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红细胞检验的基础理论 安徽医科大学第一临床学院 临床检验诊断学教研室 安徽医科大学第一附属医院检验科 徐元宏 一、红细胞膜 (一)红细胞组成与结构 红细胞膜是由蛋白质(占 4 9.3%)、脂质(占 42%)、糖占(8%)和无机盐组成; 脂质含量高 膜蛋白质 膜脂质:磷脂、胆固醇和中性脂肪、糖脂 红细胞膜结构 (二)红细胞膜的功能 1、为红细胞的生命活动提供相对稳定的内环境 ; 2、选择性的物质运输 氧的运输、CO2运输、离子的运输、水的运输 、葡萄糖的运转 3、提供细胞识别位点、完成细胞内外信息的 跨膜传递 二、血红蛋白 (一)血红素 血红素 (heme)是铁原子和原卟啉IX( protoporphyrin IX) 的复合物,铁原子位于原卟啉IX的中心,血红素由 脾脏、骨髓、肝脏中巨噬细胞降解。 血红素在有核红细胞和肝细胞线粒体内合成,离开线 粒体在细胞质中与珠蛋白肽链结合成HB。 在血红素合成中酶的酶的缺陷导致卟啉或前体物质的 积蓄形成卟啉病。 (二)珠蛋白 人类珠蛋白肽链有6 种,分别命名为、 、。 、 主蛋白基因相近,构成 “”基因簇,由位于人类第16号染色体的短臂上 ; 、珠蛋白基因相近,组成“” 基因簇,位于人类第11号染色体的短臂上,遗传方 式为常染色体共显性遗传。 人类ABO血型位于位于第九号染色体长臂区 带(Q3) ;Rh血型位于位于第1号染色体短 臂上。 三、红细胞代谢 (一)糖代谢 1、无氧酵解 2、磷酸戊糖途径和谷胱甘肽途径 3、其它途径 (二)铁代谢 1、铁的分布 成年男性成年女性 体内铁总 量5055mg/kg3540mg/kg 分布:血红蛋白6670%6670% 肌红蛋白15%15% 细胞酶类1%1% 贮存铁(以铁蛋白形式 ) 7001000mg200400mg 铁 的 分 布 图 2、铁的来源与吸收 3、铁的转运与利用 4、铁的储存与排泄 5、铁的代谢 红细胞检验的基本方法 一、铁代谢检测 (一)血清铁(serum iron,SI)测定 (二)血清铁蛋白测定(serum ferritin test,SF) (三)血清总铁结合力(total iron binding capacity test,TIBC)测定 (四)血清转铁蛋白(serum transferritin)和转 铁蛋白饱和度(transferritin saturation,TS)测定 铁代谢检验 项目组合:FE、UIBC、TF、FER、STFR、TIBC、TFS (%) 血清铁(Iron,FE) 机体从食物摄取的铁必须被还原成Fe2+ 在十二指肠和 空肠吸收。每天约需吸收1mg的铁。在进入血浆前, 被铜蓝蛋白氧化为Fe3,并和转铁蛋白结合。铁离子 在血浆中以转铁蛋白铁复合物运输。每个蛋白分子 最多可运送2个铁离子。血清铁几乎完全和转铁蛋白结 合。 临床意义 血清铁增高: 铁利用障碍如铁粒幼细胞性贫血、再障、铅中毒等。 释放增加如溶贫、急慢性肝炎等。 铁蛋白吸收增加如白血病、含铁血黄素沉着症、反复输 血等。 摄入过多如铁剂治疗过量等。 血清铁减低: 摄入不足:长期缺铁饮食及机体需要增加如婴幼儿、青 少年、妊娠期或哺乳期妇女等。 慢性失血如月经过多、消化性溃疡、恶性肿瘤、慢性炎 症等。 缺铁性贫血。 