《临床常用血清酶》PPT课件.ppt

第七节 临床常用血清酶、同工酶及其 亚型分析 临床上可根据酶浓度的变化用以辅助诊断。若酶浓度变化由细胞坏死或细胞膜通透性变化引起，表示脏器或组织损伤；若为细胞内酶合成增加所致，提示组织再生、修复、成骨或异位分泌，或提示有恶性肿瘤的可能；若为酶排泄障碍引起者说明有梗阻存在。同工酶的分析与鉴定则能反应疾病的部位、性质和程度。,由于酶广泛分布于全身各器官、组织，在血清中升高的机制又不尽相同，因此单凭某一酶的活性变化，很难做出独立诊断。若同时测定一组性质不同的酶，比较各酶活性的变化，就能根据酶增高或减少的“谱型”做出诊断，此种同时检测一组酶，称为酶谱。,如：(1)心肌酶谱：传统的心肌酶谱由CK、AST、LD和-HBD组成，这一组合在我国临床化学实验室一直应用至今。目前最简单而有效的心肌酶谱可由CK、CK-MB、CK-MB 型或CK-MM 型组成。近年来心肌酶谱在AMI的早期诊断中的应用价值受到了心肌肌钙蛋白的挑战。 (2)肌酶谱：主要用于对骨骼肌疾病的诊断和监护。可供选择的酶有CK、LD、AST及其各自同工酶。若能再加CK-MM亚型则更为理想。,(3)肝酶谱： 主要是用来判断有无肝实质细胞损伤、肝内外胆汁淤积等肝胆疾病。 (4)肿瘤酶谱： 具有器官特异性的有ACP及其同工酶、ALP及其同工酶、-GT及其同工酶、AFU、AMY及其同工酶、LPS等；非器官特异性的有ALT、CK同工酶、ALD同工酶、LD同工酶等。,(5)胰酶谱： 主要用于急性胰腺炎的诊断和鉴别诊断。可供选择的有AMY及其同工酶、LPS、弹力蛋白酶-1、磷脂酶A2、尿胰蛋白酶原-2等。,一、转氨酶及其同工酶 (一)生物化学特性 转氨酶是一组催化氨基在氨基酸与-酮酸间转移的酶类，丙氨酸氨基转移酶(ALT)和(天)门冬氨酸氨基转移酶(AST)是其中最重要的两种。,AST广泛存在于多种器官中，按含量多少顺序为心、肝、骨骼肌和肾等，肝中70存在于肝细胞线粒体中。 AST有两种同工酶ASTs和ASTm， ASTs存在于可溶性的细胞质中,ASTm存在于线粒体中。细胞轻度损伤时ASTs升高显著，而严重损伤时，则ASTm大量出现于血清中。正常血清所含AST的同工酶主要为ASTs，但在病理状态下，如细胞坏死，则血清中以ASTm为主。 血清AST活性升高，多来自心肌或肝脏损伤；肾脏或胰腺细胞损伤时，也可出现很高的AST活性。,ALT大量存在于肝脏组织中，其次为肾、心、骨骼肌等。血清ALT活性升高，通常表示肝脏损伤。ALT有两种不同活性的同工酶(ALTs)、(ALTm)，分别存在于细胞质及线粒体，后者的活性为前者的16倍。肝细胞坏死血清中以ALTm为主。,(二)测定方法 转氨酶的测定多用比色法，以赖氏法最常用。目前，国内外实验室多采用连续监测法进行测定。 ALT速率法测定中酶偶联反应式为： ALT L-丙氨酸+-酮戊二酸 L-谷氨酸 + L-丙酮酸 LD 丙酮酸 + NADH + H+ L-乳酸 + NAD+,AST速率法测定中酶偶联反应式为： AST L-门冬氨酸+-酮戊二酸 草酰乙酸+L-谷氨酸 MD 草酰乙酸+NADH+H+ L-苹果酸+NAD+ 上述偶联反应中，NADH的氧化速率与标本中酶活性呈正比，可在340nm检测吸光度下降速率。根据线性反应期吸光度下降速率(-Amin)，计算出ALT、AST的活性浓度。,(三)临床意义 ALT是反映肝损伤的一个很灵敏的指标，临床上主要用于肝脏疾病的诊断。 各种急性病毒性肝炎、药物或酒精中毒引起的急性肝损害时，血清ALT水平可在临床症状(如黄疸)出现之前就急剧升高且ALTAST。