课件：ABO血型系统及定型-正反不符dy.ppt

ABO血型系统及定型,上海市血液中心 郭忠慧,正定型（细胞定型） 用已知抗体特异性的试剂血清检查红细胞的抗原 玻片法 试管法 微量板法,ABO常规定型,ABO常规定型,反定型（血清定型） 用已知血型的试剂红细胞检查血清中的抗体 试管法 微量板法,正反定型结果相符时，才可以记录血型结果。,ABO正反不符时,受检红细胞是洗涤后悬浮于NS.吗? 是用最敏感的试管法吗? 受检者年龄60吗? 病人的丙种球蛋白减低吗? 病人血清与O型普检红细胞的反应与试剂红细胞一样吗? 病人是白血病、肠道阻塞、胃癌、结肠或直肠癌吗？ 混合视野反应是输血后标本吗？,技术上错误的常见来源,血液标本或试管鉴定不当 红细胞悬浮液过浓或过淡及纤维蛋白、小血凝块的干扰 人为的书写错误 标本混乱 忽略观察溶血现象 未加入试剂 未按照试剂生产商的说明操作 离心机校准不良 试剂受到污染 温度在离心过程中增高,造成正反定型不符的4种变异情况,减弱的或减少的抗原反应 未知的抗原反应 减弱的或缺少的抗体反应 未知的抗体反应,减弱或减少的抗原反应,A或B抗原的亚血型 A、B及AB型RBC与试剂抗血清作实验时，预期反应：4 细胞分型法减弱的凝集反应：健康献血员可能A/B亚型 抗AB 血清能检出某些不与抗A/抗B试剂发生反应的A/B亚型,减弱或减少的抗原反应,疾病状态下,抗原强度减弱 如:A型白血病/肿瘤患者在疾病活动期改变为A2或A3亚型 ,疾病缓解期复原 疾病状态下,血型物质过量,中和抗A/抗B试剂,造成假阴性/弱凝集: 卵巢囊肿 胃癌 胰腺癌 肠道阻塞 对策:试管法 红细胞三洗,未知抗原反应,获得性A 奇异变形杆菌感染的O/B: 与抗A反应呈混合视野,未知抗原反应,获得性B RBC反应象AB型,血清中有抗B抗体 细胞分型法: A抗原B抗原,获得性B的成因,Gerbal等假设细菌的脱乙酰基酶deactetylases可以将A的免疫结构域糖N乙酰氨基半乳糖胺转化为半乳糖胺。 这个半乳糖胺与B的免疫多糖半乳糖非常的相似，可以与某些抗B发生反应。,抗体致敏的红细胞,抗体吸附于红细胞表面，可显示直抗阳性 自身免疫性溶血性贫血 抗高血压药物 输血反应 新生儿溶血病 放散技术移去抗体,减弱或缺少抗体反应,年龄70 丙球蛋白过低血症 丙球蛋白缺乏血症,未知的抗体反应,缗钱状凝集 冷自身抗体 未知的ABO同种抗体 未知的其它同种抗体,ABO抗体的区别,天然抗体和免疫抗体,天然抗体 未经可察觉的抗原刺激而产生的抗体 O型血清中多为IgG抗A和抗B A/B型血清中大多为IgM抗体 免疫抗体 妊娠/输血等,缗钱状凝集,球蛋白浓度增高:多发性骨髓瘤/原发性巨球蛋白血症 纤维蛋白原增高 血管扩张剂 霍奇金淋巴瘤 新生儿脐带血中的华尔道胶,冷自身抗体,抗I是反定型中最常见的自身抗体 有时也见抗i和抗Pr 抗I通常凝集所有供者RBC包括患者自身及反定型所用RBC 抗I引起的凝集比抗A抗B所引起的凝集弱 脐带血所带的I抗原量少通常不被凝集,抗HI,与冷凝集有关的最常见的特异性抗体是抗I 有些冷抗体与I和H抗原强的细胞如（O和A2细胞）反应最强，称之为抗HI联合抗体。,冷自身抗体之鉴别,抗I 抗i 抗H 抗HI 抗Pr 成OI + - + + + 成AI + - - - + 脐Oi - + + - + 酶OI + - + + + 抗HI： O成A2成B/A成脐O脐AB,未知的同种抗体,ABO同种抗体:A2/A2B中的抗A1 A1/A1B中的抗H 未知的同种抗体: 筛选细胞及反定型中的O细胞 一组谱细胞鉴定抗体特异性,ABO亚型,A抗原中主要为A1和A2 其它A亚型：A3、Ax、Aend、Am、Ay、和Ael B亚型一般比A亚型更少：B3、Bx、Bm和Bel等,判断ABO亚型:,1 