植物生理学实验--植物组织中硝态氮测定2009-2

1、植物体内硝态氮含量的测定,1 教师提前烧水，讲解完内容后打开分光光度计开关 2 学生进教室先做硝态氮提取，后讲解实验内容。,小白菜：绿叶片、叶柄 两个小组合作： 一个小组测叶片， 另一个小组测叶柄。 二者必须是同几株上的材料。,三、实验材料,先做： 样品中硝酸盐的提取：,四、操作步骤：,材料剪碎、混匀,精确称取 1.0g，3份重复,放入具塞试管，加去离子水至10ml,沸水浴中提取30min (最好2次，本实验提取1次),塞子封口，橡皮筋捆扎在一起,同几株小白菜（一组叶片、另一组叶柄）,注：2个小组合作，结果共用，一起分析,一、测定意义：,1、作为施肥指标： 植物体内硝态氮含量可以反映土壤氮素供

2、应情况。包括：硝态氮、亚硝态氮。,2、鉴定蔬菜及其加工品质： 蔬菜类作物特别是叶菜和根菜中常含有大量硝酸盐，在烹调和腌制过程中可转化为亚硝酸盐而危害健康。因此，硝酸盐含量又成为蔬菜及其加工品的重要品质指标。,人体摄入的硝态氮81.2来自蔬菜，当人摄取硝酸盐量较大时，体内的NO3还原成NO2进入血液，将血液中的血红素变成高铁蛋白，引起肌体中毒。NO2还可间接与次级胺结合形成强制癌物质亚硝胺。 咸菜的淹制初期咸菜内会大量积累硝酸盐，硝酸盐含量升高数倍或数十倍，当咸菜淹制成熟后硝酸盐含量减少（很低），所以，咸菜没有淹制完成之前，不要食用。 青菜放置时间延长一天，体内的硝酸盐含量会不断增加，购买蔬菜后

3、及时食用，不要放置时间过长，减少硝酸盐的积累。,二、测定原理：水杨酸法,在浓酸条件下，NO3与水杨酸反应，生成硝基水杨酸。,硝基水杨酸在碱性条件下（pH12）呈黄色，最大吸收峰的波长为410nm，在一定范围内，其颜色的深浅与含量成正比，可直接比色测定。,三、材料： 小白菜,所用仪器、试剂已备好在实验台上,四、操作步骤程序：,C(g/ml)=110.99D410+6.30 (S22P型分光光度计),2样品液的制备 3样品液的测定比色 4. 结果计算,1标准曲线的制作（学生不做）,过滤到25ml容量瓶， 去离子水冲洗残渣，定容,材料剪碎、混匀,精确称取 1.0g，3份重复,放入具塞试管，加去离子水

4、10ml,沸水浴中提取30min,塞子封口，橡皮筋捆扎在一起,自来水冷却,2个小组合作，结果共用分析 同几株材料 一组叶片、另一组叶柄,2、样品液的制备,容量瓶、漏斗洗刷一遍,3、样品液的测定比色,4支试管,空白试管,样品试管3支,加5%水杨酸-硫酸0.5ml (在磁盘中加! 移液管立即冲洗),冷却比色(410nm),加 9.3ml 8% NaOH,加0.2ml蒸馏水,各加0.2ml样品液,试管洗刷一遍,防止不净致重复间误差较大,溶液加到试管底部，以免影响结果重复性,两组合作测定须用同一台分光光度计,使用强酸、强碱一定注意安全，如意外发生外溅立即用水冲洗和擦洗,室温放置10min,分光光度计：比色杯用水冲洗，擦镜纸擦净；比色杯倒液不超2/3；用完后及时洗净! 废液（因含浓酸、碱）倒在专门收集容器内，切勿倒入水池内! 测定结束后，将试管彻底洗刷干净（因含强碱），倒置在试管架上!,注意事项：,式中：C标准方程计算得NO3-N浓度 V提取样品液总量 W样品鲜重,4、结果计算（课后计算）：,NO3-N含量(g/g) =,CV,W,结果记录：记载表老师签字,用品洗刷干净，检查摆放整齐、齐全 报告老师，经检查同意可离去 值日生负责注意: 清理分光光