2010省自然右归丸标书

项目类别 学科名称 1 学科代码 1 学科名称 2 学科代码 2 项目受理号 C 中医妇科 H2711 湖 南 省 自 然 科 学 基 金 项 目 申 请 书 ( 表 一 ) 项目名称：右归丸干预卵巢早衰大鼠 INH-ACT-FS 系统和卵泡闭锁的机制 申 请 人： 丁 青 依托单位： 湖南中医药大学 邮政编码： 410007 通讯地址： 湖南长沙韶山中路 113 号 E mail： 电 话：传 真：申请日期： 2010 年 8 月 8 日 湖南省自然科学基金委员会 二一年制 2 填 写 要 求 一、 本申请表为自然科学基金申报编制。所有内容采用国家公布的标准简化汉字。简表中 所有代码以最新发布的湖南省自然科学基金学科分类目录及代码为准填写。 二、 凡选择性栏目，将相应提示符 A、B 等之一填入该栏的右下角。 三、 部分栏目填写要求： 项目类别分为一般项目、青年基金、重点项目、青年人才培养重点联合基金、青年 人才培养一般联合基金； 所属学科按照数学、力学、物理学、化学与化工、生命科学、地球科学、材料、工 程、信息科学、管理科学、医学 11 类； 项目名称应确切反映研究内容和范围； 基础研究指认识自然现象、探索自然规律，不直接考虑应用目标的研究活动； 应用基础研究指有广泛应用前景，以获得新原理、新技术、新方法为主要目的研究； 学科代码按湖南省自然科学基金学科分类目录及代码二、三级学科填写，有三 级学科的必须填到三级学科，交叉学科可以填两个学科代码； 申请金额以万元为单位，用阿拉伯数字表示； 起止年限一般为 3 年； 依托单位名称按单位公章填写全称； 单位代码指依托单位代码； 项目组主要成员指在项目组内对学术思想、技术路线的制订与理论分析及对项目完 成起重要作用的人员，项目组主要成员本人应在申请书上亲自签字以示同意合作。 3 一、简表 中 文 右归丸干预卵巢早衰大鼠 INH-ACT-FS 系统和卵泡闭锁的机制名 称 英文 The Mechanism of You Gui Wan intervent INH-ACT-FS System and Follicule atresia of Premature Ovarian Failure Mouse 类 型 A.一般项目 B.青年基金 C.重点项目 D.青年人才培养重点联合基金 E.青年人才培养一般联合基金 所属学科 医学 学科名称 1 中医妇科学 学科代码 1 H2711申报 学科 学科名称 2 学科代码 2 .基础研究 .应用基础 A 项 目 基本 信息 申请金额 20 万 元 起止年限 2011 年至 2013 年 姓 名 丁青 性别 .男.女 B 身份证号（军官证号） 43030419600910202x 民族 汉 专 业技 术 职 务 教授 学 位 .博士 .硕士 .学士 A 博士学位授 予国别或地 区 中国 .博 士 生 导 师 .博 士 后 联系电话E-mail 名 称 湖南中医药大学 系（所） 中西医结合 单位代码 依托单位 信息 性 质 .高 等 院 校 .科 研 机 构 .