高中生物222动物细胞融合与单克隆抗体.ppt

2.2.2 动物细胞融合与单克隆抗体,思考下列问题：,1、什么叫动物细胞融合？植物体杂交技术与动物细胞融合有什么不同呢？ 2、动植物细胞在结构上有何区别？这与它们杂交或融合过程有什么影响？ 3、动物细胞融合与植物原生质体融合的基本原理是否相同？两者的融合过程是否也一样？,一、动物细胞融合,细胞融合是正常的生命活动,两个细胞正在融合,受精作用,动物细胞融合,杂种细胞,愈伤组织,杂种植株,植物细胞A,植物细胞B,原生质体A,原生质体B,植物体细胞杂交,去壁,融合,组培,物理法,化学法,生物法： 灭活的病毒,细胞A,细胞B,杂种细胞,灭活的病毒,物理法 化学法,仙台病毒 疱疹病毒 新城鸡瘟病毒,用灭活的病毒诱导动物细胞融合过程,1.概念：,2.结果：,3.原理：,4.诱导方式,指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程（细胞杂交）。,形成单核的杂交细胞,细胞膜的流动性,物理法：离心、振动、电激,化学法：聚乙二醇（PEG),生物法：灭活的病毒,动物细胞融合,细胞融合与诱导细胞融合物质：,诱导因素：仙台病毒、聚乙二醇、电激 诱导细胞融合的仙台病毒必须灭活。 思考：为什么细胞融合过程中使用的病毒需要灭活？不灭活行吗？,因为灭活的病毒能使细胞膜上的蛋白质分子和脂 质分子重新排布，细胞膜打开，细胞发生融合，不灭 活的话会感染细胞，而不能诱导细胞融合。丧失感染性保留融合活性。,细胞融合技术应用于哪些方面？,细胞学、遗传学、免疫学及制备单克隆抗体。,植物细胞杂交与动物细胞融合的比较,二、单克隆抗体,什么是抗体？ 抗体是机体受抗原刺激后产生的、并能与该抗原发生特异性结合的具有免疫功能的球蛋白。 浆细胞产生抗体。,B淋巴细胞与抗体的关系：,B淋巴细胞受抗原刺激后，可以产生抗体（浆细胞产生抗体）。 动物体内的B淋巴细胞可以产生百万种以上的抗体，每种抗体对特定的抗原具有特异性免疫作用。 每一个淋巴细胞只能产生一种抗体。,所以传统的抗体的生产方法及缺陷是什么？怎样解决这个问题？,长期以来，为了获得抗体，采用的是把某种抗原反复注射到动物体内，然后从动物血清中分离出所需抗体的方法。用这种方法获得的抗体，不仅产量低，而且抗体的特异性差，纯度低，反应不够灵敏。,单克隆抗体,由单个B淋巴细胞经过无性繁殖（克隆），形成基因型相同的细胞群，这一细胞群所产生的化学性质单一、特异性强的抗体称为单克隆抗体。 特点： 特异性强、灵敏度高,技术原理,1）单个B淋巴细胞产生单一抗体（但不能无限增殖） 2）肿瘤细胞能无限增殖（但不能分泌单一抗体） 3）细胞融合技术杂交瘤细胞（既无限增殖又分泌单一抗体） 4）动物细胞培养技术大量培养杂交瘤细胞（获取大量单克隆抗体）,2.单克隆抗体制备过程,思考：,1、本过程利用了哪些原理？,免疫原理，细胞融合原理和动物细胞培养原理,2、为什么选用小鼠骨髓瘤细胞与B细胞融合？,这样融合成的杂交瘤细胞，继承了双亲细胞的遗传物质，不仅具有B细胞分泌抗体的能力，而且还有无限增殖的本领，因而可以获得大量单克隆抗体,3.整个制备过程为何要经过两次筛选?,第一次筛选得到杂交瘤细胞（多种）， 第二次需先在多孔培养板上，在每孔只有一个杂交瘤细胞的情况下开始培养，然后再筛选出能产生特异性抗体的细胞群。 由于该细胞群是单个杂交瘤细胞克隆得来的，所以产生的抗体必然是化学性质单一的，特异性强的单克隆抗体。这里的单克隆确有单个细胞克隆的含义，只不过克隆的不是B淋巴细胞，而是杂交瘤细胞。,注射抗原,效应B细胞,骨髓瘤细胞,融合,多种杂交细胞,选择性培养基 筛选1,抗原-抗体杂交法,克隆化,单克隆抗体,筛选2,1.注射抗原的目的是什么？,注射抗原,效应B细胞,骨髓瘤细胞,融合,多种杂交细胞,选择性培养基 筛选1,抗原-抗体杂交法,克隆化,单克隆抗体,筛选2,2.诱导细胞融合的手段有哪些？,注射抗原,效应B细胞,骨髓瘤细胞,融合,多种杂交细胞,选择性培养基 筛选1,抗原-抗体杂交法,克隆化,单克隆抗体,筛选2,3.若细胞两两融合后，有几种融合情况？,注射抗原,效应B细胞,骨髓瘤细胞,融合,多种杂交细胞,选择性培养基 筛选1,抗原-抗体杂交法,克隆化,单克隆抗体,筛选2,4.第一次筛选出的杂交瘤细胞为何需进行克隆化培养和专一抗体检测？,效应B细胞,B淋巴细胞,注射抗原,骨髓瘤细胞,融合,B-B细胞,杂交瘤细胞,瘤-瘤细胞,选择性培养基 筛选1,多种杂交瘤细胞,符合要求的杂交瘤细胞,抗原-抗体杂交法,筛选2,克隆化,体外培养,小鼠腹腔内增殖,单克隆抗体,杂交瘤细胞特点： 既可以产生特异性抗体，又可以大量增殖。,（1）小鼠骨髓瘤细胞与B淋巴细胞融合？ （2）制备过程中应用哪些细胞 工程技术手段？ （3）在整个制备的过程中要经过几次筛选？,思考：,细胞的同源性越近，融合形成的杂种细胞越易成活,细胞融合技术、细胞培养技术,第一次筛选得到杂交瘤细胞，第二次筛选在多孔培养板上，在每孔只有一个杂交瘤细胞的前提下培养筛选出特异抗体的细胞群。,3.单克隆抗体的应用：,作为诊断试剂：准确识别各种抗原物质的细微差异，并跟一定抗原发生特异性结合，具有准确、高效、简易、快速的优点。 用于治疗疾病和运载药物：主要用于治疗癌症治疗，可制成“生物导弹”，也有少量用于治疗其它疾病。,小结,两个过程,动物细胞培养过程,单克隆抗体制备过程,三个“一”,一个诱导细胞融合的新方法灭活病毒,一个新细胞杂交瘤细胞,一个优势单克隆抗体特异性 强、灵敏度高的优势,下图为某同学根据杂交瘤技术的方法，设计的生产破伤风杆菌的实验方案,制备单克隆抗体,B细胞,抗体,细胞融合,灭活病毒,双亲细胞,分泌抗体,无限增殖,原代,传代,50,1.动物细胞工程技术的基础是：（ ） A动物细胞融合 B胚胎移植 C动物细胞培养 D核移植,在动物细胞融合和植物体细胞杂交的比较中，正确的是（ ） A结果是相同的 B杂种细胞的形成过程基本相同 C操作过程中酶的作用相同 D诱导融合的