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ET, NO 与绝经后骨质疏松症中医证型关系的临床初探.pdfET, NO 与绝经后骨质疏松症中医证型关系的临床初探.pdf -- 5 元

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论著ET、NO与绝经后骨质疏松症中医证型关系的临床初探李中万1庄洪2李钊2赵可伟2魏合伟21.广州市越秀区正骨医院广东广州5100452.广州中医药大学附属骨伤科医院摘要目的分析ET、NO在PMOP不同证型间变化的内在联系。方法在130例PMOP患者中,根据中医辨证分型的原则分为肾阳虚、肝肾阴虚、脾肾阳虚、气滞血瘀四种不同证型。应用酶联免疫法测定患者E2、ET,硝酸还原酶法测量NO的含量,应用方差分析方法分析PMOP患者ET1、NO、BMD、E2在不同证型间的关系。结果ET1、NO、BMD、E2在气滞血瘀组与肾阳虚衰组中均存在着显著的差异气滞血瘀组ET1与其余三组比较明显增高,且均具有显著差异。结论肾阳虚损,瘀血阻滞病机转变可能是PMOP病理演变的一个重要环节,肾阳虚衰型绝经后骨质疏松症多发生在绝经后骨质疏松症早期阶段,程度较轻,而气滞血瘀型绝经后骨质疏松症则多发生在晚期阶段,程度相对严重。ET可作为区别气滞血瘀型PMOP与其它三型的客观物质指标,因此在进行对绝经后骨质疏松症辨证分型过程中,可把ET1作为气滞血瘀证的微观的检测指标。关键词绝经后骨质疏松症内皮素一氧化氮中医证型临床研究中图分类号R681文献标识码A文章编号10050205200501000503ThePrimaryClinicalStudyonEndothelins、NitrogenMonoxidetoPostmenopausalOsteoporosisSyndromeTypesofTraditionalChineseMedicineLiZhongwan,ZhuangHong,LiZhao,etalYuexiuOrthopedicHospitalofGuangzhouCity510045ABSTRACTObjectiveToanalyzethevariableinherentrelationshipofET、NOinthedifferentsyndrometypesofPMOPpatients.MethodsInthe130casesofPMOP,accordingtotheprincipleofthedifferentiationofsyndromes,theyweredividedintofoursyndrometypes,namelydeficiencyofKidneyyang,Yindeficien2cyofboththeLiverandKidney,yangdeficiencyofboththeSpleenandKidneyandbloodstasisduetoStagnancyofQi.ThetiterofplasmalevelofETandserumlevelofE2wasdetectedbythecompetitivebind2ingenzymelinkedimmunoassayformat,andthetiterofserumNOlevelbycolorimeteric,thevariableinher2entrelationshipofET、NOinthedifferentsyndrometypesofPMOPpatientswereanalyzedwithanalysisofvariance.ResultsThedifferencesofET1、NO、BMD、E2betweendeficiencyofKidneyyanggroupandbloodstasisduetoStagnancyofQigroupwereallsignificantthecontentofplasmalevelofET1inbloodstasisduetoStagnancyofQigroupwashigherthantherestgroups,andthedifferenceswereallsignificant.ConclusionsKidneyyangisdeficientanddamaging,andbloodstasiswillaccumulate,whichtransforma2tionofpathologicalmechanismistheimportantlinkofpathologicalmechanismdevelopmentofPMOP,PMOPofdeficiencyofKidneyyangmostlyoccurstheearlystage,andthedegreeisratherlighthoweverPMOPofbloodstasisduetoStagnancyofQimostlyoccursinthelaterperiod,thedegreeisratherseriousrelatively.ThetiterofplasmalevelofETmayberegardedastheobjectiveexaminationalindexofdistinction收稿日期20040608作者简介李中万1975,男汉族,湖南省宁远县人,医学硕士。