其 它 A 科技处电话 1012A 邮政编码 410007 名称 负责人 电话 申 请 人 信息 合作单位信 息 名称 负责人 电话 总人数 高级 中级 初级 博士后 博士生 硕士生 参加单位数 6 3 1 2 1 2 3 1 姓 名 身份证号 学历 技术职称 工作单位 现从事 专业 项目中的 分工 签字 雷磊 博士 教授 湖南中医药大学 中西医结合妇科 动物实验 林洁硕士 教授 湖南中医药大学附一院 中西医结合妇科 临床研究 项 目 组 主 要 成 员 不 含 申 请 人 伍参荣硕士 教授 湖南中医药大学 医学免疫 医学免疫 分子生物 学 4 陆惠硕士 研究 生 湖南中医药大学 中西医结合妇科 动物造模 尚芬芬 硕士 研究 生 湖南中医药大学 中西医结合妇科 动物造模 二、研究基础 申请人和项目组主要参与者承担的国家或省级研究项目情况 项目批准号 项目名称 项目来源 起止年月 负责人 项目经费 （万元） 进展情况 注：此表包括省（部）自然科学基金的项目。 申请人和项目组主要参与者发表的代表性学术论文（著作）情况 序号 论文（著作）名称 作者 发表时间 发表刊物 收录情况 1、工作基础：与本项目相关的研究工作积累和已取得的研究工作成绩 主要论文 微观望舌研究的最新进展.云南中医学院学报.云南省中医中药研究所主办， 1991，12(3)：13-17 诸病源候论崩漏浅析.四川中医.中华全国中医学会四川分会主办，1991，9(11)： 5. 潜熄宁治疗阴虚阳亢型高血压 60 例临床研究.中国中西医结合杂志.中国中西医结 合学会、中国中医研究院主办，1992，12(7)：409-411 三七加味汤对药物流产阴道出血量和出血时间的影响.湖南中医学院学报.2004，24(2)： 40-44. 中药治疗药物流产后出血的临床研究进展.湖南中医药导报.2004，10(1)：42-44. 5 三七复合有效成分对子宫内膜炎症细胞 NF-Bp65、TNF- 和 IL-1 变化的影响.中国 中医药科技.2007, 14(2)：113-115. 三七复合有效成分对子宫内膜炎症细胞一氧化氮及一氧化氮酶的影响.中国中医药科技. 2007，14(2)：115-117. 三七复合有效成分对子宫内膜炎症细胞纤溶因子 t-PA 及 PAI-1 的影响.中国中医药科技. 2007，14(2)：117-118. 三七复合有效成分对子宫内膜炎症细胞 MMP-1、TIMP-1 及 VEGF 的影响.中国中医药科技. 2007，14(2)：118-120. 三七提取物对子宫内膜炎症细胞 NF-Bp65、TNF- 及 iNOS 的影响.湖南中医药大学学 报.2009，29(1)：15-19. 主要著作（教材）： 中西医结合妇科学 （为全国统编教材，个人完成 7 万字） ；中国中医药出版社 2001.8 编委 实用妇产科手册 （为全国教辅教材，个人完成 2 万字） ；中国中医药出版社 2001.6 编委 湖湘名医典籍精华.妇儿卷 （个人完成 7 万字） ；湖南科技出版社 2001.6 参编 主要课题 脑缺血 IL-1B 基因表达及清热活血法干预作用的研究科研课题经费 10 万元 2001.12003.12 排名第三（省自然科学基金项目） 2、申请人简介：申请人和项目组主要参与者的学历和研究工作简历，近期已发表与本 项目有关的主要论著目录和获得学术奖励情况及在本项目中承担的任务。论著目录要求详细 列出所有作者、论著题目、期刊名或出版社名、年、卷（期） 、起止页码等；奖励情况也须 详细列出全部受奖人员、奖励名称等级、授奖年等。 丁青：女，教授（硕士生导师） 1989 年 9 月至 1991 年 10 月 湖南中医学院硕士研究生。 1995 年 7 月 晋升副主任医师。 2003 年 9 月至 2006 年 6 月 湖南中医药大学博士研究生，获中西结合妇科博士学位。 