甲状腺乳头状癌TGFβ1、nm23H1、CD31表达及其与肿瘤转移的关系.doc

甲状腺乳头状癌TGF-1、nm23-H1、CD31表达及其与肿瘤转移的关系 作者：方海飞丁国芳徐银峰【摘要】 研究甲状腺乳头状癌组织中TGF-1、nm23-H1和CD31的表达水平及其与甲状腺癌转移的关系。方法 应用EnVisionTM免疫组织化学法检测55例甲状腺乳头状癌和10例癌周组织TGF-1、nm23-H1和CD31的表达；并计数CD31标记的肿瘤组织微血管密度（MVD）。结果 甲状腺乳头状癌组织中TGF-1阳性表达率76.37、nm23-H1阳性表达率65.46，均高于癌周组织，两者之间的差异有统计学意义（2分别=16.64、10.61，P均0.05）； MVD与TGF-1的表达之间存在正相关关系(r=0.70，P0.05)，MVD与nm23-H1的表达之间存在负相关关系(r=-0.62，P0.05)。结论 甲状腺乳头状癌中TGF-1、nm23-H1和CD31表达水平可作为判断病情进展和肿瘤转移的指标之一。 【关键词】 甲状腺乳头状癌； TGF-1； nm23-H1； MVD； 肿瘤转移 To study the expressions of TGF-1,nm23-H1,CD 31 in papillary thyroid cancer(PTC) tissues and its relation with the lymph node metastasis. Methods TGF-1,nm23-H1,CD31 were detected by EnVisionTM immunohistoche- mistry method in 55 tumour tissues and 10 normal tissues; the expression of CD31 was used for the mark of the vascular endothelial cell, the tumor microvascular density(MVD) .Results The positive expression rates of TGF-1 and nm23-H1 in papillary thyroid cancer were 76.37 and 65.46, The expression levels of TGF-1 and nm23-H1 in papillary thyroid cancer tissue were higher than that in normal throid tissue(2=16.64,10.61，P0.05). There was positive relationship between MVD and TGF-1(r =0.70, P0.05). There was negative relationship between MVD and nm23-H1(r =-0.62, P0.05) . Conclusions TGF-1, nm23-H1, and CD31 may be used to estimate the progression and lymph node metastasis. papillary thyroid cancer; TGF-1; nm23-H1; MVD; tumor metastasis 发甲状腺乳头状癌，其中有淋巴转移或远处转移者35例，无转移者20例。按UICC2002年TNM临床分期：期16例，期19例，期18例，期2例。对照组为10例正常甲状腺组织，取自甲状腺癌周围组织（简称癌周组织），经病理检查确认均无肿瘤。 1.2主要试剂和免疫组织化学方法一抗为兔抗人TGF-1多克隆抗体（SC-146，由美国Santa Cruz公司生产）、即用型兔抗人nm23-H1多克隆抗体和鼠抗人CD31蛋白单克隆抗体（JC70A，M082301，由德国Dako公司生产）；EnVisionTM试剂盒（由Dako公司生产）。 所有标本经10福尔马林固定,常规脱水透明、浸蜡、包埋，连续切片，切片厚4m，用于EnVisionTM免疫组织化学法。石蜡切片常规脱蜡至水，微波修复抗原，3H2O2溶液室温孵育20min，以消化内源性过氧化物酶，10正常羊血清封闭30min，分别加一抗nm23-H1，湿盒中孵育，4过夜，滴加二抗，EnVisionTM试剂室温孵育1h。各步骤间均以0.01mol/L PBS缓冲溶液冲洗5min连续3次。DAB- H2O2显色，显微镜下控制时间，苏木素复染，脱水透明，中性树胶封片，Olympus BX-41显微镜观察、照相。用PBS缓冲溶液代替一抗作为阴性对照，以甲状腺乳头状癌癌周组织作对照组。 1.3结果判断TGF-1和nm23-H1免疫组化染色的阳性判定，细胞浆和部分细胞核着棕色颗粒者为阳性，不着色者为阴性。结果以显微镜下每张切片取5个高倍视野（200，0.075mm2），计数阳性细胞所占比例，10为阴性（）；1025为弱阳性（+）；2650为中阳性（+ +）；50为强阳性（+ + +）。弱阳性和中阳性为低表达，强阳性为高表达2。 CD31结果判断及MVD计算：CD31的阳性表达产物主要分布于血管内皮细胞的胞质内，呈棕黄色或棕褐色染色。每张切片在脉管高密度区，随机选取5个高倍视野，分别计算每平方毫米阳性数，取平均值，作为该例肿瘤的MVD。 