DB32T 3855-2020 构树组织培养技术规程

1、ICS65.020.20B 61DB32江苏省地方标准DB 32/ XXXXX2020构树组织培养技术规程Technical regulation for tissue culture of Broussonetia papyrifera 2020 - XX - XX发布2020 - XX - XX实施江苏省市场监督管理局发布DB32/T XXXX2020前言本标准按照GB/T 1.12009给出的规则起草。本标准由江苏省林业局提出并归口。本标准由江苏省林业科学研究院起草。本标准主要起草人：陈庆生、黄婧、张敏、蒋泽平、周鹏、陆青、薛欢。IDB32/ XXXXX2020构树组织培养技术规程1 范

2、围本标准规定了构树组织培养的母株选择、外植体选择与灭菌、诱导培养、增殖培养、瓶外生根培养、增殖苗扦插、插后管理和记录。本标准适用于构树的组织培养。2 规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。LY/T 18822010 林木组织培养育苗技术规程NY/T 3932013 绿色食品 农药使用准则3 母株选择选取生长健壮、无病虫害的构树单株。4 外植体选择与灭菌4.1 外植体采集在4月7月，选择连续3 d 以上的晴天，采集母株上萌发的嫰枝作为外

3、植体。4.2 外植体表面灭菌4.2.1 清洗用中性洗洁精将外植体洗净，并用自来水冲洗15 min 20 min。4.2.2 灭菌在超净工作台上，用75 %乙醇溶液消毒外植体5 s10 s，无菌水漂洗1次2次；再用10 %次氯酸钠溶液浸泡外植体6 min8 min，无菌水漂洗4次6次，每次5 min；将漂洗后的外植体置于无菌滤纸上吸干表面水分。5 诱导培养5.1 培养基诱导培养基参见附录A。培养基制备按照LY/T 18822010规定进行。5.2 接种将外植体修剪为2 cm的带芽茎段，垂直接种到诱导培养基上。5.3 培养条件诱导培养的温度控制在2325，光照强度为1500 lx3000 lx，光

4、照时间为8 h/d12 h/d，培养室湿度为70 %80 %。5.4 转接诱导培养25 d30 d后，转接到6.1增殖培养基上进行增殖培养。6 增殖培养6.1 培养基增殖培养基参见附录A。培养基制备按照LY/T 18822010规定进行。6.2 接种将诱导培养的试管苗剪成1 cm2 cm的带芽茎段，接种到增殖培养基上。6.3 培养条件增殖培养的温度控制在2325，光照强度为1500 lx3000 lx，光照时间为10 h/d16 h/d，培养室湿度为70 %80 %。6.4 继代培养增殖培养25 d35 d后，转接至新鲜的增殖培养基。7 瓶外生根培养7.1 设施宜在温室进行培养。7.2 容器宜

5、采用塑料穴盘，穴孔呈倒锥形，口径约4.5 cm，高约5 cm。旧穴盘需经消毒后才可使用。7.3 基质基质选用pH 6.2pH 6.8的草炭，用0.1 %高锰酸钾溶液将基质淋透消毒，分装到穴盘内。8 增殖苗扦插8.1 插条处理选择生长健壮、高6 cm8 cm且叶片展开的增殖苗，清水洗净，剪去芽苗根部膨大部分，按单株剪下，每株剪成3 cm4 cm带芽茎段作为插条。插条基部（0.5 cm1.0 cm）速蘸1000 mg/L萘乙酸（NAA）溶液5s以促进生根。8.2 扦插用镊子将插条基部插入基质，扦插深度以1 cm为宜。8.3 覆膜扦插后浇透水，在穴盘上方覆盖塑料薄膜或保鲜膜。9 插后管理9.1 环境

6、管理穴盘置于温室中培养，温度为20 30 ，以25为宜，光照强度为2000 lx2500 lx，光照时间为12 h/d13 h/d，空气湿度75 %80 %。9.2 揭膜培养10 d15 d后撤去塑料薄膜或保鲜膜。9.3 水肥管理每隔3 d浇水1次，每两周喷一次叶面肥。9.4 病虫害防治每月喷1次药剂，宜采用75%百菌清可湿性粉剂700800倍液，50%马拉松乳剂1000倍液。防治方法按照NY/T 3932013规定执行。9.5 出苗苗高15 cm20 cm，活叶片数4片以上，根系生长健壮，无病虫害，即可出苗。10 记录根据组织培养技术规程内容进行记录，按时填写，做到准确无误，记录保存2年以上

7、。附录A （规范性附录）构树组织培养基配方表A.1 构树组织培养基配方表母液名称药品名称诱导培养基（mg/L）增殖培养基（mg/L）大量元素KNO318001800NH4NO3720720KH2PO4500500CaCl22H2O100100MgSO47H2O370370微量元素MgSO44H2O22.322.3ZnSO47H2O8.658.65H3BO36.26.2NaMoO42H2O0.250.25KI0.830.83CuSO45H2O0.0250.025CoCl26H2O0.0250.025铁盐FeSO47H2O27.827.8Na2EDTA37.237.2有机质氨基乙酸2.02.0盐酸硫胺素（VB1）0.10.1盐酸吡哆醇（VB6）0.50.5烟酸（VB3）0.50.5肌醇10