2004 年 7 月 晋升教授。 2006 年 5 月至 2010 年 5 月 湖南中医药大学七年制教学管理办主任。 2007 年 4 月 聘为硕士生导师，国家执业医师资格考试技能操作考官。 6 2010 年 5 月至今 湖南中医药大学附属常德医院副院长。 雷磊：男，教授（博士生导师）国家自然科学基金委生命科学部同行评审专家，湖南 省自然科学基金评审专家、湖南省科技进步奖评审专家，世界中医药学会联合会妇科 专业委员会理事，湖南省病理生理学会常务理事。 1993 年 7 月至 1999 年 9 月 安徽中医学院针灸经络研究所助理研究员、副研究员。 2002 年 7 月至 2006 年 9 月 湖南中医药大学中西医结合学院副教授、副研究员。 2006 年 10 至今 湖南中医药大学中西医结合学院教授、研究室主任。 主要从事女性内分泌病证防治机理的研究。 主要论著 1.益气化瘀法对置铜宫内避孕器家兔子宫内膜血管内皮细胞及平滑肌细胞超微结构 的影响J.中西医结合学报.2006,4(1):60-63. 2.宫环止血片工艺中水提液醇沉与不醇沉样品的药效实验研究J.中医药信息, 2005,12(2):162-163. 3.益气化瘀法对置铜宫内节育器家兔子宫内膜形态学的影响J.中国中医基础医学 杂志,2004,10(11):41-43. 4.宁环片对置铜宫内节育器家兔子宫内膜形态学的影响J.中国中医药科技. 2004,11(4):203-204. 5.宫环止血片对离体大鼠子宫平滑肌收缩活动的影响J.中国中医药信息杂 志,2004,11(6):495-497. 6.针刺防治实验性动脉再狭窄模型大鼠抗氧自由基作用的初步研究J.中国针 灸,2003,23(3):176-179. 7.针刺对实验性动脉再狭窄模型前列腺素和血栓素影响的研究J.中国中医基础医 学杂志 2002,8(11):53-56. 8.针刺防治实验性动脉再狭窄及其机制的初步研究J.针刺研 究,2002,27(3):214-219. 9.针刺对兔血管再狭窄模型内皮细胞凋亡及表达的影响J.中国中医药科 技.2008,15(1):3-5. 主要研究项目 1寿胎丸对母胎免疫调节中作用的研究（2007FJ2005）.湖南省社会发展基金重点 项目.2008.1-2010.12 7 2功能失调性子宫出血证候规范化和疗效评价(05A031).湖南省教育厅科研重点项 目.2006.1-2008.12 伍参荣：教授（硕士生导师） 1969 年 毕业于湖南医科大学，本科。开始从事医疗临床工作。 1979 年 湖南医科大学全国高等院校师资班。 1985 年 天津医学院全国高等院校医学统计学习班学习。 1988 年 河北医科大学硕士研究生班学习。现担任湖南省微生物学会副理事长， 湖南省中西结合基础委员会副主任委员，全国中医免疫学会常务理事。 1978 年至今 一直从事微生物与免疫学的教学与科研工作，主要从事中医药抗感染性 疾病的免疫学机理研究。 主要论著目录和获得学术奖励： 近 5 年来参加、主持国家自科委、省自科委课题 15 项，发表论文 21 篇。获省级科学 进步奖一、二、三等奖各一项，省级自然科学优秀论文二、三等奖各一项。主编或参 编专著或教材 6 部：医学免疫学基础与病原生物学 、 人体机能学 、 生命物质基 础 、 病原生物学 、 病原生物学实验指导 、 医学免疫学 。 林洁：女，教授（硕士生导师）科室副主任、中华中医妇科学会委员，湖南省医疗事故 鉴定委员会专家。 