2002-2012年诺贝尔生理医学奖

20022012年近十年诺贝尔生理或医学奖的相关实验汇总 1、2002 年，英国科学家悉尼 布雷内、约翰苏尔斯顿和美国科学家罗伯特霍维茨。 他们为研究器官发育和程序性细胞死亡过程中的基因调节作用作出了重大贡献。 相关实验： （1）细胞凋亡诱导模型 staurosporine 诱导的细胞凋亡 双氧水诱导肿瘤细胞凋亡 肿瘤坏死因子（TNF-）对耐药肿瘤细胞凋亡的诱导作用 （2）细胞凋亡的检测 流式细胞仪检测细胞凋亡 荧光显微镜观察肿瘤细胞凋亡 TUNEL 法检测细胞凋亡实验 透射电镜形态学观察细胞凋亡 （3）细胞凋亡相关指标检测 细胞凋亡中 Caspase-3 活性的检测 细胞凋亡中磷脂酰丝氨酸外翻分析（Annexin V 法） 2、2003 年，美国科学家保罗 劳特布尔和英国科学家彼得曼斯菲尔德。他们在核磁共 振成像技术上获得关键性发现，这些发现最终导致核磁共振成像仪的出现。 相关实验： 核磁共振波谱在肿瘤治疗领域的应用 体液的核磁共振波谱诊断肿瘤 细胞的核磁共振波谱诊断肿瘤 组织的核磁共振波谱诊断肿瘤 活体组织的定域核磁共振波谱诊断肿瘤 3、2004 年，美国科学家理查德 阿克塞尔和琳达巴克。他们在气味受体和嗅觉系统组 织方式研究中作出贡献，揭示了人类嗅觉系统的奥秘。 相关实验： （1）气味受体发现 气体受体基因定位研究 气味受体（G2 蛋白偶联受体）功能测定 （2）气味受体表达 总 RNA 的提取 逆转录-聚合酶链反应（ RT-PCR） 4、2005 年，澳大利亚科学家巴里 马歇尔和罗宾沃伦。他们发现了导致人类罹患胃炎、 胃溃疡和十二指肠溃疡的罪魁幽门螺杆菌，*性地改变了世人对这些疾病的认识。 相关实验： （1）幽门螺杆菌检测 幽门螺杆菌的直接检查 尿毒酶检查幽门螺旋杆菌 免疫学检测幽门螺杆菌 抗体检测幽门螺杆菌 （2）幽门螺杆菌性质 药物敏感性实验 血凝抑制试验 5、2006 年，美国科学家安德鲁 法尔和克雷格梅洛。他们发现了核糖核酸(RNA) 干扰机 制，这一机制已被广泛用作研究基因功能的一种手段，并有望在未来帮助科学家开发出治 疗疾病的新方法。 相关实验： （1）RNA 干扰质粒载体的构建 siRNA 的构建方法 细胞转染实验 （2）RNA 干扰 Western Blot 免疫印迹实验操作规程 RNA 干扰实验（RNAi） 6、2007 年，美国科学家马里奥 卡佩基、奥利弗史密斯和英国科学家马丁埃文斯。 他们的一系列突破性发现为“基因靶向”技术的发展奠定了基础，使深入研究单个基因在 动物体内的功能并提供相关药物试验的动物模型成为可能。 相关实验： （1）靶向基因构建 逆转录-聚合酶链反应（ RT-PCR） 外源基因的诱导表达 酶切技术 - DNA 酶切实验 蛋白质的表达、分离、纯化 （2）靶向基因检测 细胞免疫荧光步骤 实时荧光定量 PCR（realtimePCR ） MTT 比色法 （3） 应用实例 靶向 EGFR 基因 siRNA 表达载体的构建 7、2008 年，德国科学家哈拉尔德 楚尔豪森及法国科学家弗朗索瓦丝巴尔- 西诺西和 吕克蒙塔尼。豪森发现了人乳头状瘤病毒(HPV)，这种病毒是导致宫颈癌的罪魁祸首。 巴尔-西诺西和蒙塔尼的获奖成就则是发现了艾滋病病毒(HIV)。 相关实验： （1）病毒株构建 病毒的鸡胚培养 （2）HPV 的检测以及应用 免疫组化实验方法 荧光原位杂交 直接原位 PCR （3）人乳头状瘤病毒 (HPV)的应用实例 8、2009 年，美国科学家伊丽莎白 布莱克本、卡萝尔格雷德和杰克绍斯塔克。