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文档简介
.倒平板、划平板、涂布操作步骤1、无菌准备:1、提前 1 个小时打开无菌室紫外灯消毒灭菌1、操作者的衣着和手,进行清洁和消毒;2、将用于微生物培养的器皿、接种的用具和培养基等进行灭菌;3、所有无菌操作都需在酒精灯旁操作。二、培养基配置:1、LB 肉汤:肉汤粉 330g、5g 葡萄糖、1000ml 蒸馏水;2、营养琼脂培养基: 琼脂培养基粉 300g、5g 葡萄糖、1000ml 蒸馏水。三、倒平板操作:1、将灭菌过的培养皿放在火焰旁的桌面上,右手拿装有培养基的锥形瓶,左手拔出棉塞。右手拿锥形瓶,使瓶口迅速通过火焰;2、用左手将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙,右手将锥.形瓶中的培养基(约 1020ml )倒入培养皿,左手立即盖上培养皿的皿盖,轻轻摇匀。3、等待平板冷却凝固(大约需 510min)后,将平板倒过来放置,使皿盖在下,皿底在上。四、平板划线操作:1、将接种环放在火焰上灼烧,直到接种环烧红;2、在火焰旁冷却接种环,并打开盛有菌液的试管的棉塞;3、将试管口通过火焰;将已冷却的接种环伸入菌液中,沾取一环菌液;将试管口通过火焰,并塞上棉塞;4、左手将皿盖打开一条缝隙,右手将沾有菌种的接种环迅速伸入平板内,划三至五条平行线,盖上皿盖。注意不要划破培养基。5、灼烧接种环,待其冷却后,从第一区域划线的末端开始往第二区域内划线。重复以上操作,在三区域内划线。注意不要将最后一区域的划线与第一区相连。6、将平板倒置,放入培养箱中培养。.五、涂布平板操作:1、将涂布器浸在盛有酒精的烧杯中;2、取少量菌液(不超过 0.1ml) ,滴加到培养基表面;3、将沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃,待酒精燃尽后,冷却 810s;4、用涂布器将菌液均匀地涂布在培养基表面。涂布时可转动培养皿,使涂布均匀。注意:1、将涂布器末端浸在盛有体积分数为 70%的酒精的烧杯中。取出时,要让多余的酒精在烧杯中滴尽,然后将沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃。
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