1985 年 7 月至 1992 年 10 月 在湖南中医药大学附属一医院中医妇科从事临床、科研。 任住院医师。 1992 年 10 月至 2000 年 10 月 在湖南中医药大学附属一医院妇产科从事中医、中西医 结合妇科临床、科研。任主治医师、讲师。 2000 年 10 月至 2007 年 10 月 在湖南中医药大学附属一医院妇产科从事中医、中西医 结合妇科临床、科研。任副主任医师、副教授。 2000 年 5 月至今 担任湖南中医药大学附属一医院妇产科副主任。 2007 年 11 月至今 湖南中医药大学附属一医院妇产科从事中医、中西医结 合妇科临床和科研工作。任主任医师、教授。 主要论文 1.林 洁 ,冯 光 荣 ,尤 昭 玲 .等 .补 肾 活 血 方 对 恒 河 猴 PCO 模 型 卵 巢 MMPs-2、 MMPs-9mRNA 表 达 影 响 的 实 验 研 究 .中 国 中 医 药 科 技 . 2007.14.(3)196 197 8 2.林洁，王若光，李春梅.等.黄芪丹参复方成分对一氧化氮合成阻滞孕鼠胎盘滋养细胞 内皮型一氧化氮合酶 mRNA 表达影响研究.中国实验方剂学杂志.2006.12.(12)32 34 林洁,肖晓菲.游卉.等.易黄汤治疗细菌性阴道病 50 例临床研究.新中医.2007.39.(5) 20 21 3.林洁,肖晓菲.女性生殖道解脲支原体感染的中医药研究近况.湖南中医药导报. 2007.(7). 4.罗岚,林洁.基质金属蛋白酶2、9 与卵巢周期性变化的研究进展.中医药学刊. 2006.24.(1) 5.肖晓菲,林洁.高催乳素血症的中医药治疗研究近况.中医药导报.2006.12.(12) 87 89 6.徐艳,林洁.细菌性阴道病的中医辨证及西医发病机理的综述.中医药导报.2008.14.(2) 92 94 7.欧玲,林洁.慢性宫颈炎的中西医治疗概况.中医药导报.2007.13(12).90 91.96 刘文娥,林洁.腹腔镜下子宫切除术中应用垂体后叶素对出血量的影响.2008.中国现代药 物应用.2008.2.(13).70 71. 主要著作 1.中医妇科查房手册.山西科学技术出版社.2004 年(主编) 2.中医诊治要诀系列丛书妇儿科证治要诀.山西科学技术出版社.2001 年(主编) 3.妇科病名家医案妙方解析.人民军医出版社.2007 年 1 月(副主编) 主要研究项目 1.蒲黄黄酮雌激素效应及其对血管内皮细胞的保护作用研究.湖南省自然科学 2008 年基 金项目(2008).主持 2.补肾化瘀复方成分群对 IGFs 系统旁分泌/自分泌调控卵泡细胞发育的干预.2005 年湖 南省自然科学基金(2005).排名第三. 3、完成湖南省自然科学基金项目情况：对申请人负责的前一个已结题科学 基金项目（项目名称及批准号）完成情况、后续研究进展及与本申请项目的关系 加以详细说明。另附该已结题项目研究工作总结摘要和相关成果的详细目录。 9 4、工作条件：已具备的实验条件，尚缺少的实验条件和拟解决的途径。 1、 俱从事研究的 120m2的中西医结合基础研究室，有清洁级动物实验中心和专门从事药学 研究的药学分院。 2、 仪器设备如：超净工作台、快速冰冻组织切片机、超低温冰箱、西德万能显微镜、自动 生化检测仪、酶标仪、HP 电子显微镜、闪烁计数器。 3、 实验所需试剂盒均有货供应，货已落实联系。 