1.4统计学方法采用SPSS 13.0统计学软件。计量资料采用均数标准差（）表示。计量资料两组间比较用t检验；计数资料两组间比较用2检验；MVD与TGF-1、nm23-H1之间采用Spearmant等级相关分析检验。设P0.05为差异有统计学意义。 2结果 甲状腺乳头状癌和癌周组织中TGF-1、nm23-H1表达和MVD与临床病理指标的比较见表1。 由表1可见： 2.1 TGF-1在甲状腺乳头状癌中的表达 TGF-1阳性表达产物主要分布于细胞质内，部分也分布在细胞核，呈棕黄色颗粒染色，见封二图1。甲状腺乳头状癌中TGF-1阳性表达率与癌周组织之间的差异有统计学意义(2=16.64，P0.05)。甲状腺乳头状癌TGF-1在+期与+期阳性高表达率之间的差异有统计学意义（2=12.01，P0.05）；甲状腺乳头状癌TGF-1阳性表达率在有无淋巴转移之间的差异也有明显差异（2=12.10，P0.05）；而在年龄和肿瘤大小的差异无统计学意义（P均>0.05）。 2.2nm23-H1在甲状腺乳头状癌中的表达nm23-H1阳性表达产物主要分布于细胞质内，部分也分布在细胞核，呈棕黄色颗粒染色，见封二图2。本次研究的甲状腺癌与癌周组织中nm23-H1阳性表达率之间的差异有统计学意义（2=10.61，P0.05）。甲状腺乳头状癌nm23-H1阳性表达在临床分期中有明显差异，有统计学意义（2=5.82，P0.05）；甲状腺乳头状癌nm23-H1阳性表达率在无有淋巴转移之间的差异有统计学意义（2=12.13，P0.05）；而在年龄和肿瘤大小方面的差异无统计学意义（P均>0.05）。 2.3CD31在甲状腺癌组织和癌周组织中的表达 CD31阳性表达主要位于甲状腺癌周围间质的血管内皮细胞，见封二图3。癌组织的MVD明显高于癌旁组织，两者之间的差异有统计学意义（t=8.19，P0.05）。MVD表达在有无转移和临床分期中的差异均有统计学意义（t分别=6.21、6.17，P均0.05），而在年龄和肿瘤大小方面的差异无统计学意义（P均>0.05）。 2.4甲状腺癌组织中MVD与TGF-1、nm23-H1表达的关系见表2。 由表2可见，TGF-1阳性表达的甲状腺乳头状癌组织中MVD值明显高于阴性者，差异有统计学意义（t=4.53，P0.05）。根据统计学分析，TGF-1表达与MVD之间存在着正相关(r=0.70, P0.05)。nm23-H1阴性表达的甲状腺乳头状癌组织中MVD值明显高于阳性者，两者比较差异有统计学意义（t=4.61，P0.0）。根据统计学分析，nm23-H1表达与MVD之间存在着负相关(r =-0.62, P0.0)。 3讨论 TGF-1为25kDa的二聚体多肽，主要在内皮细胞、血细胞、结缔组织细胞和上皮细胞中表达。目前认为，TGF-1 促进肿瘤发生机制并非直接促进肿瘤细胞增殖,而是肿瘤细胞对TGF-1 诱导的抑制信号失去敏感性,以及TGF-1 抑制免疫反应,促进肿瘤基质生成等多种生物学作用的结果，是调节细胞增殖和分化的多功能细胞因子3。TGF-1还可促使血管生成，它刺激周细胞、血管平滑肌细胞增生和分化，使血管样结构成为稳定的、成熟的血管床，导致肿瘤转移4。本次研究表明，TGF-1蛋白在甲状腺乳头状癌组织中的表达显著高于癌周组织。TGF-1表达有淋巴转移的高于无淋巴转移，TGF-1阳性高表达率随着临床分期增高也增强。推测TGF-1与甲状腺肿瘤的发展和转移有关，TGF-1具有促进肿瘤血管生成作用的可能。 nm23-H1作为肿瘤转移抑制基因，因其表达产物核苷二磷酸激酶，参与细胞的信号传递、微管组装，从而可特异性地抑制肿瘤转移5。随着肿瘤进展和淋巴道、血道转移的发生，肿瘤细胞抑癌蛋白的表达量减少，逐渐失去肿瘤细胞对生长、转移的抑制。本次研究结果显示，nm23-H1在甲状腺乳头状癌中的表达显著高于癌周组织，甲状腺乳头状癌中无淋巴转移者nm23-H1阳性表达率高于有淋巴转移者，临床分期中的+者nm23-H1阳性表达率高于+者。表明nm23-H1表达阴性者，肿瘤转移性强，预后差；nm23-H1表达阳性者肿瘤转移性弱，预后好。 血管的生成可以直接影响肿瘤细胞的淋巴结转移6。CD31在血管和淋巴管内皮细胞均有表达，是内皮细胞标记物，它参与血管生成，并与肿瘤转移有关7。因此，作为血管内皮细胞的标记物，直接反映了甲状腺乳头状癌微血管的生成情况。统计学结果显示，甲状腺乳头状癌组织中MVD与TGF-1表达之间存在正相关性，说明TGF-1表达越高，MVD在一定程度上也越增加，提示TGF-1可能在一定程度上促进甲状腺癌肿瘤微血管形成，在肿瘤转移中起重要的作用。而甲状腺乳头状癌组织中MVD与nm23-H1表达之间存在负相关性，说明nm23-H1表达越高，MVD在一定程度上也越少，提示nm23-H1在抑制肿瘤转移中起重要的作用。 综上所述，甲状腺乳头状癌TGF-1、nm23-H1和CD31的表达与甲状腺乳头状癌的转移及病理分期相关，TGF-1表达逐渐增强，nm23-H1表达逐渐减弱，CD31和MVD逐渐增高，是甲状腺乳头状癌病情进展和肿瘤转移的重要信号，提示甲状腺乳头状癌中TGF-1、nm23-H1和CD31表达水平可作为判断病情进展和肿瘤转移的指标之一。【参考文献】 gregory W. 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