,急性肝炎时血清ALT高低与临床病情轻重相平行，且往往是肝炎恢复期最后降至正常的酶，是判断急性肝炎是否恢复的一个很好指标。假如能同时测定AST，并计算ASTALT之比，则对于急、慢性肝炎的诊断、鉴别诊断以及判断转归也特别有价值。急性肝炎时比值1，肝硬化时比值2，肝癌时比值30 重症肝炎时由于大量肝细胞坏死，血中ALT逐渐下降，而胆红素却进行性升高，出现所谓“酶胆分离”现象，常是肝坏死的前兆。,AST主要存在于心肌，以往多用于AMI的诊断。AMI发病68h即升高，4860h达到高峰，45d恢复正常。但由于AST在AMI时升高迟于CK，恢复早于LD，故诊断AMI价值不大。在急性肝炎时，AST虽亦显著升高，但升高程度不及ALT，而在慢性肝炎，特别是肝硬化时，AST升高程度超过ALT。胆道疾患时AST亦可升高。 临床上血清ALT、AST表现为轻度增加的有胰腺炎、乙醇性脂肪肝、肝硬化、肉芽肿、肿瘤；中度增加的有传染性淋巴增多症、慢性活动性肝炎、肝外胆道梗塞、心肌梗死；重度增加的有病毒性肝炎、中毒性肝炎等。肝硬化、慢性活动性肝炎和心肌梗死常有ASTALT。,二、-谷氨酰转移酶及其同工酶 (一) 生物化学特征 谷氨酰转移酶(-GT或GGT)又称-谷氨酰转肽酶，是一种线粒体酶。组织分布以肾脏含量最多，其次为胰、肺、肝等。 血清中的-GT则主要来自肝胆，红细胞中几乎无-GT，因此溶血对其测定影响不大。-GT催化-谷氨酰基从谷胱甘肽(GSH)或其他含-谷氨酰基物质中转移到另一肽或氨基酸分子上。,(二)测定方法 -GT的测定方法有数种，目前国内外多采用连续监测法测定血清-GT活性。 IFCC参考方法采用L-谷氨酰-3-羧基对硝基苯胺作为底物，以甘氨酰甘氨酸(双甘肽)作为-谷氨酰基的受体。在pH7.7的条件下，-GT催化底物生成-谷氨酰双甘肽和黄色的2硝基-5-氨基苯甲酸，在410nm波长处直接连续监测，吸光度的增高速率与-GT活性成正比关系。,(三)临床意义 -GT是肝胆疾病检出阳性率最高的酶。胆道疾病如胆石症、胆道炎症、肝外梗阻时，-GT不仅阳性率高，而且升高明显。肝实质疾病如肝炎、脂肪肝、肝硬化时-GT一般只是中度升高(ULN的25倍)，这点有助于肝胆疾病的鉴别诊断。 若ALP升高而-GT正常可完全排除ALP的肝来源，若ALP和-GT均增加，则应先排除肝外引起-GT增加的原因，一旦排除，则-GT增高即为肝病所致。,-GT还可用于判断恶性肿瘤有无肝转移，肿瘤患者如有-GT的升高，常说明有肝转移。 -GT与乙醇的摄取量有关，饮酒时，由于乙醇对肝细胞线粒体的诱导导致-GT活性升高，故对乙醇性中毒的判定有相当的价值。长期接受巴比妥类药物、含雌激素的避孕药者常有-GT升高。,用醋纤膜电泳可将-GT同工酶分为-GTl、-GT2、-GT3和-GT4 四种，正常人只见-GT2和-GT3。重症肝胆疾病和肝癌时常有-GTl出现，乙醇性肝坏死和胆总管结石时常有-GT2增加，胆总管结石及胰腺炎时-GT2也增加。-GT4与胆红素增高密切相关。,三、肌酸激酶及其同工酶和亚型 (一)生物化学特性 肌酸激酶(CK) 催化肌酸和ATP或磷酸肌酸和ADP之间的磷酸转移的可逆性反应，所产生的磷酸肌酸含高能磷酸键，是肌肉收缩时能量的直接来源。CK广泛分布于全身，在骨骼肌含量最高，其次是心肌和脑。 CK是由M和B两类亚基组成的二聚体。在细胞质内存在3种同工酶，即CK-BB(CK1)，CK-MB(CK2)和CK-MM(CK3)。在细胞线粒体内还存在另一CK同工酶，即所谓线粒体CK(CK-Mt)，也称CK4。各种CK同工酶还可进一步根据所带电荷和等电点不同分离数目不等的亚型。