离体蛙心灌流及某些离子.ppt

离体蛙心灌流及某些离子、药物 对离体蛙心活动的影响,(perfusion of frogs heart),主要内容,相关理论知识 实验部分 实验目的 实验对象 实验仪器与药品 实验步骤 结果分析与讨论,相关理论知识,正常的蛙心能按静脉窦的节律性自动产生兴奋，心脏的自动节律性活动，需要有一个合适的理化环境。 蟾蜍心脏离体后，用任氏液灌流，在一定时间内仍能保持节律性兴奋和收缩活动。由于心脏的正常活动还有赖于内环境因素的相对稳定，改变灌流液的成分可引起心脏活动的改变。,相关理论知识,心肌细胞的生理特性表现为：自动节律性、兴奋 性、传导性和收缩性。 心肌细胞外离子浓度的变化和因体内生物活性物 质（如激素）引起的细胞膜离子通透性的改变，对 心肌细胞的生物电活动和生理特性必然会产生明显 的影响。,影响心肌细胞电生理特性的原因,1.心肌的自动节律性 （1）最大复极电位与阈电位的差距 （2）4期自动除极速度,2.心肌的兴奋性 （1）静息电位水平：依赖于细胞外K+浓度 （2）Na+通道的性状,相关理论知识,3.心肌的传导性 主要取决于动作电位0期除极速度和幅度,4.心肌的收缩性 依赖于细胞外钙离子浓度,相关理论知识,影响心肌细胞电生理特性的原因,相关理论知识,离子对心脏活动的影响,钾离子 K+参与心肌细胞的复极化和自律细胞的4期自动去极化过程，其改变不仅取决于细胞内外K+浓度梯度，还与细胞膜对K+通透性有关，因此其影响是多方面的,相关理论知识,离子对心脏活动的影响 钙离子 Ca2+对Na+内流存在竞争抑制作用，称膜屏障作 用，对静息电位无影响。 Ca2+o ，可使心肌细 胞的兴奋性降低，传导减慢，收缩力增强。,相关理论知识,迷走神经和乙酰胆碱 迷走神经兴奋时，节后纤维释放Ach,激动心肌 细胞膜上M型胆碱受体，产生负性变力、负性传导、 负性变时等效应。 心交感神经与去甲肾上腺素 心交感神经节后纤维释放的递质是去甲肾上 腺素，激动心肌细胞膜上的受体，产生正性变 力、正性传导、正性变时等效应。,实验目的 1.本实验的目的是学习离体蛙心的灌流方法。 2.用离体蛙心灌流的方法观察：,实验对象 蟾蜍,实验仪器设备 RM6240生物采集系统 张力换能器 蛙类手术器械 蛙心插管 试管夹 缝合线 蛙心夹 铁支架 滴管,实验药品 任氏液 lKCl 3CaC12 l：10,000 E l：10,000 ACh 3乳酸 2.5NaHCO3,实验步骤,一、离体蟾蜍心脏标本制备 1.破坏脑和脊髓 2.暴露心脏,一、离体蟾蜍心脏标本制备 1.观察心脏的解剖结构,实验步骤,（腹面）,（背面）,实验步骤 一、离体蟾蜍心脏标本制备,1.蛙心插管 1.1 在主A干下穿一线打一松结；在左主A下再穿一线结扎。,实验步骤 一、离体蟾蜍心脏标本制备,1.蛙心插管 1.2 在主动脉根部剪一 斜口，将插管插入动脉 圆锥， 在心室收缩时 将插管插入心室，结扎 固定。,1.用试管夹将蛙心管固定 在铁支架上 2.把张力换能器固定铁支 架支台上，在心室舒张期 将与换能器相连的蛙心夹 夹在心尖上。,实验步骤 二、连接仪器和装置,注意事项,1.蛙心插管内液面勿过高或过低，每次换液时，必须用任氏液冲洗3次。 2.每次加药，心搏曲线出现变化后立即将插管内液体吸出。 3.随时滴加任氏液于心脏表面使之保持湿润。 4.换能器头端应向下倾斜以免液体进人换能器。 5.各种试剂的滴管不要混淆,以免影响实验结果。,观察项目,一、描记正常心搏曲线,曲线幅度 收缩的程度 曲线疏密 心率 曲线基线 舒张的程度,二、观察离子、药物和酸碱的影响 1)更换任氏液为3%氯化钙溶液12滴，记录心率和收缩幅度，冲洗（下同） 2)滴加12滴1%氯化钾溶液 3)滴加12滴1：10000去甲肾上腺素溶液 4)滴加12滴1：10000肾上腺素溶液 5)滴加12滴1：10000 乙酰胆碱溶液 6)滴加12滴 2.5%碳酸氢钠溶液 7)滴加12滴3%乳酸溶液,观察项目,实验结果,结果分析与讨论,1.任氏液：正常对照 2. 3%CaCl2灌流：,结果分析与讨论,3. 1%KCl灌流：,结果分析与讨论,4. 1:10000 E灌流,4期 If 、I CaT通道,4期自动去极速度,自律性,心率,与心肌1受体结合,Ca2+内流 肌浆网释放Ca2+,兴奋-收缩耦联,收缩力,cAMP,结果分析与讨论,5. 1:10000 Ach灌流,与心肌M受体结合,K+外流, Ca2+内流,E-C耦联,收缩力,最大复极电位 4期K+外流,自律性,心率,Ca2+i,碳酸氢钠 乳酸,结果分析与讨论,6. 2.5NaHCO3 灌流 中和H+，Ca2+与肌钙