第二十一章免疫学所有实验

制作：姚新生 审 校： 孙 万邦 联 系： 上一页上一页 下一页下一页返回返回 本章首页 第一节 第二节 第三节免疫学应用免疫学应用 本科免疫学本科免疫学 POWERPOINT讲稿讲稿免免疫疫应应用用第二十一章 免疫学检测原理 u 免疫学检测乃借助免疫学、细胞生物学和分子生物学理论或技术，对抗原、抗体、免疫细胞及其分泌的细胞因子等进行定性或定量检测。免疫学检测技术在医学生物学研究领域得到广泛应用，并在临床实践中用于探讨免疫相关疾病的发病机制及其诊断、病情监测与疗效评价等。随着现代免疫学以及细胞生物学、分子生物学等相关学科的进展，免疫学检测技术不断发展和更新。u 第一节 基于抗原 -抗体反应的检测方法u 第二节 免疫细胞的检测u 第三节 免疫分子的检测 制作：姚新生 审 校： 孙 万邦 联 系： 上一页上一页 下一页下一页返回返回 本章首页 第一节 第二节 第三节免疫学应用免疫学应用 本科免疫学本科免疫学 POWERPOINT讲稿讲稿免免疫疫应应用用学习指导u 1、掌握凝集反应和沉淀反应的概念u 2、掌握免疫细胞和免疫分子常用检测方法的名称u 3、熟悉三大标记技术的原理和方法及其应用u 4、了解免疫学方法的研究概况、进展及在临床中的应用制作：姚新生 审 校： 孙 万邦 联 系： 上一页上一页 下一页下一页返回返回 本章首页 第一节 第二节 第三节免疫学应用免疫学应用 本科免疫学本科免疫学 POWERPOINT讲稿讲稿免免疫疫应应用用第一节 基于抗原 -抗体反应的检测方法u 一、抗原抗体结合反应的特点（熟悉）u （一）特异性和交叉反应u （二）抗原 -抗体结合的带现象与可见性u 抗体反应中，可能出现抗原或抗体过剩的情况，由于过剩一方的结合价不能被完全占据，多呈游离的小分子复合物形式，或所形成的复合物易解离，不能被肉眼察见，此为前带现象（ prozone）即抗体过剩，或 后带现象(postzone)即抗原过剩。u （三）可逆性u 抗原 -抗体反应为分子表面的非共价结合，结合虽稳定但可逆。制作：姚新生 审 校： 孙 万邦 联 系： 上一页上一页 下一页下一页返回返回 本章首页 第一节 第二节 第三节免疫学应用免疫学应用 本科免疫学本科免疫学 POWERPOINT讲稿讲稿免免疫疫应应用用第一节 二、抗原 -抗体反应的影响因素（熟悉）u （一）电解质u （二）酸碱度抗原抗体反应的最适 pH是 68。u （三）温度 抗体 -抗原反应的最适温度为 37 。u （ 四）抗原和抗体的性质u 抗体的特异性和亲和力是决定抗原 -抗体反应的关键因素。u 抗原和抗体的浓度、比例对抗原 -抗体反应的影响最大，是决定性因素 制作：姚新生 审 校： 孙 万邦 联 系： 上一页上一页 下一页下一页返回返回 本章首页 第一节 第二节 第三节免疫学应用免疫学应用 本科免疫学本科免疫学 POWERPOINT讲稿讲稿免免疫疫应应用用第一节 三、抗原抗体反应的基本检测方法u （一）凝集反应（图 21-1）（掌握）u 细菌、红细胞等颗粒性抗原与相应抗体结合后，在一定条件下出现肉眼可见的凝集物，此为 凝集反应(agglutination)。u 1直接凝集 u 2间接凝集 u 3间接凝集抑制试验 制作：姚新生 审 校： 孙 万邦 联 系： 上一页上一页 下一页下一页返回返回 本章首页 第一节 第二节 第三节免疫学应用免疫学应用 本科免疫学本科免疫学 POWERPOINT讲稿讲稿免免疫疫应应用用各种凝集反应示意图制作：姚新生 审 校： 孙 万邦 联 系： 上一页上一页 下一页下一页返回返回 本章首页 第一节 第二节 第三节免疫学应用免疫学应用 本科免疫学本科免疫学 POWERPOINT讲稿讲稿免免疫疫应应用用第一节 三、抗原抗体反应的基本检测方法u （二）沉淀反应（掌握）u 可溶性抗原（血清蛋白质、细胞裂解液或组织浸液、各种微生物蛋白分子等）与相应抗体结合后，在一定条件下出现肉眼可见的沉淀，此为 沉淀反应 (precipitation)。