血涂片与血液分析仪.doc

血涂片与血液分析仪刘铸，苏紫云（黑龙江省牡丹江师范学院生物系157012）牛英（黑龙江省宁安市朝鲜族中学157000）摘要经典血涂片镜检与先进的血液分析仪在血液研究和疾病诊断中各自发挥着重要的作用。本文对血涂片的制作过程、血涂片在血液研究和检验中的地位、血液分析仪的发展历史和血液分析仪检测优势进行综述，科学评价了血液分析仪的作用，积极鼓励中学生物课和高校生物及医学相关专业开设好血涂片制作与观察技术这门实验课。综述内容期望为广大生物教师和血液研究人员提供科学的借鉴。关键词血涂片血液分析仪血液疾病诊断1595年，荷兰的磨镜师詹森（Jason）用两块凸透镜制成了第一架简陋的复式显微镜。1658年意大利人马尔皮基（Malpighi）在显微镜下首先观察了红细胞，200年后人们开始进行红细胞计数，随后开始制作血涂片观察各种血细胞形态并进行计数。在血涂片基础上，期望仪器代替人工进行检测，1953年，第一台血液分析仪（AHA）由Coulter发明问世。这一系列的科学进步使人们更好的认识了血液的组分，并意识到许多疾病的发生与血液中某些细胞数量、形状的变化有着密切关系，同时也为动物血液研究提供了良好途径1。近年来，随着科技进步及计算机的广泛使用，医院和生物实验室大量引进了一些自动化血液分析仪，使实验室对血液标本的处理更加简单、快速。有效的减轻了检验人员的工作量，提高了工作效率2。然而，拥有这样的先进仪器，并不是说目前中学生物课和高校生物及医学相关专业开设的血涂片制作与观察是落伍的技术，血涂片镜检永远是血液研究和疾病诊断的第一窗口，提供的信息在诸多方面是目前血液分析仪不能满足的。本文对血涂片和血液分析仪的研究状况进行综述，期望为广大生物教师和血液研究人员提供科学的借鉴。1血涂片1.1血涂片的制作过程血涂片的制作与观察技术出现较早，多年的教学、科研和医疗诊断已经使得血涂片的制作与观察在多方面得到了改进，过程主要可以分为三大步：取血：用医用消毒酒精及棉球消毒采血部位，人左手无名指指尖内侧是采血的最佳部位，不仅可以减少疼痛而且采血方便。采血时，用采血针迅速刺破皮肤，使血液自然流出，勿挤。医用棉拭去第一滴血后，选用第二滴血制片。制片：一般认为血滴距边缘1.5cm左右，血量为15-20l，此量推出的血涂片大小，厚薄较为适宜。将某一载玻片置于血滴前方，向后移动轻轻接触血滴。使之在两玻片之间展开，形成一条血线。推片时形成3035向另一端平稳的一次推出，涂片推好之后，使之迅速自然干燥。再将染液染色一分钟，一般采用瑞士染液（伊红亚甲基蓝）。观察：光学显微镜下的镜检可将血液组分进行如下分类：a)红细胞：数量最多，淡红色，无核，圆形细胞。b)颗粒性白细胞（简称粒细胞）：嗜中性颗粒白细胞，是白细胞中数量最多的，体积略大于红细胞，细胞核染成紫色叶状，一般2-5叶；嗜酸性颗粒白细胞，较中性细胞大，数量少，细胞核染成紫色叶状，通常为两叶，胞质中充满红色圆形颗粒；嗜碱性颗粒白细胞，数目很少，在涂片上较难找到，核不规则，分2-3叶，也被染成紫色，细胞质中含有许多大小不等，被染成紫色的嗜碱性颗粒。c)无颗粒白细胞：淋巴细胞，可分为大中小三类淋巴细胞。细胞质少，核大。其中小淋巴细胞与红细胞大小相似，细胞核呈卵圆形，染成深蓝紫色；单核细胞：为血液中最大的细胞。核呈卵圆形或马蹄型，染色淡，为灰蓝色，胞质不清明。d)血小板，不规则淡蓝色小体，内有蓝色颗粒，常聚集成群。作者简介：1979、男、讲师、在读博士、从事生物教学及动物学研究。