db13t 1107-2009 乳及乳制品中4种β—内酰胺类药物残留量的测定方法 液相色谱—串联质谱法

DB13T11072009乳及乳制品中4种内酰胺类药物残留量的测定方法液相色谱串联质谱法ICS67100X16可北省地DB13方标准DB13/T11072009乳及乳制品中4种内酌肢类药物残留量的测定方法液相色谱一串联质谱法DETERMINATIONOFFOURKINDSOFLACTAMSRESIDUESINMILKANDMILKPRODUCTSLCMS/MSMETHOD20090号27发布20090611实施河北省质量技术监督局发布DB13/T11072009月IJ吕本标准中的附录A、附录B为资料性附录。本标准由河北省质量技术监督局提出并归口。本标准起草单位河北省食品安全重点实验室、河北省食品质量监督检验研究院、河北医科大学基础医学院、河北师范大学生命科学学院、河北省化学工业研究院。本标准主要起草人张岩、李挥、张敬轩、吕品、刘辰魁、王丽霞、李丛芬、范斌、康素芬、苏红维、刘敬泽、杨小龙。BZFXW4DB13J11BZFXWDB13/T11072009乳及乳制品中4种P一内酰胺类药物残留量的测定方法液相色谱一串联质谱法范围本标准规定了乳及乳制品中青霉素G青霉素V、氨苄西林、阿莫西林4种0一内酞胺类药物残留量的液相色谱一串联质谱测定方法。本标准适用于生鲜乳、巴士杀菌（灭菌）乳和乳粉中青霉素G、青霉素V氨苄西林、阿莫西林残留量的测定。本标准的方法检出限青霉素G、青霉素V为10G/KG氨苄西林、阿莫西林为20G/KG2规范性引用文件一F列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法原理试样中的4种P一内酰胺类药物残留，用OASISHLB或相当的固相萃取柱净化，液相色谱一串联质谱仪测定，外标法定量。4试剂和材料除另有说明外，所用试剂均为优级纯，水为GB/T6682规定的一级水。4，甲醇色谱纯。42乙睛色谱纯。43乙酸优级纯。44乙睛十水（13量取25ML乙睛与75ML水混合。45OASISHLB固相萃取柱或相当者500MG,6ML。使用前分别用5ML甲醇和10ML水预处理，保持柱体湿润。46青霉素G、青霉素V,氨苄西林、阿莫西林纯度）99047青霉素G、青霉素V,氨苄西林、阿莫西林标准储备溶液准确称取适量的每种标准物质，分别用乙腈配制成浓度为10MG/ML的标准储备溶液。储备液贮存在一18冰柜中。48青霉素G青霉素V,氨苄西林、阿莫西林标准E作溶液根据需要吸取适量青霉素G青霉素V氨节西林、阿莫西林标准储备溶液，用空白样品稀释成适当浓度的基质混合标准工作溶液。仪器液相色谱一串联四极杆质谱仪配有电喷雾离子源ESI0分析天平感量01MG和001G0漩涡混匀器。固相萃取真空装置。贮液器50ML0微量进样器25L,100L0刻度样品管5ML，精度为01MLO9QU，010DB13/T11072009乳及乳制品中4种自内酷服类药物残留量的测定方法液相色谱串联质谱法1范围本标准规定了乳及乳制品中青霉素G、青霉素V、氨韦西林、阿莫西林4种札内酷肢类药物残留量的液相色谱一串联质谱测定方法。本标准适用于生鲜乳、巴士杀菌灭菌乳和乳粉中青霉素G、青霉素V、氨韦两林、阿莫西林残留量的测定。本标准的方法检出限青霉素G、青霉素V为10G/KG氨书西林、阿莫西林为20趴鸣。2规范性引用文件F列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单不包括勘误的内容或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3原理试样中的4种内酷肢类药物残留，用OASISHLB或相当的固相萃取柱净化，液相色I普串联质谱仪测定，外标法定量。4试剂和材料除另有说明外，所用试剂均为优级纯，水为GB/T6682规定的级水。41甲醇T色谱纯。42乙睛色谱纯。43乙酸优级纯。44乙睛水13量取25ML乙睛与75ML水混合。45OASISHLB固相萃取柱或相当者500MG,6ML。使用前分别用5ML甲醇和10ML水预处理，保持柱体湿润。46青霉素G、青霉素V、氨书西林、阿莫西林纯度三99。47青霉素G、青霉素V、氨节回林、阿莫西林标准储备榕液准确称取适量的每种标准物质，分别用乙脂配制成浓度为10MGLML的标准储备溶液。储备液贮存在一18C冰柜中。48青霉素G、青霉素V、氨节回林、阿莫两林标准作溶液根据需要吸取适量青霉素G、青霉素V、氨书同林、阿莫两林标准储备榕液，用空白样品稀释成适当浓度的基质泪合标准R作梅液。5仪器51液相色谱串联四极杆质谱仪配有电喷雾离子源ESI。52分析天平感量01MG和001G。53璇涡温匀器。54困相萃取真空装置。55贮液器50ML。56微量进样器25L，100L。57刻度样品管5ML，精度为01ML。BZFXWDB13/T1107200958真空泵真空度应达到80KPA59PH计测量精度度002510氮吹仪。6测定步骤61试样溶液的制备称取5G试样（精确到001G）置于150ML二角瓶中，加人45ML去离子水，于漩涡混匀器上快速混合1MIN。样液移至下接OASISHLB柱的贮液器中，以小于或等于3ML/MIN的流速通过固相萃取柱后，用5ML水洗柱，弃去全部流出液。在65KPA的负压下，减压抽干20MIN，最后用3ML甲醇洗脱，收集洗脱液于刻度样品管中，于40水浴中用氮吹仪吹干，用乙睛定容至1ML，摇匀后，供液相色谱一串联质谱仪测定。