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文档简介

制作人：刘康 吕胜,微生物PPT课题制作,1,DNA的变性和复性,2,DNA的变性和复性,一）DNA的变性 二）DNA的复性 三）核酸分子杂交,3,变性(denaturation)和复性(renaturation) 是双链核酸分子的两个重要物理特性。 是核酸研究中经常引用的术语。 双链DNA、RNA双链区，DNA: RNA杂种双链(hybrid duplex)以及其它异源双链核酸分子(heteroduplex) 都具有此性质。,4,一) DNA的变性,指DNA分子由稳定的双螺旋结构松解为无规则线性结构的现象。 本质：氢键和疏水键断裂 部分的或全部的 可逆的或非可逆的 不涉及到其一级结构的改变,5,变性DNA 的理化及生物学性质,溶液粘度降低 溶液旋光性发生改变,增色效应或高色效应,DNA的增色反应,6,破坏双螺旋稳定性的因素 加热 极端的pH 甲醇 乙醇 尿素 甲酰胺,7,热变性使DNA分子双链解开所需温度 ( melting temperature) 很狭的温度范围内突发的跃变过程,熔解温度（Tm）,8,不同来源DNA间的Tm存在差别的原因,（A）DNA的均一性 DNA分子中碱基组成的均一性 待测样品DNA的组成是否均一,9,(B) DNA的(G+C)含量 (G+C)含量越高，即G-C碱基对越多，Tm值越高。 Tm与(G+C)含量(X)百分数的关系可用以下经验公式表示(DNA溶于0.2mol/L NaCl中)： X%(G+C)=2.44(Tm69.3),DNA的Tm值与G-C含量的关系,10,离子强度低，Tm值低，融点范围宽 离子强度增高，Tm值增高，融点范围变窄 DNA制剂不应保存在离子强度过低的溶液中，一般保存在1mol/ NaCl溶液中较稳定。,（C）溶剂的性质,11,二) DNA的复性,指变性DNA 在适当条件下，两条互补链全部或部分恢复到天然双螺旋结构的现象。 是变性的一种逆转过程 经缓慢冷却即可复性，又称为“退火”,12,热变性过程和两种冷却过程示意图,13,影响因素,a）温度和时间 比Tm低25左右的温度是复性的最佳条件 越远离此温度，复性速度就越慢,复性时温度下降必须缓慢 降温时间太短及温差大不利于复性,14,b）DNA浓度 复性速度与DNA浓度的平方成正比,15,c）DNA顺序的复杂性 顺序越简单，配对越快。,DNA片段愈大，扩散速度愈低
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