5中国中医骨伤科杂志2005年2月第13卷第1期betweenbloodstasisduetoStagnancyofQitypesandtherestsyndrometypesofPMOP.Forthisreason,ET1canbeconsideredasthemicrocosmicmaterialindexofbloodstasisduetoStagnancyofQiinthecourseofPMOPstypingaccordingtosyndromedifferentiation.KEYWORDSPostmenopausalOsteoporosisEndothelinsNitrogenmonoxideTypingaccordingtosyndromedifferentiationClinicalstudy绝经后骨质疏松症postmenopausalosteo2porosis,PMOP发病的主要机理是绝经后雌激素的急剧下降。近些年来,一氧化氮nitricoxide,NO在组织细胞、机体衰老及骨质疏松发展过程中作为信息分子的生理作用逐渐被研究者们所重视。内皮素endothelins,ET对于绝经后妇女心血管保护作用已经为人们所公认,而HRT对ET的影响可能是其心血管保护作用的重要机制。国内外许多实验均表明,ET、NO均与雌激素关系密切,且在不同疾病各证型间有着不同的意义。临床资料1一般资料PMOP患者来自广州中医药大学附属骨伤科医院2001年9月至2003年1月住院绝经后女性患者,选择130例符合标准病例纳入研究。年龄分布在49~70岁之间。2诊断标准PMOP诊断标准参照中国人骨质疏松症建议诊断标准第二稿1。参考的骨峰值标准是广州地区成人腰椎骨密度值,女性骨峰值为1.138±0.099gcm2,位于30~39岁年龄段2。中医证候辨证标准采用中医虚证辨证参考标准3、血瘀证诊断标准4及中西医结合诊治骨质疏松症5中对骨质疏松症进行的中医辨证分型等作为临床PMOP辨证分型标准,分肾阳虚证、肝肾阴虚证、脾肾阳虚证及气滞血瘀证等四种证型。3诊断方法骨密度的测定采用广州中医药大学附属骨伤科医院的双能X线骨密度仪QDR4000型、美国Hologic公司生产、变异系数CV0.1测量,测量部位为第2、3、4腰椎侧位。ET1、E2检测采用酶联免疫法测定,NO采用还原酶法测定。ET1的检测试剂盒由美国RDSystems,Inc.提供,批号为209935,采用日立7020全自动生化仪测定NO的检测试剂盒由晶美生物工程北京有限公司提供,批号为07091,采用厦门分析仪器厂721型分光光度计测量,仪器精密度≤0.5,变异系数CV为1.5E2的检测试剂盒由美国DiagnosisSystemsLaborato2ries,Inc.提供,批号为09032,采用美国宝特800酶标仪测量。4纳入标准凡符合骨质疏松诊断标准的绝经后妇女。绝经一年以上,70岁以下。5排除标准不符合骨质疏松诊断标准和继发性骨质疏松①患糖尿病、甲亢、甲旁亢等内分泌性疾病②肝肾功能异常③患慢性胃炎、肠炎④患类风湿性关节炎⑤患骨肿瘤或Paget′s病畸形性骨炎⑥半年内曾使用过激素或其他影响骨代谢的药物⑦摘除过卵巢⑧患有严重心脑血管等影响血液中内源性ET、NO含量的疾病⑨半年内使用过对血液中外源性ET、NO含量有影响的药物等。6检测方法所有受试对象均空腹12h以上,于次日清晨空腹抽静脉血5ml、2ml分装2支试管,5ml试管分别待测NO、E2,2ml试管待测ET1,采用3000min的离心机离心后置于220℃冰箱保存,由专人集中测定。骨密度的测定由骨密度室专人进行测定,骨密度的测定一般于住院后次日进行。中医辨证分型于患者入院后当日由高年资中级职称以上的中医临床医师会同专科医师共同进行中医证候诊断如确实有分歧,请示中医主任医师进行确认。7统计分析将测定数据输入电脑,用统计软件包SPSS11.0进行统计,数据采用方差分析,方差不齐者采用非参数统计。显著性检验取双侧界值点,P0.05时,差异有显著性。结果不同证型绝经后骨质疏松患者E2、NO、ET1及骨密度值水平的比较见表1。讨论ET、NO是近年来发现的血管活性肽和低分子具有细胞信使样作用的生物活性物质。血管内皮细胞均可合成,通过自分泌、旁分泌和循环内分泌的形式,发挥其广泛的生物学效应。ET是目前研究发现的作用最强、持续时间最长的缩血管多肽,至少有3种亚型组成内皮素家族即ET1、ET2、ET3,ET1起着最主要的作用。NO具有强烈的舒张血管作用的气体小分子并可协同6ChineseJTradMedTraumOrthop,February2005,Vol.13,No.1抑制血小板聚集和粘附,体内NO是以左旋精氨酸Larginine为原料,在NO合成酶NOS的催化下生成,NOS大致分为结构型NOScNOS和诱导型NOSiNOS两类。