,(二)测定方法 CK的测定方法以酶偶联法最常用，是CK的参考方法.有两种工具酶及指示酶参与反应。原理如下： CK 磷酸肌酸 + ADP 肌酸 + ATP HK ATP + 葡萄糖 6-磷酸葡萄糖 + ADP G6PD 6-磷酸葡萄糖 + NADP+ 6-磷酸葡萄糖酸盐 + NADPH +H+ 可在340nm波长下测定NADPH生成速率而计算CK活性浓度。,临床常规测定CK同工酶多用电泳和免疫抑制法，但两法均会受溶血和巨CK的干扰，免疫抑制法还会受到CK-BB的干扰。因此现在推荐用免疫化学方法直接测定CKMBmass，可不受溶血和巨CK的干扰。CK同工酶亚型(CK-MM 型和CK-MB 型)多用琼脂糖凝胶高压电泳和等电聚焦电泳等。,(三)临床意义 CK及其同工酶和亚型是目前临床上测定次数最多的酶之一，主要用于心肌、骨骼肌和脑疾患的诊断和鉴别诊断及预后判断。 AMI时总CK活性升高显著，约在梗死后38h即升高，1024h达峰值，34d恢复正常。 CK极度升高(3000UL)主要见于全身疾病，特别是肌肉疾病，此时CK测定有助于肌萎缩病因的鉴别，如进行性肌萎缩时可见CK显著升高。,此外，病毒、细菌、寄生虫感染引起的肌肉感染性疾病(如心肌炎、皮肌炎等)，都能引起CK升高。但神经疾病引起的肌萎缩，CK活性一般正常。 CK-MM亚型测定对早期AMI的检出更为敏感，一般以 CK-MM3CK-MM11.0作为诊断AMI的标准，但必须排除急性骨骼肌损伤。AMI发病24h CK-MM3CK-MM1 即开始升高，812h达峰值。CK-MB2亚型在AMI早期诊断和判断有无再灌注上有很高的灵敏度和特异性。一般CK-MB21.9UL或CK-MB2CK-MBl1.5可作为AMI的诊断标准之一。,四、乳酸脱氢酶及其同工酶 （一）生物化学特征 乳酸脱氢酶(LD或LDH)催化乳酸氧化成丙酮酸，同时将氢转移给辅酶而成为NADH，依条件不同而有可逆性。反应式如下： L-乳酸 + NAD+ 丙酮酸 + NADH + H+ LD是一种含锌的糖酵解酶，广泛存在于人体各组织中，以肝、心肌、肾、肌肉、红细胞含量较多。,LD是由两种不同亚基(M和H)组成的四聚体，形成5种结构不同的同工酶，即LD1(H4)，LD2(H3M)，LD3(H2M2)，LD4(HM3)和LD5(M4)。 这5种同工酶大致可分为三类： 一类以LD1为主，主要在心肌，可占总LD活性50以上，也存在于红细胞内； 另一类以LD5为主，以横纹肌为代表，肝脏中也有； 第三类以LD3为主，存在于脾、肺。,(二)测定方法 目前根据LD催化反应方向的不同，有两大类测LD方法，一大类为以丙酮酸为底物的逆向反应(称LD-P法)；另一大类以乳酸为底物的顺向反应(称LD-L法)。我国多采用目前IFCC参考方法LD-L法，用连续监测法进行测定。 LD同工酶测定以琼脂糖凝胶电泳法更多用。一般成年人血中LD同工酶存在如下规律：LD2LDlLD3LD4LD5，部分正常儿童血中可见LDlLD2。,(三)临床意义 临床上测定LD及其同工酶常用于诊断和鉴别诊断心、肝和骨骼肌的疾病。 AMI时，LD由于分子量较大，在常用心肌酶中升高最迟，通常在梗死818h升高，48144h达峰值，可显著升高(5ULN)，因其半寿期较长，增高持续时间可达510d，此时其他酶已恢复正常，在亚急性心肌梗死诊断上有一定价值。但其诊断AMI特异性差，运动后、肾病综合征等可呈现轻度升高(3ULN)。肝炎、休克、白血病、溶血性贫血及晚期恶性肿瘤等均可有中度或显著升高。,测定血清及胸腹水中LD含量常用来鉴别其为漏出液抑或渗出液，若胸水LD血清LD0.6、腹水LD血清LD0.4为渗出液，反之为漏出液。