4、 实验组人员均具有硕士以上学位，熟练掌握药物制备、放免法、免疫组化及形态学，只 要试剂到位，成功的几率很大。 一、 申请人承诺 我保证申请书内容的真实性。如果获得基金资助，我将严格遵守湖南省自然 科学基金委员会的有关规定，切实保证研究工作时间，按计划认真开展研究工作， 按时报送有关材料。若填报失实和违反规定，本人将承担全部责任。 申请人（签字）： 年 月 日 四、依托单位及合作单位承诺 已 按 填 报 说 明 对 申 请 人 的 资 格 和 申 请 书 的 内 容 进 行 了 审 核 。 申 请 项 目 如 获 资 助 ， 我 单 位 保 证 对 研 究 计 划 实 施 所 需 要 的 人 力 、 物 力 和 工 作 时 间 等 条 件 给 予 保 障 ， 严 格 遵 守 湖 南 省 自 然 科 学 基 金 委 员 会 有 关 规 定 ， 督 促 项 目 负 责 人 和 项 目 组 主 要 参 与 者 以 及 本 单 位 项 目 管 理 部 门 按 照 湖 南 省 自 然 科 学 基 金 委 员 会 的 规 定 及 时 报 送 有 关 材 料 。 10 依 托 单 位 （ 盖 章 ） 合 作 单 位 1（ 盖 章 ） 合 作 单 位 2（ 盖 章 ） 五、相关附件材料清单（附件材料复印后随纸质申请书一并上交，图片 总容量不超过 1 兆，原则上只要求重点项目提供全部附件，青年项目提供身份及 资格证明。 ） 1、身份证明：身份证或军官证。 2、资格证明：职称证书、博士学位证或者大使馆开具的出国一年以上证明 等，以上证书复印件由单位核实后加盖公章证明。 3、能力与水平证明：主持过国家级项目的批文；国家级科技奖励（国家自 然科学奖、国家发明奖、国家科学技术进步奖）、省部级奖励或国际学术性奖励 包括奖励名称、等级、获奖者（按顺序全部列出）、获奖时间证书复印件；专 利或其它公认突出的创新性成果材料复印件；国际学术会议报告、特邀报告邀请 信或通知复印件；代表性论著（封面、封底、版权页）复印件。 4、推荐意见 （不具备高级专业技术职务的申请者，须有两名具有高级专业技术职务的同 行专家推荐。推荐时，请认真负责地介绍申请者及其项目组成员的业务基础、研 究能力、科研态度及研究条件等。注：项目组成员不能做推荐者） 推 荐 者 （ 签 字 ） 专 业 技 术 职 务 现 从 事 专 业 依 托 单 位 ： 11 推 荐 者 （ 签 字 ） 专 业 技 术 职 务 现 从 事 专 业 依 托 单 位 ： 项目类别 学科名称 1 学科代码 1 学科名称 2 学科代码 2 项目受理号 湖 南 省 自 然 科 学 基 金 项 目 申 请 书 ( 表 二 ) 项目名称：右归丸干预卵巢早衰大鼠 INH-ACT-FS 系统和 卵泡闭锁的机制 12 湖南省自然科学基金委员会 二一年制 注意：湖南省自然科学基金申请书（表二）所填写全部内容不得出现申 请人及项目组成员的姓名、工作单位及相关信息，否则，将视为形式审查不 合格。 一、 内容摘要（不超过 400 字） 本项目以右归丸为研究对象，采用分子免疫学技术，观察右归丸对卵巢早衰动物模型和 离体细胞培养的干预作用，从表皮生长因子 mRNA、胰岛素样生长因子 ImRNA、胰岛素样 生长因子 IImRNA、转化生长因子-mRNA 的表达，抑制素-A、抑制素-B、激活素、卵泡 抑素、雌激素等的产生量，颗粒细胞的超微结构，卵母细胞成熟度，优势卵泡排除等途径， 阐明 INH-ACT-FS 系统与 POF 之间的关系，从卵泡闭锁角度探讨右归丸治疗卵巢早衰的机理， 为治疗卵巢早衰提供新方法、新思路和实验依据。 