ET与NO作为血管内皮细胞分泌的一对相互拮抗、相互作用的细胞因子,调节血管的舒缩活动。表1不同证型绝经后骨质疏松患者E2、NO、ET1及骨密度值水平的比较xq±s组别例数E2pgmlET1pgmlNOpgmlBMDgcm2肾阳虚3319.89±9.9631.68±2.693317.92±9.12330.67±0.1033肝肾阴虚2715.12±9.451.63±1.413315.12±10.040.61±0.09脾肾阳虚3115.97±7.602.29±3.343319.20±10.05330.61±0.10气滞血瘀3913.22±10.025.69±4.9211.11±6.910.55±0.10注3与33系与气滞血瘀组相比较P0.05或0.01。1肾阳虚损,瘀血阻滞病机转变可能是PMOP病理演变的一个重要环节无论是ET、NO、E2还是BMD气滞血瘀组与肾阳虚衰组均存在着显著的差异,气滞血瘀组ET1含量明显高于肾阳虚衰组,而NO、E2及BMD则明显低于肾阳虚衰组。E2、BMD是反应骨质疏松严重程度的两个重要指标,同时NO与两者呈正相关,ET与两者呈负相关,因此可以推测肾阳虚衰型PMOP多发生在早期阶段,程度较轻,而气滞血瘀型则多发生在晚期阶段,程度相对严重。祖国医学认为,阳气具有温煦脏腑、组织的作用,脏腑、组织的功能皆靠肾阳的温煦、推动、气化、蒸腾,这种气化作用从胚胎形成时开始,一直到中年、老年,都在持续进行、不断转化,迨至肾阳耗竭,最后死亡。PMOP均到老年,老年人肾气亏虚,主要是肾阳亏虚。肾脏的盛衰与骨骼及其周围组织生长密切相关。肾阳亏虚,则筋骨失去正常温煦,筋枯髓减发为骨痿。肾阳虚衰推动激活功能减弱,能影响到脏腑、经络等组织器官的生理活动减弱,血液运行不利,脉道拘急,甚则寒凝血瘀,而造成瘀血阻滞,经脉不畅。骨骼及其周围组织因瘀血阻滞从而得不到营养物质的正常供养。因此,妇女绝经后肾阳逐渐开始虚衰,骨骼因缺乏肾阳的温煦而逐渐开始丢失骨量,如不加以有效治疗则可能发为骨质疏松症。肾阳虚衰日久,血液运行迟缓,同时根据祖国医学久病入络因虚致瘀的理论,日久则筋络受阻,瘀血闭阻,从而形成气滞血瘀型PMOP,同时也表现为骨量丢失更为严重。在PMOP的中医证候转变过程中,随着证候的变化,血中ET、NO、E2以及BMD也随之变化,提示证候的转变是有物质基础的。2ET可作为区别气滞血瘀型PMOP与其它三型的客观物质指标结果发现PMOP各中医证型间血浆ET1的比较,气滞血瘀组血浆ET1含量与其余三组比较明显增高,且均具有显著差异。ET1是所有收缩血管物质中唯一强有力的缩微血管物质,对微循环的调节起着重要的作用。在生理情况下,体内ET1含量甚微,在病理情况下其含量升高明显,可以使血管强烈收缩,造成血管瘀血阻滞,易于形成血栓。目前在对中医血瘀证实质的基础研究方面,不少学者认为中医关于血瘀证血行失度或血脉不畅的基本病理特点,与现代医学中的血液循环障碍和微循环障碍、血栓形成、体液调节功能和内分泌紊乱以及血液流变性异常等现象有密切关系。中医早有脉不通,血不流血不流,血先死之说,即血瘀首先与血脉的病理变化有关。近年来人们发现,血瘀证人或动物模型体内的血液循环障碍及血栓性病理状态,与血管内皮细胞的损伤及内皮细胞的内分泌功能改变可能有密切联系6,7。Meumie等8通过对骨质疏松症患者和老年人髂嵴小梁骨骨组织形态测量学比较,发现骨质疏松症患者小梁骨内有血管发生了改变,认为微循环的变化参与了小梁骨内部组织的改变,导致骨力学强度下降。而微循环改变是血瘀证的重要客观指标,因此气滞血瘀是绝经后骨质疏松症发生的重要原因。许多学者在对不同疾病的不同证型的研究中发现ET1与血瘀证关系密切,其含量也明显高于其它证型6,9,10。本试验研究的结果与他们的研究结果相吻合,因此在进行对PMOP中医辨证过程中,可把ET1作为气滞血瘀证的重要客观物质指标。同时也说明了中医认为血瘀证是PMOP病因病机的重要性,从分子水平说明了气滞血瘀型PMOP较其他型更严重。参考文献1中国老年学会骨质疏松委员会骨质疏下转第11页7中国中医骨伤科杂志2005年2月第13卷第1期MSC的报道,如脐血MSC4等。MSC是骨髓中基质系统的成体干细胞,具有多种中胚层和神经外胚层来源的组织细胞分化能力,可分化为成骨细胞、基质细胞。成纤维细胞、软骨细胞与神经细胞等。MSCs来源方便,易于分离培养、扩增和纯化,多代扩增后仍具有干细胞的特性,不具备免疫排斥的优点,因此它在骨以及其它组织工程中具有广泛的应用前景。MSCs具有多向分化潜能,体外培养时只有一部分能自动分化成骨,其成骨分化很大程度上依赖于诱导条件,其中基本的辅剂为地塞米松Dex、B磷酸甘油BGP和维生素CVitC9。三种药物通过不同的途径可诱导MSCs的ALP活性,促进成骨标记蛋白、IGF和胶原mRNA的表达,刺激细胞外胶原基质的生物合成、钙的沉积和矿化结节的形成10。尽管中医关于肾的概念不同于现代医学,但骨与髓的概念与现代医学却没有什么差异。