红细胞与抗A抗A1抗B及抗AB的凝集程度 2 红细胞上H物质活性的强弱 3 血清中是否存在抗A1 4 分泌型人的唾液中A、B和H物质,A1和A2的鉴别,各种弱A亚型的鉴别程序,A2,与人源性抗A试剂的反应强度为4, 与抗H+/2+ 可能有不规则抗A1存在 (sometimes) 1-8% A2和22-35%的A2B存在抗 A1 血型物质 A H 举例 抗A 抗B Ac Bc Oc 4+ 4+ + - -,A2,A1和A2决定簇的区别是仅存在量的差异 还是抗原决定簇结构不同？ 用A2细胞重复吸收来源于B型个体的抗A血清可以移去所有抗体，表明二者之间仅是量的差别。 A2和A2B个体常常产生抗A1，说明A2细胞上缺乏A1细胞上的一种决定簇。,血型前体物质：,Type1 Gal13GlcNAc 1R（血清） Type2 Gal14GlcNAc 1R （红细胞） Type3 Gal13GalNAc1R（红细胞） Type4 Gal13GalNAc 1R （红细胞） Type5 Gal13Gal 1R（人工合成） Type6 Gal14Glc 1R,A1和A2同样存在质的区别,A1细胞出现重复的3型A抗原结构，但A2细胞却没有。 抗A1是3型或4型A特异性的，或者抗A1可以优先与3型或4型A反应。,只有A1转移酶能够转化3型H加一个N乙酰氨基半乳糖基成为3型A 因此A2细胞上可以检测到3型H而不是3型A抗原。,双花扁豆植物血凝素检测N乙酰氨基半乳糖胺，当过量的浓度下，它可以凝集A2细胞，因此将它用作A亚型分型试剂更多是依赖A1和A2表现型数量上的差异。,A3,最早由Friedenreich在1936年描述 与抗A和抗AB共同孵育时：“混合视野外观”（mixed field agglutination）。即：小的凝集块周围是大量未凝集的细胞。 与抗A反应强度低于A2 与抗AB反应呈混合视野,但并不增强 偶有抗A1 (occasionally) 血型物质 A H A3不像是A2和O细胞的嵌合体,Aend（Afinn，Abantu）,Aend最早由Weiner 等于1959年描述 类似于A3细胞：它们与一些抗A和抗AB表现很弱的混合视野外观 Aend分泌型的唾液中只有H物质，但是无A物质 抗A1出现在部分Aend个体的血清中 10细胞凝集（Mf）,Am,Am细胞不能被抗A和抗AB凝集，或者仅能发生很弱的凝集。Am细胞可以吸附放散抗A 。 Am分泌型的唾液中包含正常含量的A和H物质，Am血清中通常无抗A1。 Am作为ABO位点上一个稀有的等位基因遗传 Am在法国献血者的频率是150 000中有1例。（A型人中占0.0015%），中国台湾的数据是400 000万人中1例。,Am,抗原性较弱 抗A: - / w+ 抗H 4+(甚至会超过Oc) 无抗A1产生,与抗AB反应不增强 血型物质: A H,Ax,Ax表现型最初由Fischer和Hahn于1935年报道，它的主要血清学特点是： 红细胞与多数来源于B型血清的抗A不发生反应，但是可以被大多数来源于O型个体的抗AB凝集，没有混合视野表现。 血清中含有抗A1，后者有时候可以凝集A1和A2细胞。 除了H物质，Ax分泌型个体唾液中可以捡出痕量的A物质,Ax,抗A: -/ w+ 抗H:4+(与Oc的抗H差不多) 常有抗A1(Frequently) ,比A2 A3都高 与抗A+B的反应比抗A明显增强 血型物质 H,Ax,Ax表现型具有很高的遗传异质性： 许多家系资料表明Ax以ABO位点上一种稀有的等位基因的方式遗传 在一些家庭中遗传背景不清楚 在两项独立的研究中，法国Ax的频率为1/77000 (A型人中的0.003%)和1/44000,Aint,与抗A1反应较弱 2+ 与抗A及抗H反应较强 4+/3+ 仅有A1和Aint的细胞与抗A1发生反应,Aint,Landsteiner和Levine：有些A型个体的红细胞既不能定义为A1也不能定义为A2 Aint在黑人中较白人更为常见， Aint是作为ABO位点上的一个等位基因遗传的。 