二、 立项依据 研 究 意 义 、 国 内 外 研 究 现 状 及 发 展 动 态 分 析 ， 需 结 合 科 学 研 究 发 展 趋 势 来 论 述 科 学 意 义 ； 或 结 合 国 民 经 济 和 社 会 发 展 中 迫 切 需 要 解 决 的 关 键 科 技 问 题 来 论 述 其 应 用 前 景 。 附 主 要 参 考 文 献 目 录 。 1、项目研究的意义 卵巢早衰(premature ovarian failure, POF)是指性器官发育正常的女性在 40 岁以前出现闭经， 促性腺激素水平升高，雌激素（E 2）降低，卵泡数量减少，卵巢体积缩小并最终萎缩的卵巢功能衰退现 象，发病率约为 1%3%1 。POF 除了导致不孕、缺雌症状和相应病症外，还可出现各种类更年期综合征， 13 严重影响了妇女的身心健康及生活质量。随着近代医学的进步，很多妇女在儿童期或青少年的疾病虽然 治愈，但治疗时化疗药物的使用，以及疾病损伤的后遗作用却导致卵巢早衰的高危人群迅速上升 2。目 前西医的治疗方法，根据有无生育要求采用激素替代，促排卵法，辅助赠卵，自身免疫抑制治疗，以及 近年报道的卵巢组织冻存法（OTCP）等方法治疗，但都存在一定的风险或因各种原因让人难以接受。因 此，积极探讨 POF 发病机理，开辟一条经济、安全而有效的中医药防治道路很有必要。 2、国内外研究现状分析 （1）中医对卵巢早衰的认识 传统医学认为，本病属“血枯” 、 “血膈” 、 “闭经” 、 “不孕”等范畴。 内经云：“女子七岁肾气 盛，齿更，发长；二七而天癸至，任脉通，太冲脉盛，月事以时下；七七任脉虚，太冲脉衰少，天 癸竭，地道不通，故形坏而无子也。 ”傅青主女科曰：“经水出诸肾” 、 “经水早断，似乎肾水衰涸” 、 “肾气本虚，何能盈满而化经水外泄” 。可见肾在女性生殖生理中有不可替代的作用。卵巢早衰的临床 特点就是未至绝经年龄而过早绝经，因此对该病的治疗多从肾虚考虑。中医肾主生殖中，肾代表了脑、 冲任、天癸、脑肾间功能的控制和调节，这与现代医学中的中枢神经系统通过下丘脑、垂体和卵巢间生 殖功能调节有相应之处。大量研究结果及临床观察表明， “肾虚”患者生殖内分泌存在不同程度的功能 异常 3。因此，肾虚是卵巢早衰的主要病机。肾虚以阳虚为主，卵子是肾所藏之精，肾精是其物质基础。 肾阳是其生长的动力，肾精充盛，则卵子得以正常发育。阳主乎动，卵子发育成熟而释放的原动力来自 于肾阳的鼓动。 “肾者主蛰，司开合” ，肾主闭藏，司开合是肾阳功能的表现。 “阳者卫外而为固也” ，肾 阳保证肾在排卵前只合不开，发挥主蛰主闭藏之功能，肾藏精而不泻，肾精充盛，卵子发育成熟；阳主 乎动，肾阳之气化使肾在排卵期短暂开放，作为内在动力鼓动成熟卵子排出。若肾阳亏虚，闭藏功能失 调，是当合不合，卵泡不能发育成熟，也是当开不开，不能作为内在动力和鼓动卵子释放。肾阴虚则表 现为垂体功能亢进，FSH 水平升高，是卵巢功能不足或衰退造成 E2水平低落，从而对垂体促性腺激素的 分泌失去负反馈作用所致 4。 （2）右归丸治疗卵巢早衰的研究现状 右归丸出自明代杰出医家张景岳之景岳全书 ，由熟地、山药、山茱萸、枸杞、鹿角胶、菟丝子、 杜仲、当归、肉桂、制附子组成，具有温补肾阳，填精益髓之功，是“阳中求阴”的代表方。临床应用 该方治疗不孕症、更年期综合征疗效显著 5-7。