由于前期研究结果表明,健骨二仙丸能促进成骨细胞的增殖、分化以及型胶原和IGFImRNA的表达2,3,基于肾主骨生髓中医理论基础,因此我们设想作为补肾药的健骨二仙丸能否诱导MSCs的成骨细胞定向转化。研究结果表明,健骨二仙丸尽管能提高MSCs细胞ALP的活性,但并不能增加骨钙素的分泌、上清钙含量与矿化结节形成。同时结果还表明,健骨二仙丸能显著改善Dex、VitC和BGP的成骨细胞定向诱导,增加诱导后成骨细胞的成骨活性。从实验结果来看,我们可以得出这样的结论,在本文报道的实验条件下,健骨二仙丸不能诱导MSCs的成骨细胞定向转化,但可以改善Dex、VitC和BGP的成骨细胞定向诱导,增加诱导后成骨细胞的成骨活性。因此将补肾中药用于骨组织工程种子细胞的体外大量扩增和促进其在工程骨构建过程中的骨的形成具有良好的前景。同时进一步改良现有实验条件,延长中药的作用时间,或者调整中药处方的组成成份或构成比例是进一步研究补肾药是否具有诱导成骨细胞定向转化作用的研究方向。参考文献1程志安,周敦华,宋少云,等.脐血间充质干细胞的生物学特性及其成骨细胞定向诱导.中国矫形外科杂志,2004,12201571~15742程志安,吴燕峰,曾志勇,等.健骨二仙丸含药血清对成骨细胞增殖及细胞周期的影响.中国中西医结合杂志,2002,222136~1393程志安,吴燕峰,曾志勇,等.健骨二仙丸对成骨细胞分化及IGFImRNA表达的影响.中国中医骨伤科杂志,2004,1224~94RosadaC,JustesenJ,MelsvikD,etal.Thehumanumbilicalcordbloodapotentialsourceforosteoblastprogenitorcells.CalcifTissueInt,2003,722135~1425周敦华,黄绍良,吴燕峰,等.人体间充质干细胞体外扩增及生物学特性研究.中华儿科杂志,2003,418607~6106ChuML,deWetW,BernardMetal.Finestructuralanaly2sisofthehumanproalpha1collagegene.Promoterstructure,AluIrepeats,andpolymorphictranscripts.JBiolChem,1985,26042315~23207CaplanAI.Mesenchymalstemcells.JOrthopRes,1991,95641~6508PittengerMF,MackayAM,BeckSC,etal.MultilineagepotentialofadultHumanmesenchymalstemcells.Science,1999,2845411143~1479GoodwinHS,BicknessAR,ChienSN,etal.Multilineagedifferentiationactivitybycellsisolatedfromumbilicalcordbloodexpressionofbone,fatandneuralmarkers.BiolBloodMarrowTransplant,2001,711581~58810OtsukaE,YamaguchiA,HiroseS,etal.CharacterizationofosteoblasticdifferentiationofstromalcelllineST2thatisinducedbyascorbicacid.AmJPhysiol,1999,2771Pt1C132~138上接第7页松诊断标准学科组.中国人骨质疏松症建议诊断标准第二稿.中国骨质疏松杂志,2000,611~32区品中,邓力平,沈怀亮,等.广州地区骨量峰值的调查研究.中国骨质疏松杂志,2002,8178~813全国虚症研讨会议.中医虚症辨证参考标准.中西医结合杂志,1987,7105984第二届全国活血化瘀研究学术会议.血瘀证诊断标准.中西医结合杂志,1987,731295刘庆思主编.中西医结合诊治骨质疏松症.北京中国中医药出版社,20016蔡钦朝,汪琼华,吴云智.血瘀证患者血管内皮内分泌功能的观察.安徽中医学院学报,1998,17261~637王奇,郑忠,梁伟雄,等.兔血瘀证模型的组织形态观察.中国中西医结合杂志基础理论研究特集,1993,3068MeumieHEetal.Predictiononfuturediagnosisandtreatmentofsteoporosis.CalcifTissueInt,1995,572839阳晓,朱文锋,黄志平,等.慢性肾衰患者循环一氧化氮、内皮素1含量变化与中医证型相关性研究.中国中医药科技,2000,74204~20510晏子友,皮持衡,徐友妹,等.内皮素含量在慢性肾衰中中医证候的变化.江西中医学院学报,1996,824~511中国中医骨伤科杂志2005年2月第13卷第1期
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