples:,C8- 酯酶检测,Beta-葡萄糖苷酶活性,C8- 酯酶和葡萄糖苷酶 活性检测,白色菌落,ESIA ,阪崎肠杆菌分离培养基,Principle:,葡萄糖苷酶 蓝色菌落,紫红色菌落,ESIA ,ESSB/ESIA E.sakazakii 检测流程,25g sample + 225 ml ESSB 18/24H 37C,Isolation ESIA 1