从大量动物实验研究中发现，本方有调节下丘脑-垂体- 卵巢-性腺轴 8，促进卵巢分泌 E2、睾酮（T） 9-10，抑制卵巢卵泡细胞凋亡 11，增强机体免疫力 12作 用。周玲生 13实验研究证明六味地黄汤具有雌激素样作用，可以通过调节下丘脑-垂体-卵巢轴的功能， 14 调节卵巢功能。右归丸是六味地黄丸加味，可以从肾阳虚的角度治疗卵巢早衰。 （3）西医对卵巢早衰的认识 西医关于卵巢早衰的病因及发病机制尚不明确。现认为主要原因有遗传因素、免疫因素、物理化学 因素及促性腺激素（FSH、LH）及其受体（FSHR、LHR）缺陷等 14。以上因素可导致：原始卵泡数量 减少；卵泡闭锁增加或加速；卵泡成熟障碍，最终引起卵巢合成性激素功能低下或者不能合成，降 低了对下丘脑-垂体轴的负反馈作用，导致 FSH、LH 升高，E 2降低的一种状态 15。其生理改变是卵巢中 的卵泡闭锁所致 15。卵泡闭锁受多种卵泡存活因子和卵泡闭锁因子的调控，当前者处于优势地位，卵泡 继续发育成熟并排卵；相反，当后者处优势地位时，卵泡就发生闭锁。近年来，卵巢局部因子对卵泡闭 锁的调节作用引起人们的关注。 （4）INH-ACT-FS 系统与卵巢早衰 INH-ACT-FS系统是调节卵泡刺激素(FSH)-黄体生成素(LH)分泌的新家族。主要在垂体细胞和卵巢 颗粒细胞中分泌。该系统的发现是下丘脑-垂体-卵巢轴调控机制研究的一个突破性进展。INH、FS能抑 制卵泡闭锁，而ACT则促进卵泡闭锁。周卫琴,沈宗姬 16等在研究INH-ACT-FS系统时发现异常高的INH 及 FS，再加上降低的ACT 的变化，过度抑制了能刺激颗粒细胞增殖分化的FSH的合成和分泌，从而影响了 卵细胞的生长发育。ACT可诱导卵泡颗粒细胞形态变化，并通过增加颗粒细胞上FSH的受体水平及结合位 点，使FSH的生理作用增强，后者能刺激芳香化酶活性，增加孕酮（P）及INH生成。人卵泡颗粒细胞上 存在ACT-A的受体 17。INH在卵巢局部的旁/自分泌作用表现为：INH抑制FSH诱导的芳香化酶活性，抑制 颗粒细胞表面FSHR、LHR的表达，并促进P合成。INH可以反馈抑制垂体合成分泌FSH，还可以通过调节增 加E 2底物来调节E 2的产生 18。韩国学者检测了45例接受体外受精(IVF)促超排卵妇女在HCG日的血清INH- B水平发现血清INH-B与未成熟卵母细胞数以及成熟卵母细胞数均呈正相关，并且与未成熟卵母细胞数 的相关性更大 19。FS是ACT的特异结合蛋白，它能抑制颗粒细胞芳香化酶的活性，抑制FSH合成和分泌能 够以12的比例与ACT不可逆结合并使之失活，间接抑制FSH的合成与分泌 20。它们的变化可能启动了围 绝经期女性生殖内分泌轴的一系列变化。 （5）相关效应指标与卵巢早衰 人类卵泡的颗粒细胞可合成胰岛素样生长因子（insulin like growth factor IGF） 。IGF包括 两种IGF多肽(IGF-1，IGF-2)，IGF-1和IGF-2。它们均能刺激次级卵泡的生长 21。IGF-可以刺激体外 培养的颗粒细胞增生、E 2合成增加、芳香化酶活性提高及氨基酸积聚，也可以加强FSH促进卵泡发育的作 用，还能诱使未成熟的人类卵母细胞自发成熟，并取得良好的分裂 22。IGF-在优势卵泡的卵泡液及颗 15 粒细胞上大量存在，即随着小窦卵泡生长成优势卵泡，IGF-的表达也从卵泡膜细胞转移至颗粒细胞。 