u 1单向免疫扩散 (single immunodiffusion) u 2双向免疫扩散 (double immunodiffusion) u 3免疫电泳 (immunoelectrophoresis)u 4免疫比浊 (immunonephelometry)制作：姚新生 审 校： 孙 万邦 联 系： 上一页上一页 下一页下一页返回返回 本章首页 第一节 第二节 第三节免疫学应用免疫学应用 本科免疫学本科免疫学 POWERPOINT讲稿讲稿免免疫疫应应用用单向免疫扩散 (single immunodiffusion)制作：姚新生 审 校： 孙 万邦 联 系： 上一页上一页 下一页下一页返回返回 本章首页 第一节 第二节 第三节免疫学应用免疫学应用 本科免疫学本科免疫学 POWERPOINT讲稿讲稿免免疫疫应应用用双向免疫扩散 (double immunodiffusion) 制作：姚新生 审 校： 孙 万邦 联 系： 上一页上一页 下一页下一页返回返回 本章首页 第一节 第二节 第三节免疫学应用免疫学应用 本科免疫学本科免疫学 POWERPOINT讲稿讲稿免免疫疫应应用用免疫电泳 (immunoelectrophoresis)制作：姚新生 审 校： 孙 万邦 联 系： 上一页上一页 下一页下一页返回返回 本章首页 第一节 第二节 第三节免疫学应用免疫学应用 本科免疫学本科免疫学 POWERPOINT讲稿讲稿免免疫疫应应用用对流免疫电泳制作：姚新生 审 校： 孙 万邦 联 系： 上一页上一页 下一页下一页返回返回 本章首页 第一节 第二节 第三节免疫学应用免疫学应用 本科免疫学本科免疫学 POWERPOINT讲稿讲稿免免疫疫应应用用火箭免疫电泳制作：姚新生 审 校： 孙 万邦 联 系： 上一页上一页 下一页下一页返回返回 本章首页 第一节 第二节 第三节免疫学应用免疫学应用 本科免疫学本科免疫学 POWERPOINT讲稿讲稿免免疫疫应应用用第一节 三、抗原抗体反应的基本检测方法u （三）补体参与的反应（了解）u 应用抗体与红细胞表面抗原结合，激活反应体系中的补体成分，根据溶血现象判定试验结果。补体结合试验和溶血空斑试验（后叙）均属此类反应。补体结合试验曾用于检测多种细菌、病毒的抗原或抗体，因易受多种试验条件影响，已渐被其他方法取代。此外，补体依赖的微量细胞毒实验曾用于 HLA的血清学分型，方法是：将标准分型血清与待检淋巴细胞反应，再加入兔补体，若细胞表面表达相应 HLA抗原，则被溶解。溶解细胞可被台盼蓝或伊红染料着色，而活细胞不着色，藉此判定结果。制作：姚新生 审 校： 孙 万邦 联 系： 上一页上一页 下一页下一页返回返回 本章首页 第一节 第二节 第三节免疫学应用免疫学应用 本科免疫学本科免疫学 POWERPOINT讲稿讲稿免免疫疫应应用用第一节 三、抗原抗体反应的基本检测方法u （四）免疫标记技术（熟悉）u 免疫标记技术（ immunolabelling technique）乃用荧光素、酶、放射性核素或化学发光物质等标记抗体或抗原，进行抗原 -抗体反应的检测，是目前应用最为广泛的免疫学检测技术。标记物与抗体或抗原连接后并不改变抗原抗体的免疫特性，具有灵敏度高、快速、可定性、定量、定位等优点。u 。制作：姚新生 审 校： 孙 万邦 联 系： 上一页上一页 下一页下一页返回返回 本章首页 第一节 第二节 第三节免疫学应用免疫学应用 本科免疫学本科免疫学 POWERPOINT讲稿讲稿免免疫疫应应用用第一节 三、抗原抗体反应的基本检测方法u （四）免疫标记技术u 1免疫荧光法 (immunofluorescence， IF) 此法乃用荧光素与抗体连接成荧光抗体，再与待检标本中抗原反应，置荧光显微镜下观察，抗原 -抗体复合物散发荧光，借此对抗原进行定性或定位。u （ 1）直接荧光法：u （ 2）间接荧光法：制作：姚新生 审 校： 孙 万邦 联 系： 上一页上一页 下一页下一页返回返回 本章首页 第一节 第二节 第三节免疫学应用免疫学应用 本科免疫学本科免疫学 POWERPOINT讲稿讲稿免免疫疫应应用用免疫荧光法 (immunofluorescence， IF)制作：姚新生 审 校： 孙 万邦 联 系： 上一页上一页 下一页下一页返回返回 本章首页 第一节 第二节 第三节免疫学应用免疫学应用 本科免疫学本科免疫学 POWERPOINT讲稿讲稿免免疫疫应应用用第一节 三、抗原抗体反应的基本检测方法u （四）免疫标记技术u 2酶免疫测定 (enzyme immunoassay， EIA)u （ 1）酶联免疫吸附试验 (enzyme linked immunosorbent assay， ELISA)： 是酶免疫测定中应用最广的技术，用于测定可溶性抗原或抗体。其基本方法是：将已知抗原或抗体吸附在固相载体（聚苯乙烯微量反应板）表面，使抗原 -抗体反应在固相表面进行，借助洗涤将固相上的抗原 -抗体复合物与液相中游离成分分离（图 21-6）。 