他们 发现了端粒和端粒酶是如何保护染色体的，这一发现解决了一个生物学的重要课题，即染 色体在细胞分裂过程中是怎样实现完全复制的。 相关实验： （1） 端粒酶活性检测 PCR-ELISA 端粒酶检测法 细胞周期的测定 （2） mRNA 表达水平的检测 实时荧光定量 PCR（realtimePCR ） 9、2010 年，英国科学家罗伯特 爱德华兹。他创立了体外受精技术，因此又被誉为“试 管婴儿之父”。至今，全球已有 400 多万人通过试管婴儿技术出生，其中许多人以自然受 精方式生育了后代。 相关实验： 异种体外受精实验模型的建立 牛的胚胎移植 卵母细胞的采集和培养 采精和获能处理 受精后的胚胎培养 10、 2011 年，美国科学家布鲁斯巴特勒、卢森堡科学家朱尔斯霍夫曼和加拿大科学家 拉尔夫斯坦曼。他们发现了免疫系统激活的关键原理，这使人们对人体免疫系统的认识 有了根本性的改变。 相关实验： 酶联免疫吸附实验（ELISA）实验 免疫血清制备方法 细胞免疫荧光步骤 树突状细胞（DC）的获取和培养 人外周血树突状细胞的体外扩增及鉴定 cDNA 文库构建 2012 年 10 月 8 日，瑞典诺贝尔奖评审团宣布，日本京都大学山中伸弥(Shinya Yamanaka)与 英国发育生物学家约翰戈登(John Gurdon)因在细胞核重新编程研究领域作出杰出贡献， 获得 2012 年诺贝尔生理学或医学奖。 山中伸弥是诱导多功能干细胞(iPScell)创始人之一。2007 年，他所在的研究团队通过对小 鼠的实验，发现诱导人体表皮细胞使之具有胚胎干细胞活动特征的方法。此方法诱导出的 干细胞可转变为心脏和神经细胞，为研究治疗目前多种心血管绝症提供了巨大助力。这一 研究成果在全世界被广泛应用，因为其免除了使用人体胚胎提取干细胞的伦理道德制约。 约翰-戈登，1933 年出生于英国汉普郡。 1971 年当选英国皇家学会会员，1983 年进入剑 桥大学动物系，担任细胞生物学讲座教授，现任职于剑桥大学戈登学院。1989 年获得以色 列沃尔夫医学奖。被誉为动物细胞全能型研究的先驱 /bbs/topic/23925698/丁香园 “诱导多功能干细胞（iPS）研究 ”所涉及的实验技术 1、【基因导入技术 】 基因导入技术是制备 ips 细胞的主要技术，基因载体的改良推动无遗传修饰 ips 细胞的建立。 载体主要有整合型载体、非整合型载体以及新型载体。 整合型载体介导的基因导入技术 非整合型载体介导的基因导入技术 新型载体介导的基因导入技术 2、【蛋白质转染技术 】 为克服当前基因操作风险，丁胜研究组首次采用蛋白质转染技术制备 iPS 细胞 ，添加化学 小分子丙戊酸(valproic acid，VPA)情况下，融合穿膜肽 11R (poly-arginine) 的蛋 白质组合 11R-Oct4、11R-Sox2、11R-Klf4、11R-c-Myc 和 11R-Oct4、11R-Sox2 、11R-Klf4 2 种组合分别 将小鼠成纤维细胞重编程为 iPS 细胞。 蛋白质转染诱导 ips 细胞 细胞膜的通透性观察实验 3、【化学药物诱导技术 】 体细胞重编程效率低且动力学缓慢(23 周)，极大制约 iPS 细胞研究与应用 化学物质可以 提高重编程效率，并且能功能性替代某些转录因子，其主要通过影响细胞表观遗传修饰和 信号转导通路发挥作用。 3.1 表观遗传途径 表观遗传修饰在体细胞重编程 程中有着重要作用，化学小分子改变体细胞的 DNA 甲基化、 组蛋白修饰(乙酰化、甲基化和磷酸化等 )等表观遗传特性提高重编程效率。 亚硫酸氢盐修饰后测序法检测甲基化 RNA 干扰（转录后基因沉默）实验 3.2 信号通