标本采集 空腹血清或非EDTA抗凝血浆,标 本不可溶血。 参考值 M:1130mol/L;F:9 27mol/L;儿童:922mol/L(诊断学, ED6) M:8.128.3mol/L;F:6.626.0mol/L (Roche说明书)。 不饱和铁结合力(UIBC)与总铁结合力(TIBC ) 转铁蛋白通常只被25-30%的铁饱和,可以和 外加铁结合的即为不饱和铁结合力(UIBC)。 血清铁和UIBC的和代表了总的铁结合力(TIBC )。 临床意义 血清TIBC增高: 转铁蛋白(TF)合成增加如IDA、红细胞增多症、 妊娠后期等。 转铁蛋白释放增加急性肝炎、亚急性肝坏死等。 血清TIBC减低: 转铁蛋白合成减少如肝硬化等慢性肝损伤。 转铁蛋白丢失增加如肾病综合症等。 铁缺乏如肝病、慢性炎症、消化性溃疡等。 标本采集 空腹血清或非EDTA抗凝血浆,标 本不可溶血。 参考值 TIBC:M:5077mol/L;F:54 77mol/L(诊断学,ED6) UIBC:2066mol/L;TIBC( TIBC=FE+UIBC):40.876.6mol/L( Roche说明书)。 血清转铁蛋白(Transferrin,TF)与转铁蛋白饱和度 TFS(%) 转铁蛋白是一种分子量为79570的糖蛋白。它含有一 条有两条连有寡糖链的N-葡萄糖苷的多肽链,并且存 在有很多的同种形式。其在肝脏中合成的速率依赖于 体内铁的需求和铁的贮存情况而变动。转铁蛋白是血 清中的铁的转运蛋白。如果铁缺乏,转铁蛋白的饱和 程度将是功能性铁耗尽的极端敏感的指示物。当铁存 储缺乏时,铁蛋白的水平将降低。在筛查遗传性血色 素沉着病时,转铁蛋白的饱和度比铁蛋白能够提供了 一个更好的纯合基因型的指示。 当铁存储不足时,应用红细胞生成素治疗因肾 衰造成的贫血是唯一有效的方案。在治疗的过 程中检查转铁蛋白饱和度提供了一个很好的监 视手段。结合转铁蛋白饱和度和铁蛋白将能够 排除由于慢性肝脏疾病造成的铁的过剩。血清 TFS(%)=FE/TF。 临床意义 血清TF: 增高:如慢性失血、IDA、红细胞增多症、妊娠后 期等。 血清TF减低:如铁粒幼细胞性贫血、再障;营养不 良、重度烧伤、肾衰;急性肝炎、慢性肝损伤等。 血清TFS(%): 增高见于铁利用障碍如铁粒幼细胞性贫血、再障, 血色病。 减低常见于IDA及慢性感染性贫血。 标本采集 空腹血清或非EDTA抗凝血浆,标 本不可溶血。 参考值 血清TF:2.54.3g/L)(诊断学, ED6),2.04.0 g/L(Roche说明书)。 血清TFS(%):3335%(诊断学,ED6) 。 铁蛋白(Ferritin, FER) 铁蛋白是铁储存蛋白,由24 个亚基组成的蛋白(脱铁 蛋白)和含有约多达4000多 个Fe3+离子(基本异构 体)组成。所有异构体常常是两个独立的亚基形成, 酸性的H型重亚基和弱碱性的L型的轻亚基。碱性的异 铁蛋白具有长期的铁存储功能,主要存在于肝、脾和 骨髓中可;酸性的异铁蛋白主要存在于心肌、胎盘、 肿瘤组织中。 铁蛋白检测对监视铁的治疗、确定高危 人群中铁的储备状况、贫血的鉴别诊断等具有重要意 义。铁蛋白测定尤其适合于监视在使用促红细胞生成 素治疗中出现铁的应用和分布失调而造成肾性贫血。 临床意义 血清铁蛋白增高: 体内存储铁增加如血色病、继发性铁负荷过大。 铁蛋白合成增加如炎症、肿瘤、白血病、甲亢等。 