,临床上测定LD同工酶 有助于相应组织病变的诊 断。心肌梗死和心肌炎时 以LD1和LD2升高为主，且 绝大多数的AMI患者血中 LD同工酶都出现LDlLD21，即所谓“反转比率”现象，且持续的时间长。,骨骼肌和肝细胞损伤时常出现LD5LD4。 肺、胰、脾、淋巴结坏死和炎症及各种恶性疾病时LD2、LD3、LD4升高； 溶血性疾病时LD1和LD2升高，但仍为LD2LD1；恶性肿瘤如转移到肝脏往往伴有LD4、LD5升高。,五、碱性磷酸酶及其同工酶 (一)生物化学特征 碱性磷酸酶(ALP) 广泛存在于各器官组织中，其含量以肝脏为最多，其次为肾脏、胎盘、小肠、骨骼等。血清中ALP主要来自肝脏和骨骼。生长期儿童血清内ALP大多数来自成骨母细胞和生长中的骨软骨细胞，少量来自肝。尿中ALP并非来自血液，而是直接来自肾小管细胞。人体各组织ALP同工酶可分为3大类，即胎盘ALP、肠ALP和肝骨肾ALP同工酶。,(二)测定方法 ALP的测定方法有多种，目前国内应用较多的方法为连续监测法，以磷酸对硝基酚(4-NPP)为底物，2-氨基-2-甲基-1-丙醇(AMP)或二乙醇胺(DEA)激活型缓冲液为磷酸酰基的受体。4-NPP在碱性溶液中为五色，在ALP催化下，4-NPP分裂出磷酸基团，生成游离的对硝基苯酚。后者在碱性溶液中转变成醌式结构，呈现较深的黄色。在波长405nm处连续监测吸光度增高速率，计算ALP活性。,(三)临床意义 在骨生长、妊娠、成长、成熟和脂肪餐后分泌等生理情况下，ALP活性可增高。除外上述生理性增高，临床上测定ALP主要用于骨骼、肝胆系统疾病等的诊断和鉴别诊断，尤其是黄疸的鉴别诊断。对于原因不明的高ALP血清水平，可测定同工酶以协助明确其器官来源。,急性肝炎包括病毒性肝炎和中毒性肝炎，ALP增高达25ULN，而肝硬化、胆石症和肿瘤引起的胆汁淤积，ALP增高达ULN的520倍。90以上的肝外胆道阻塞患者血清ALP升高，升高的程度常和阻塞程度及病程成正比。如果血清中ALP持续低值，则阻塞性黄疸的可能性很小。若血清胆红素逐渐升高，而ALP不断下降表示病情恶化。,肝外阻塞性黄疸、转移性肝癌、肝脓肿和胆石症时胆汁ALP检出率很高，并伴有肝ALP 增加，而肝内胆汁淤积、急性肝炎、原发性肝癌等主要表现为肝ALP增多，大多数不出现胆汁ALP。 各种疾病所致骨损伤等，均引起ALP活性升高，尤其是骨ALP同工酶增高。,六、酸性磷酸酶及其同工酶 (一)生物化学特征 酸性磷酸酶(ACP) 存在于人体不同组织，如前列腺、红细胞等，主要存在于细胞的溶酶体中，以前列腺含量最多。 正常男性血清中ACP约主要来自前列腺，其余部分及女子血清中的ACP可能来自血小板、红细胞、白细胞及破骨细胞等。 ACP同工酶分前列腺ACP(PAP)和非前列腺ACP(如红细胞ACP、溶酶体ACP、破骨细胞或吞噬细胞ACP等)两大类，在前列腺中含有丰富的PAP，比其他组织约多100倍。测定标本应及时分离血清(浆)并尽早测定。,(二)测定方法 ACP的测定底物、原理和方法与ALP相似，只是反应pH为酸性。国外多推荐使用磷酸百里酚酞为底物的比色法，因为PAP对此底物亲和力高，测定结果基本能反映ACP含量高低。此外还可通过用L-酒石酸这类抑制剂鉴别和估量PAP活性。由于ACP不稳定，酶活性测定困难，目前已发展一些免疫学方法特异而灵敏地测定ACP(特别是PAP)。,(三)临床意义 ACP及其同工酶测定主要用于诊断前列腺癌。前列腺癌时血清ACP活性显著升高，前列腺癌患者血清PAP也明显增高，其中肿瘤分化较好者增高尤为显著。 