本微生物感染的检查法第7章

1,第7章 细菌与病毒的微生物学检查法p83,病原生物学与免疫学教研室 潘凤兰 副教授 联系方式：81487384 (o),2,病例分析,某女50岁，咳嗽发烧（39）入院，诊断为细菌感性气管炎，青霉素常规治疗3天病情未有好转，后根据检验报告改用红霉素治疗， 2天病情明显好转，5天后病人康复出院。 检验科对病人做了什么检验？,3,一 实验室诊断方法: 1 显微镜 2 分离培养 3 免疫学技术 4 分子生物学方法,4,二 标本采集与送检原则 1 无菌操作 2 选择感染部位、病变明显部位 3 最佳时间、适宜标本 4 细菌：使用抗生素前 病毒：应加入抗生素 5 查抗体：急性期 恢复期 升高4倍 6 及时送检：病毒标本加入含抗生素的50%甘油缓冲盐水液中冷藏速送,5,第一节 细菌感染的微生物检查法 一 细菌学诊断 （一）形态学检查,Escherichia coli,Staphylococcus aureus,7,（三）生化试验,8,（四）血清鉴定 抗原 + 抗体,9,（五）动物实验 1、常用动物,豚鼠,10,2 接种途径 3 内毒素检测：鲎试验,11,（六）毒力检测 体内： LD50 ID50 体外：Elek平板,12,（七）药物敏感试验 纸碟法、试管法,13,二 检测病原菌成分 （一）抗原检测 1 原理：用已知的特异性抗体，检测未知的细菌抗原成分。 2 方法 ：凝集试验 沉淀试验 免疫标记技术,14,（二）核酸的检测 1 核酸杂交技术 （1）原理 （2）种类：Southern印迹杂交（ Southern blot） Northern印迹杂交（Northern blot） 斑点杂交 原位杂交 （3）优点：快速、敏感（0.05pg/l）、特异,15,2、聚合酶链反应 （ polymerase chain reaction ，PCR ） 体外DNA扩增技术（106），在DNA扩增仪上进行 适用于难以培养的细菌引起的疾病如结核、慢性淋病、梅毒等 优点：快速、敏感（pg/l）、特异,16,三 抗体的检测（血清学诊断） 1、取急性期、恢复期双份血清，升高4倍 2、常用方法 凝集试验、沉淀试验、免疫标记技术,17,第7章 第二节p88 病毒感染的微生物学检查法,18,病毒实验室检查内容,病毒的形态学检查 病毒分离培养的方法 病毒在培养细胞中增殖的鉴定指标 病毒的成分检测 病毒抗体的检测,19,病毒体的形态学检测 Morphology,1.光学显微镜： 细胞病变：包涵体，多核巨细胞 2. 电镜检查： 直接电镜法 免疫电镜法,20,轮状病毒负染的电镜照片,21,动物接种:利用已知或建立新动物模型 鸡胚接种:适用多种病毒接种 组织培养:器官培养,组织培养,细胞培养 细胞培养: *原代细胞系 （23代） *二倍体细胞系 （4050代） *传代细胞系（Henrietta Lacks cells - HeLa cells）,病毒分离培养的方法,22,绒毛尿囊膜接种 痘病毒 单纯疱疹病毒,卵黄囊接种 嗜神经病毒,羊膜腔接种 流感病毒初次分离,尿囊腔接种 流感病毒 腮腺炎病毒,气室,23,病毒在培养细胞中增殖的鉴定指标,细胞病变：CPE 2. 红细胞吸附（hemadsorption） 3. 红细胞凝集（hemagglutination） 4. 病毒干扰作用（viral interference） 5. 中和试验（neutralization test） 6. 空斑形成试验 （plaque formation）,24,细胞病变效应(cytopathic effect ,CPE) 多数病毒在细胞内增殖,可引起细胞形态学改变。 细胞圆缩、溶解、脱落甚至死亡 形成多核巨细胞 在细胞核或浆内形成包涵体,25,正常细胞,病变细胞,26,red blood cell,红细胞吸附,virus,+,susceptible cells,+,viral proteins expressed on the cell membrane,27,red blood cell,红细胞凝集,virus,+,susceptible cells,+,viruses released from the cells,28,病毒干扰作用 某些病毒感染细胞后，不产生CPE及其它变化，但却能阻止后一种病毒在该细胞内的增殖。 通过此现象可测出一些不引起CPE、血凝或血吸现象的病毒。,29,Y,Y,Y,+,virus,known antiserum,CPE ? ,virus blocked,susceptible cells,+,中和试验,30,空 斑 plaque 由病毒感染细胞后在培养瓶的 琼脂层上形成的一个坏死病灶 空斑形成单位 PFU (plaque formation unit) 一个病毒感染细胞形成的空斑,31,免疫荧光技术(IFA) 酶免疫技术(EIA),四、病毒成分检测 （一）病毒抗原检测,32,Enzyme Immuno Assay (EIA),Ag,Ab,33,1、核酸杂交 dot blot hybridization Southern blot hybridization Northern blot hybridization in situ hybridization 2、聚合酶链反应 PCR 核酸扩增,（二） 病毒核酸的检测,34,五、病毒抗体的检测（血清学诊断）,方法：红细胞凝集抑制试验 酶联免疫吸附试验,35,1、红细胞凝集抑制试验 检查血凝素抗体,2、ELISA,36,双份血清IgG抗体效价4倍升高，具有诊断价值,37,1、进行病毒病原学检查的组织标本递送要求是 A、暖箱保存 B、