贫血如HA、AA、PA 等。 组织释放增加如肝坏死、慢性肝病等。 血清铁蛋白减低: 常见于IDA、营养不良、长期腹泻等 标本采集 空腹血清或非EDTA抗凝血浆,标 本不可溶血。 参考值 M:15200g/L;F:12150g/L (诊断学,ED6) M:30400g/L;F:15150g/L(Roche 说明书)。 可溶性转铁蛋白受体(STFR) 转铁蛋白受体是一种整合式的细胞膜糖蛋白,分子量 约为190k道尔顿。它包含两个一样的通过二硫键相连 的亚单位。每个单体有一个85kd的C-末端成分,该成 分连接由一个富含铁的转铁蛋白分子。蛋白水解导致 转铁蛋白受体的可溶形式。在血浆中,可溶性转铁蛋 白受体以与铁蛋白结合成320kd的复合物形式存在。 可溶性转铁蛋白受体在血清中的浓度直接与膜上的受 体的量相关。肌体细胞对于铁的吸收受到转铁蛋白受 体的表达的控制。如果细胞内的铁的存储耗竭-相对铁 蛋白的含量小于12ug/l , 会有更多的转铁蛋白受体表 达。 转铁蛋白受体与转铁蛋白的亲和力依赖于后者 的装载程度。因为80-95%的铁蛋白受体分子 定位于红细胞上,转铁蛋白受体的浓度(等同 于可溶性转铁蛋白受体)反映了细胞对于铁的 需求。当铁缺乏时,血清中的转铁蛋白受体的 浓度升高。因此,可溶性转铁蛋白受体的浓度 可以描述功能性铁的状态。而铁蛋白反应铁的 存储状态。 精确的评估铁的状态可以通过测定 sTfR的指数获得(=sTfR浓度/log 铁蛋白度) 。 相对于铁蛋白,sTfR的浓度不受到急相期反应 的影响。可以鉴别因为慢性疾病如急性肝功能 失常或者转移肿瘤造成的肿瘤和缺铁性贫血。 sTfR升高可以在巨细胞贫血、溶血性贫血中发 现。怀孕时sTfR的浓度也会升高,此时却没有 功能性的铁的缺乏。应用促红细胞生成素的治 疗可以通过测定sTfR的浓度监控治疗效果。 临床意义 血清STFR增高:铁缺乏、慢性贫血 、MA等 标本采集 空腹血清或非EDTA抗凝血浆,标 本不可溶血。 参考值 M:2.164.54mg/L;F:1.79 4.63mg/L(Roche说明书)。 二、叶酸和维生素B12的检验 1、血清和红细胞叶酸测定 2、血清维生素B12的测定 3、血清维生素B12的吸收试验 三、溶血的检验 1、血浆游离的血红蛋白的检验 2、血清结合珠蛋白的检验 3、尿含铁血黄素细胞试验 4、尿卟啉检验 四、红细胞膜缺陷的检验 1、红细胞渗透脆性试验 2、自身溶血及其纠正试验 3、酸溶血试验 4、蔗糖溶血试验 五、红细胞代谢酶的缺陷 1、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶荧光斑点试验和活性 测定; 2、丙酮酸荧光斑点试验和活性测定; 3、谷胱甘肽还原酶缺陷测定 六、血红蛋白异常的检验 1、血红蛋白电泳 2、抗碱血红蛋白测定 七、免疫性溶血贫血检验 1、抗人球蛋白试验 antihuman globulin test又称 Coombs试验 原理:本试验是检查不完全抗体的方法,是诊断自身 免疫性溶血性贫血的试验。在AIHA病人血液中常含有 抗自身RBC的不完全抗体,且多与表面含有相应抗原 的RBC结合,使之成为致敏RBC,这种不完全抗体是 I
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