急性尿潴留、变形性骨炎、癌肿骨转移及甲亢时ACP可轻度升高。是否为抗酒石酸盐的非PAP增高为毛细胞性白血病的重要鉴别要点。,七、淀粉酶及其同工酶 (一)生物化学特征 淀粉酶(AMY)：人和动物只含-AMY。人体中胰腺含AMY最多，由胰泡细胞合成后通过胰管分泌人小肠，唾液腺也分泌大量AMY入口腔开始消化多糖化合物。 AMY是一种需钙的金属酶，其最适pH在6.57.5之间，卤素和其他阴离子有激活作用。AMY分子量较小，易由肾脏排出，半寿期很短，约2h，所以病变时血清AMY增高持续时间很短。除肝素外，其他抗凝剂如枸橼酸、草酸盐及EDTA等都有抑制作用，故不宜用去钙血浆测定AMY。,(二)测定方法 国内外目前测定AMY应用较多的是以麦芽多糖为底物的方法，如2-氯-对硝基苯麦芽三糖苷(CNP-G3)和亚乙基封闭的对硝基苯麦芽庚糖苷(4NP-C7)法(亦称EPS法)，以后者最常用，也是IFCC的推荐方法。反应最后生成对硝基苯酚，其生成量在一定范围内与AMY活性成比，在405nm可以进行连续监测即可测出AMY的活性。,(三)临床意义 长时间以来，AMY水平一直作为评价胰腺外分泌功能的一种辅助诊断指标。人体胰腺和腮腺组织损伤时，血清和尿中的总AMY可显著增高，肾功能不全患者也有部分AMY增高。,在急性胰腺炎发病后23h AMY开始升高，多在1224h达峰值，25d下降至正常。如持续性升高达数周，常提示胰腺炎有反复，或有并发症发生。 而尿AMY约于发病后1224h开始升高，下降也比血清AMY慢，因此在急性胰腺炎后期测定尿AMY更有价值。 临床上检测AMY用于胰腺炎诊断时，应注意AMY增高幅度与病情不成比例，如原AMY已升高却发生与症状不相应的降低时，常为凶险的坏死性胰腺炎的预兆。AMY水平正常也不能完全排除急性胰腺炎。,八、脂 肪 酶 (一)生物化学特征 脂肪酶(Lipase，LPS或LlP) 是胰腺外分泌酶。LPS可被巯基化合物、胆汁酸、Ca2+及辅脂肪酶等激活剂激活，而被重金属、丝氨酸所抑制。血清中LPS主要来自胰腺，少量来自胃肠粘膜。,(二)测定方法 迄今测定LPS的方法可分为3类：测定产物(游离脂肪酸)的增加(如滴定法、比色法、分光光度法、荧光法和pH电极法等)；测定底物的减少量(如比浊法、扩散法等)；测定LPS的实际质量(双抗体夹心免疫分析法、乳胶凝集法)。目前在国内大多实验室主要以滴定法、比浊法和分光光度法为主。,比浊法以橄榄油悬液为底物，其与水混合常呈乳糜状，血清中的LPS分解橄榄油乳剂生成水溶性的甘油和脂肪酸，浊度随之下降，根据浊度降低的程度，可计算出LPS活性浓度。此类方法可在400nm波长下比浊，测出因橄榄油乳剂的变化吸光度的变化。或者以340nm波长连续监测浊度的变化。以连续监测法为常用。,分光光度法目前有两类比较常用： 一类为酶偶联显色比色法，多用1，2-甘油二酯为底物，在LPS和单酸甘油酯脂肪酶的催化下，水解生成甘油和脂肪酸，甘油通过甘油激酶作用生成3-磷酸甘油，再通过甘油磷酸氧化酶过氧化物酶体系和4-AAP色素原体系产生紫红色。于550nm波长连续监测吸光度的变化即可计算LPS活性浓度。此类方法特异性高，通过双试剂也基本可解决内源性甘油的干扰问题。,另一类采用人工合成底物1,2-二月桂基-rac-丙三氧基-3-戊二酸试灵酯设计的连续监测法。该底物在碱性环境中，在LPS和辅脂肪酶作用下，水解生成1,2-二月桂基甘油和戊二酸-6-甲基试卤灵。后者不稳定，可自发分解生成戊二酸和甲基试卤灵。甲基试卤灵在577nm波长附近有吸收峰，连续监测其吸光度变化可定量测定LPS活性浓度。此法具有简便、快速、灵敏、稳定和抗干扰能力强等特点。