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文档简介

1、a,1,医学微生物学实验二,微生物学教研室：3029130 科教科：3029945,a,2,实验内容,1.实验一结果的观察和分析； 2.细菌内毒素的检测技术； 3.抗酸染色； 4.实验考试。,a,3,一、实验一结果的观察和分析,空气中细菌,咽喉部细菌,a,4,二、内毒素的检测技术（鲎试验）,1.内毒素检测方法 家兔发热法，鲎试验。,a,5,2.鲎试验原理 3.材料 鲎试剂， 内毒素试剂， 鲎试剂专用溶解水， 无菌无热源质吸管,a,6,4.方法步骤 （每4个人一组，两支鲎试剂，一支实验一支对照） （1）取两支鲎试剂打开，分别加入0.1ml 鲎试剂 溶解水，使之溶解。 （2）其中一支加入0.1ml

2、内毒素，标记上实验组， 另一支加入0.1ml溶解水，作为对照。 （3）垂直放入37温箱，20-30min观察结果。 5.结果及应用 实验组出现凝固，对照组不出现凝固,a,7,三、抗 酸 染 色 Acid fast stain,a,8,（一）实验目的 1.掌握分枝杆菌抗酸染色的操作方法和意义。 2.熟悉抗酸染色的原理。 （二）实验原理 分枝杆菌的细胞壁内含有大量的脂质，主要是分枝菌酸，它包围在肽聚糖的外面，所以分枝杆菌一般不易着色，要经过加热和延长染色时间来促使其着色，同时分枝杆菌中的分枝菌酸与染料结合后，就很难被酸性脱色剂脱色，故名抗酸染色。 齐-尼氏抗酸染色法是在加热条件下使分枝菌酸与石炭酸

3、复红牢固结合成复合物，用3%盐酸酒精处理也不脱色。当再加碱性美兰复染后，分枝杆菌仍然为红色，而其他细菌及背景中的物质为兰色。,a,9,1.细菌：卡介苗 （BCG）。 2.抗酸染液：石炭酸复红液、3%盐酸酒精、碱 性美兰溶液。 3.其它：接种环、酒精灯、载玻片，玻片夹等。,（三）实验材料,a,10,（四）方法与步骤 1.细菌涂片的制备 涂片 干燥 固定 2.染色 1）初染：用玻片夹夹持涂片标本，滴加石炭酸复红23 滴，在火焰高处（210cm）徐徐加热，切勿沸腾，出现蒸汽即暂时离开，加热35min，若染液蒸发减少，应再加染液，以免干涸，待标本冷却后用水冲洗。 2）脱色：3%盐酸酒精脱色30s1min；用水冲洗。 3）复染：用碱性美兰溶液复染1min；用水冲洗。 4）玻片用吸水纸吸干，油镜观察。,a,11,（五）实验结果,红色为抗酸染色阳性； 蓝色为抗酸染色阴性。,a,12,结核杆菌呈红色，常堆积成团，排列无序，偶呈分枝状生长；背景及非抗酸性细菌呈兰色。,a,13,（六）注意事项,1.无菌操作； 2.染色要充分，掌握好时间； 3.初染时加热勿使染液沸腾，干涸。,a,14,实验报

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