它的H抗原强度象A2一样强，甚至更强。,Ael,在通常的条件下，Ael细胞与抗A和抗AB不发生凝集，虽然它们可以结合这些抗体，结合的抗体可以通过吸收放散技术检测到 Ael分泌型唾液中无A物质，仅有H物质，血清中常含有抗A1，也可以含有能够凝集A2细胞的抗体,Ael,在Ael血清和红细胞膜上不能检出A转移酶。 在法国150000例献血者中，没有检测到Ael表现型，在中国台湾400000人中捡出5例Ael个体 Ael以ABO位点上的一种稀有的等位基因遗传的。,Aw,Olsson等 对其它弱A亚型的ABO基因的外显子、剪切部位和启动子进行序列测定 那些表现型不太容易被划分到任何现存的分类中。这些异常的基因被称作Aw（15）。,Subgroups of A,B亚型,弱的B变异型是很少的。 可能是由于在许多群体中B基因的频率要相对低得多。 弱B亚型较难以分类。 Salmon做出结论：B亚型最好的分类应参照A变异型：B3、Bx、Bm和Bel，另外加上那些不符合其它4种类型的Bw。,B3,1972年 Wiener和Cioffi首先报道一例ABH非分泌型B3。 它被作为最稀少的一种B亚型 这种表现型以与抗B和抗AB呈现混合视野反应为特点 血清中缺乏抗B 唾液中含有正常含量的B抗原 B3通常是由于ABO位点上的稀有等位基因所致。,Bx,一种异质性的血型 典型的Bx红细胞与抗B和抗AB呈弱凝集。 血清中含有弱的抗B Bx分泌型唾液中含有一些B物质，后者常常仅能通过Bx细胞与抗B的凝集抑制试验才能检测到 Bx是ABO位点上的一种稀有的等位基因。,Bm,Bm细胞不能被抗B或抗AB凝集 B抗原仅能通过敏感的技术比如吸收放散抗B才能检测到。 Bm分泌型唾液中B物质的含量接近正常B Bm个体的血清中不含有抗B。 通常Bm是作为ABO位点上一个变异的基因来遗传的，但是有几个例外报道。,Bel,Bel红细胞与抗B和AB不发生凝集反应，但是它们的确可以结合抗B，抗体可以通过放散技术被检测到。 Bel分泌型唾液中不出现B物质，血清中可能存在抗B抗体。 Bel作为ABO位点上的稀有基因而遗传，,Bw,Olsson等确认了7种新的等位基因，它们与正常B基因相比有1个核苷酸改变，导致一个氨基酸的取代（见表2.19Bw2到8），所有这些等位基因与B的弱表达相关，但是没有做进一步分类。,正反不符的解决,正定型中意外阳性或阴性 洗涤细胞 加入自身对照 增加血清/细胞比例 降低孵育温度,延长孵育时间 4 /22 /37 15min-30min 镜检 用不同来源的抗体试验 用人源性试剂作吸收放散(并作相应对照),吸收放散试验 检测红细胞上的弱A/B 抗原,NS.三洗受检1ml红细胞 加入等量人源性抗A或抗B 充分混匀41小时，离心去上清 4冷盐水充分洗涤细胞58次（留末次洗涤液） 56热放散 检测放散液及最后一次洗涤液 注意：要有阴阳性对照,正反不符的解决,反定型中意外阳性或阴性 A1细胞阳性,A2细胞和筛选细胞阴性,自身阴性: 可能是含有抗A1的A或AB型 部分筛选细胞阳性,自身阴性: 血清中可能含有意外抗体,用一组谱细胞,确定抗体特异性,正反不符的解决,室温盐水反应抗体:MN、P、Lewis 抗人球试验阳性抗体：Ss Rh Kell Duffy Kidd 排除冷抗体及缗钱状凝集 ： HI抗体 排除多凝集 ： 同型成人新鲜血清、脐带血清 植物血凝素（Tn、T抗原活化）酶处理的成人O细胞,后面内容直接删除就行 资料可以编辑修改使用 资料可以编辑修改使用,