,(三)临床意义 正常人血清LPS含量极少，但在急性胰腺炎时，212h血清LPS显著升高，24h至峰值，可达10ULN，甚至5060ULN，至 48-72h可能恢复正常，但随后又可持续升高815d。由于血清LPS在急性胰腺炎时活性升高的时间早，上升的幅度的大，持续的时间长，故其诊断价值优于AMY。临床观察发现，凡血清AMY升高的病例，其LPS均升高；而LPS升高者AMY不一定升高，约有23AMY正常的胰腺炎病人，其LPS正常；非胰腺炎的急腹症有血清AMY升高而LPS不升高。酗酒、乙醇性胰腺炎、慢性胰腺炎、胰腺癌、肝胆疾患等血清LPS可有不同程度的升高。,九、胆碱酯酶 (一)生物化学特征 胆碱酯酶(ChE)是一类催化酰基胆碱水解的酶类。人体主要有两种，即乙酰胆碱酯酶(AChE)又称真性胆碱酯酶或胆碱酯酶、丁酰胆碱酯酶(BuChE)又称假性胆碱酯酶或称拟乙酰胆碱酯酶(PChE)或胆碱酯酶。临床常规检查的胆碱酯酶(SChE)即指后者，通常简称为ChE。,AChE主要分布于神经组织、肌肉、红细胞、肺等处，其生理功能是催化水解乙酰胆碱，能使神经细胞反复除极。ChEBuChE主要在肝脏合成，也分布于胰脏、心脏、小肠粘膜、大脑灰质、血浆及淋巴液等处。ChE的真正生理功能至今尚未阐明。许多抑制剂对两种ChE有抑制作用，如生物碱(吗啡、毒扁豆碱)、枸橼酸盐、氟化物、有机磷杀虫剂等,(二)测定方法 主要有两类方法用于临床常规ChE测定，一类以乙酰胆碱为底物，测定水解反应生成的酸。常用指示剂(如间-硝基酚或溴百里酚蓝)测pH法。特别是纸片法简便快速，适用于急诊有机磷中毒的快速筛查。但此类方法准确度较差。另一类以人工合成底物测定胆碱衍生物的生成。,丁酰硫代胆碱法是目前测定血清ChE最常用的方法。测定原理如下： 丁酰硫代胆碱+H2O,*又称Ellman试剂或简称DTNB 在405nm波长连续监测测定吸光度值的变化，即可计算血清ChE的活性浓度。 本法简便、快速，易于自动化。但只能测定血清ChE，而不能测定红细胞AChE。,(三) 临床意义 血浆或血清中AChE的含量甚微，临床上测定红细胞中的AChE用于有机磷中毒的诊断。 由于ChE在肝脏合成后立即释放到血浆中，故是评价肝细胞合成功能的灵敏指标，与清蛋白生成有密切关系，故测定血清ChE一般用作肝功能试验。肝、胆疾病时ALT、-GT均升高，往往难以鉴别，如增加血清ChE测定，可发现ChE降低者均为肝脏疾患，而正常者多为胆道疾患。 血清ChE减少主要见于肝病和有机磷中毒，增加主要见于肾病综合征。,小 结 酶是能催化生物体内化学反应的一类特殊蛋白质。体内大多数酶为结合酶，除含酶蛋白外，还含有辅因子(辅酶和辅基)。酶可分为氧化还原酶类、转移酶类、水解酶类、裂解酶、异构酶类和合成酶类等六大类。酶促反应具有高效、高度特异性和可调节性等特点，影响因素主要有酶浓度、底物浓度、pH、温度、电解质及辅酶、激活剂及抑制剂等。其中底物浓度对酶促反应的影响可用米-曼氏方程表示。,血浆酶可分成血浆特异酶和非血浆特异酶两大类，后者可再分为外分泌酶和细胞酶等。正常情况下血清中酶活性相对恒定。但一些病理情况常导致血清中酶活性的改变。性别、年龄、运动、妊娠、人种及环境因素等可引起人血清中某些酶的生理性变化。,酶活性浓度测定是临床酶学分析最为常用的方法。根据酶促反应中底物的减少量或产物的生成量，可计算出酶活性浓度的高低。按检测方法分类主要方法有量气法、分光光度法、荧光法和放射性核素法、电极法等，以分光光度法最常用。,按反应时间分类，可分为定时法和连续监测法两大类。其中连续监测法是目前临床实验室最常用的方法，可分为直接法和间接法两大