细胞学第6章b

确定内部启动子的实验1原核生物 rRNA基因 原核与真核生物的 rRNA基因在组织结构上的差异 : 重复频率：如 E.coli， 只重复了 7次； 细菌的 16S rRNA 、 23S rRNA 、 5S rRNA基因组成一个转录单位，在染色体上的排列顺序是16 S-23S-5S。2原核生物 rRNA前体的加工36.2.2 核糖体的装配原核生物核糖体的装配 小亚基的 rRNA和蛋白质的装配关系:组成核糖体的蛋白质和 rRNA在大小亚基中均有一定的空间排布。4核糖体RNA的位置关系5核糖体在组装过程中 ,某些蛋白质必须首先结合 到 rRNA上 ,其他蛋白才能组长上去即表现出先后层次。根据同 rRNA结合的顺序 ,将核糖体蛋白分为两种 :6 初级结合蛋白 (primary binding protein)这些蛋白质直接同 rRNA结合 , 其中同 16S rRNA结合的初级蛋白有 14种 :S3, S4, S17, S20, S6, S15, S8, S18, S9, S11, S12, S13, S7, S1。同 5S rRNA结合的有 11种。 次级结合蛋白 (secondary binding protein)这些蛋白质不直接同 rRNA结合 , 而是同初级结合蛋结合 :S10, S16, S2, S6, S21, S14, S19。7核糖体蛋白空间定位8真核生物核糖体 装配模型80 S前体颗粒形成45 S rRNA+5S rRNA+蛋白质45 S rRNA 41S rRNA 大小亚基前体形成 : 大 :32S rRNA和 5S rRNA 小 :20S的前体 rRNA； 小亚基成熟与运送 :20S rRNA18S rRNA 大亚基成熟与运送32S rRNA28S rRNA+5.8S rRNA?9核糖体的合成与装配106.3 核糖体的功能 核糖体的 RNA结合位点 与 mRNA结合的位点 :SD序列 蛋白质合成中各位点的协同性 多聚核糖体 (polysome) 蛋白质合成的抑制剂 蛋白质合成的基本过程 蛋白质寿命?11核糖体的功能位点? 12真核与原核 mRNA的差异13SD(Shine-Delgarno) sequence14蛋白质合成中各位点的协同性15多聚核糖体?16嘌呤霉素对蛋白质合成的抑制作用17嘌呤霉素对蛋白质合成的抑制作用186.4 Ribozyme and Antisense RNA 核酶 (ribozyme) 反义 RNA(Antisense RNA)196.4.1 真核细胞中的小分子 RNA(small RNA) 大小 :100 300 bases 由 RNA聚合酶 或 RNA聚合酶 所合成 某些像 mRNA一样可被加帽 类别 :scRNA snRNA20scRNA(small cytoplasmic RNA):snRNA(small nuclear RNA)： snRNPs(small nuclear ribonucleoproteins)颗粒；一个 snRNA, 10个蛋白质 ;有些蛋白质是某 一 snRNP所特有，有些则是各种 snRNP所共有； snRNPs分类 :由于 snRNA富含脲嘧啶核苷，分类时把它分为 U1、 U2、 等。216.4.2 Antisense RNA反义 RNA分类 I类 直接作用于其靶 mRNA的 SD序列和 /或编码区 ; 类 :与 mRNA的 SD序列的上游非编码区结合 ,从而抑制靶 mRNA的翻译； III类 : 核酶 (ribozyme)226.4.3 Ribozyme An enzyme in which RNA rather than protein is responsible for catalytic activity. 与蛋白质酶相比，核酶的催化效率较低，是一种较为原始的催化酶。23核酶的作用24核酶的发现 几个基本概念 间隔序列 (space sequence) 内含子 (intron) 外显子 (exon)25卵清蛋白前体mRNA的加工26 发现 1980s Thomas Cech等 研究四膜虫的 26SrRNA前体加工 发现 :26S rRNA前体可进行自剪切 (self- splicing) 证明26 SrRNA基因克隆 无细胞系统中转录 研究 26S rRNA的前体分子剪切27rRNA前体的自剪接2850S核糖体中 23S rRNA核酶活性 起因 :肽酰转移酶 (peptidyl transferase) 发现者 :Harry Noller等 ,1992年 实验过程 : 破坏 50S亚基核糖体蛋白质蛋白酶 K、 SDS、 苯酚等 破坏 rRNA核酸酶处理 50S亚基 核糖体 抑制蛋白质合成用抑制剂处理 结论 :具有肽酰转移酶的活性分子是 23SrRNA。 296.4.3 核酶核酶的类型 RNA和蛋白