ELISA的操作方法很多，以下简介几种基本方法。 制作：姚新生 审 校： 孙 万邦 联 系： 上一页上一页 下一页下一页返回返回 本章首页 第一节 第二节 第三节免疫学应用免疫学应用 本科免疫学本科免疫学 POWERPOINT讲稿讲稿免免疫疫应应用用第一节 基本检测方法 -（四）免疫标记技术u 1）双抗体夹心法：u 2）间接法：u 3) 酶联免疫斑点试验 (ELISPOT): 其原理是：u 4） BAS-ELISA：u ELISA技术的优点是灵敏度高、操作简便、稳定性强，可自动化检测，从而被广泛用于检测多种病原体抗原或抗体、血液及其他体液中微量蛋白成分、细胞因子等 制作：姚新生 审 校： 孙 万邦 联 系： 上一页上一页 下一页下一页返回返回 本章首页 第一节 第二节 第三节免疫学应用免疫学应用 本科免疫学本科免疫学 POWERPOINT讲稿讲稿免免疫疫应应用用间接法制作：姚新生 审 校： 孙 万邦 联 系： 上一页上一页 下一页下一页返回返回 本章首页 第一节 第二节 第三节免疫学应用免疫学应用 本科免疫学本科免疫学 POWERPOINT讲稿讲稿免免疫疫应应用用第一节 三、抗原抗体反应的基本检测方法u （四）免疫标记技术u （ 2）免疫组化技术 (immunohitochemistry techenique)：u 应用标记的抗体与组织或细胞抗原发生反应，结合形态学观察，对组织或细胞表面抗原进行定性、定量、定位。常用技术包括酶免疫组化（辣根过氧化物酶标记）、免疫金组化（胶体金颗粒标记）、免疫电镜技术（铁蛋白、胶体金、过氧化物酶标记）等 制作：姚新生 审 校： 孙 万邦 联 系： 上一页上一页 下一页下一页返回返回 本章首页 第一节 第二节 第三节免疫学应用免疫学应用 本科免疫学本科免疫学 POWERPOINT讲稿讲稿免免疫疫应应用用第一节 三、抗原抗体反应的基本检测方法u （四）免疫标记技术u 3放射免疫测定法 (radioimmunoassay， RIA) u 乃用放射性核素标记抗原或抗体进行免疫学检测。该法兼有放射性核素的高灵敏度和抗原 -抗体反应的特异性，检测灵敏度达 pg水平。常用于标记的放射性核素为 125I和131I，分为液相和固相两种方法。该法常用于测定微量物质，如胰岛素、生长激素、甲状腺素、孕酮等激素，吗啡、地高辛、 IgE等。 制作：姚新生 审 校： 孙 万邦 联 系： 上一页上一页 下一页下一页返回返回 本章首页 第一节 第二节 第三节免疫学应用免疫学应用 本科免疫学本科免疫学 POWERPOINT讲稿讲稿免免疫疫应应用用第一节 三、抗原抗体反应的基本检测方法u （四）免疫标记技术u 4化学发光免疫分析 u 将发光物质（如吖啶酯、鲁米诺等）标记抗原或抗体，发光物质在反应剂（如过氧化阴离子）激发下生成激发态中间体，当回复至稳定的基态时发射光子，通过自动发光分析仪测定光子产量，可反映待检样品中抗体或抗原含量。该法灵敏度高，常用于检测血清超微量活性物质（甲状腺素等激素）。 制作：姚新生 审 校： 孙 万邦 联 系： 上一页上一页 下一页下一页返回返回 本章首页 第一节 第二节 第三节免疫学应用免疫学应用 本科免疫学本科免疫学 POWERPOINT讲稿讲稿免免疫疫应应用用第一节 三、抗原抗体反应的基本检测方法u （四）免疫标记技术u 5免疫印迹法 (immunoblot) u 该法又称 Western印迹法 ，其结合凝胶电泳与固相免疫技术，将借助电泳所区分的蛋白质转移至固相载体，再应用酶免疫、放射免疫等技术进行检测。该法能对分子大小不同的蛋白质进行分离并确定其分子量，常用于检测多种病毒抗体或抗原（图 21-10）。 制作：姚新生 审 校： 孙 万邦 联 系： 上一页上一页 下一页下一页返回返回 本章首页 第一节 第二节 第三节免疫学应用免疫学应用 本科免疫学本科免疫学 POWERPOINT讲稿讲稿免免疫疫应应用用第二节 免疫细胞的检测u 一、免疫细胞及其亚类计数（了解）u （一）外周血单个核细胞的分离u 体外检测淋巴细胞，首先需制备外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell， PBMC)，常用的方法是葡聚糖 -泛影葡胺（又称淋巴细胞分离液）密度梯度离心法。 制作：姚新生 审 校： 孙 万邦 联 系： yxspah