62测定621液相色谱条件色谱柱SUNFIRETMC1835林M,150MMX21MM或相当者。流动相及流速见表10柱温30CO进样量20L0表1液相色谱梯度洗脱条件时间MIN流速（协L/MIN水（含04乙酸）（）乙睛（）0002008600400150020035065015012006004002501200600400622质谱条件离子源电喷雾离子源ESIO扫描方式正离子扫描。检测方式多反应监测。电喷雾电压5500V雾化气压力0055MPAO气帘气压力0079MPAO辅助气流速6L/MIND离子源温度400C定性离子对、定量离子对和去簇电压（DP,聚焦电压（FP、碰撞能量（CE）及碰撞室出口电压CXP，见表20623液相色谱一串联质谱测定6231定性测定在相同试验条件下，样品中待测物质与基质标准溶液中对应物质的保留时间偏差在士25之内；样品色谱图中各定性离子对相对丰度与浓度接近的基质标准溶液的色谱图中离子相对丰度相比，若偏差不超过表3规定的范围，则可判定为样品中存在该残留。6232定量测定在仪器最佳工作条件下，用青霉素G、青霉素V,氨苄西林、阿莫西林标准储备溶液配成的基质混合标准溶液分别进样，以标准工作溶液浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，绘制标准工作曲线。用标准BZFXWDB13/T115859510861C1835抖M，150MM2智LMM10I400650400400000150015012501200200200200600350600600ESI。0055MPAOOMPAO、B/口且有A/43、出口2BZFXWDB13/T11072009工作曲线对样品进行定量，样品溶液中青霉素G、青霉素V,氨苄西林、阿莫西林的响应值均应在仪器测定的线性范围内。在上述色谱条件下，青霉素G、青霉素V,氨苄西林、阿莫西林的总离子流图参见附录A青霉素G、青霉素V,氨苄西林、阿莫西林的保留时间见附录B表2四种0一内酞胺类药物的定性离子对、定量离子对、去簇电压、聚焦电压、碰撞能量和碰撞室出口电压名称定性离子对M/Z定量离子对M/Z碰撞能量V去簇电压V聚焦电压V碰撞室出口电压/V青霉素G335/160335/17635/16020234520011青霉素V351/160351/192351/16020154020011氨苄西林350八92350/160350/16023202020011阿莫西林366/114366/208366/20830192120011表3定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差相对离子丰度502050102010允许的最大偏差士20士25士30士5063平行试验按上述步骤，对同一试样进行平行试验测定。64空白试验除不称取试样外均按上述分析步骤进行。结果计算从标准工作曲线上得到试样中相应的R内酞胺类药物浓度后，结果按公式（1计算CXVX1000A二，二，1MX1000X试样中被测组分残留量，单位为微克每千克（林G/KG一从标准工作曲线得到的试样溶液中被测组分的浓度，单位为纳克每毫升（NG/MLV试样溶液定容体积，单位为毫升（MLM最终试样溶液所代表的试样质量，单位为克（G注计算结果需将空白值扣除。8精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的15ADB131T11072009工作曲线对样品进行定量，样品溶液中青霉素G、青霉素V、氨书西林、阿莫西林的响应值均应在仪器测定的线性范围内。在上述色谱条件R，青霉素G、青霉素V、氨书面林、阿莫西林的总离子流图参见附录A。青霉素G、青霉素V、氨韦西林、阿莫西林的保留时间见附录B。表2四种自内M虫类药物的定性离子对、定量离子对、去簇电压、聚焦电压、碰撞能量和碰撞室出口电压名称定性离于对定量离子对碰撞能量去旗电压聚焦电压RNZCM/ZVVV压/V335/16020青霉素G35/1604520011335/17623351/16020青霉素V351/1604020011351/19215350/19223氨西林350/1602020011350/16020366/11430阿莫西林366/2082120011366/20819一一一一表3定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差相对离子丰度允许的最大偏差50士202050T25叫M运10士5063平行试验按上述步骤，对同试样进行平行试验测定。64空白试验除不称取试样外均按上述分析步骤进行。7结果计算从标准工作曲线上得到试样中相应的萨内酷胶类药物浓度后，结果按公式1计算CXVX1000X1MXL000X一试样中被测组分残留量，单位为微克每千克GLKG。R一一从标准工作曲线得到的试样溶液中被测组分的浓度，单位为纳克每毫升NGLMU。V一一试样洛液定容体积，单位为毫升ML。M一一最终试样溶液所代表的试样质量，单位为克CG。注计算结果需将空白值扣除。8精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的15。3BZFXWDB13/T11072009附录A（资料性附录）四种P一内酞胺类药物标准物质的总离子流图四种P一内酞胺类药物标准物质的总离子流图，见图A1039E5I容QE5011060，015T/IN