IGF-具有放大促性腺激素的作用，可使卵巢颗粒细胞的膜表面FSHR、LHR增加，FSH与FSHR结合后，芳 香化酶活性增高，可提高E 2的合成并促进卵泡的发育，促性腺激素也能促进卵巢IGF及其受体的产生。 IGF-表达由卵泡膜细胞逐渐转向颗粒细胞是优势卵泡选择的标志。研究表明，阻止卵巢卵泡中IGF活 性与信号，则会影响卵泡的发育、类固醇激素的生成与卵母细胞的质量 23。故作为卵巢内的调节因子之 一，IGF与卵泡的发育、优势卵泡的选择、卵母细胞的成熟及黄体功能密切相关 24-25，并能抑制卵泡的 闭锁。 表皮生长因子（epidermal grouth factor，EGF）有促进卵泡闭锁的作用，初级卵泡、窦前卵泡、 窦状卵泡上都有EGFR表达。EGF是卵泡颗粒细胞有丝分裂原，促进颗粒细胞大量增殖，而卵母细胞的生 长依赖于周围的颗粒细胞，其生长率与偶联的颗粒细胞数量成正比。通过对小鼠未成熟卵母细胞体外培 养发现，EGF可促进其成熟 26。马红等 27研究表皮生长因子受体在绵羊卵巢中的表达发现EGFR蛋白的表 达具有时空特异性，它集中分布在发育各阶段的卵泡颗粒细胞中，并随卵泡的发育程度表现出表这量的 差异且证明了EGFR与其配体EGF结合具有刺激颗粒细胞增殖分化、促进卵丘扩展和刺激卵母细胞成熟的 功能。EGF通过三方面抑制E 2的分泌：直接抑制颗粒细胞分泌，抑制颗粒细胞芳香化酶活性，抑制 FSH诱导的LH受体形成。 转化生长因子（transforming growth factor-，TGF-）能够促进颗粒细胞的增殖与分化，既 可促进卵泡闭锁，又可促进卵泡分化 28免疫组化显示，人卵巢颗粒细胞有 TGF 的表达。卵巢 TGF- 及 其受体的表达受促性腺激素的调控，随着促性腺激素刺激卵泡的发育，卵巢 TGF- 受体的表达也增加， 说明 TGF- 参与卵泡发育过程。实验证明，TGF- 可提高鼠颗粒细胞对低剂量 FSH 刺激的敏感性，能 增强其芳香化酶活性，可以直接刺激腺昔酸环化酶活性产生的升调节作用，进而提高颗粒细胞内的 cAMP 的生成，增加 E2的产生。 细菌脂多糖（LPS）可诱导体外培养的人单个核细胞表达 IL-6 mRNA，其作用强度与 LPS 剂量呈正相 关，人卵巢颗粒细胞有 IL-6 受体表达。体外培养的颗粒细胞经 LPS 刺激后可产生大量的肿瘤坏死因子 （TNF-） 。IL-6 和 TNF- 促进大鼠卵巢颗粒细胞凋亡，造成卵巢闭锁加速的卵巢早衰过程 29 故本研究通过注射完全弗氏佐剂一透明带多肽（CFA-PZP3）建立 POF 大鼠模型 30，此方法建立模型 的周期短，大鼠的成活率高。以颗粒细胞分泌的局部调节因子入手，采用分子免疫学方法观察右归丸对 卵巢早衰动物模型的干预作用，探讨右归丸的作用机理，为中医药有效的防治 POF 奠定基础。 主要参考文献 16 1 Alzubaidi Naharain H,Chapin Heather L,et al.Meeting the needs of young women with secondary amenorrhea and spontaneous premature ovarian failure.Obstet GynecolJ.2002,99(5pt1):702-705. 2Nick Panay, Emmanuel Kalu，et al. 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