1.2血涂片在血液研究和检验中的特点血涂片镜检不仅廉价，直观，而且技术要求不是很高，一般技术人员便可很好的掌握。血涂片不但能够提供血液分析仪提供的基本数据，而且随着对血涂片的深入研究，目前，已经可以提供较为全面详实的多方面血液资料，尤其当血液分析仪提供的某些数据异常时，血涂片是一种必要的检查手段。在以下几方面，血涂片镜检发挥着举足轻重的作用：血涂片镜检可以直接检查人体寄生虫3，如巴贝虫、非洲锥虫、黑热病原虫、丝虫病和弓形虫病。在不规则发热疟疾患者的诊断中，血涂片镜检可以直接查见疟原虫而确诊。血涂片镜检对血液感染性疾病的研究和检验有一定价值，通过研究发现，可以在血涂片中观察到金黄色葡萄球菌，白色念珠菌、军团菌等4-6，为霉菌感染和菌血症提供了宝贵的研究和诊断资料。血涂片镜检在贫血检测中发挥着巨大作用7，如大细胞性贫血，小细胞性贫血，溶血性贫血及镰刀型细胞贫血。尽管随着科学发展一些检测技术已经涉足贫血检测，然而，对于Howell-Jolly小体、点彩红细胞等方面的贫血检测血涂片发挥着不可替代的作用。血涂片镜检对白细胞异常性疾病的诊断具有价值。如对白血病、淋巴瘤或骨髓衰竭等疾病检测有一定的价值8。血涂片镜检对血小板异常有一定的检测意义，如小凝块、血小板聚集、血小板卫星、异常大血小板和血小板数量异常方面的检测结果尽管不能完全确诊但对疾病的研究和诊断有重要的参考价值。血涂片镜检在当血液细胞分析仪提供的某些数据异常时发挥着巨大作用9，2005年7月，国际血液学实验室（InternationalSocietyforLaboratoryHematology,ISIH）提出了由美、加、英、澳等6个国家19个实验室共同制定的血液分析仪检测后血涂片复检的统一标准10。血涂片镜检在动物广谱的血液研究是唯一选择。因为目前血细胞分析仪的设计主要为人类服务，哺乳动物红细胞无核，但是两栖类、爬行类和鸟类等红细胞都有核，从适用范围上其它技术目前无法替代。2血液分析仪2.1血液分析仪的发展历史1953年，美国人库尔特将发现微小粒子通过特殊小孔时可产生电阻变化这一现象的库尔特原理（Coulterprinciple）引用到血液细胞计数上，获得发明专利。1958年，以Coulter命名的专门从事颗粒性测量和计数的库尔特电子（coulterElectronics）公司成立。此后，欧洲和日本也开始了血液细胞计数仪的开发与研制。1962年，我国第一台血细胞计数仪在上海研制成功。70年代，血小板计数仪问世。1974年，有了具初步白细胞分类功能的白细胞分析仪（HEMALOGD）。90年代，开发出了可对网状红细胞（RET）进行技术的血细胞分析仪2。经过半个多世纪的发展，以前的只能进行简单计数红细胞（RBC）和白细胞（WBC）的细胞计数仪(BloodCellCounter)，发展为后来具有了血红蛋白（HBG）、血小板（PLT）、红细胞压积（HCT）等参数的先进仪器，目前，很多血液分析仪已经向体积分布宽度、异常血细胞形态分类等方面进军，甚至有的仪器可以提供40-50种测量或计算参数。由于这些仪器可以通过血细胞提供更多的参数进行联合测定和分析，因此，一些科学家将这类仪器的名字称为血液细胞分析仪（HematologyAnalyzer），但多数学者和应用者还将其统称为血液分析仪。2.2血液分析仪检测优势现在的血细胞分析仪采用了最新的电子、光学、化学和计算机技术，目前在诸多方面显现出自身前所未有的优势：功能扩大，增加网织红细胞的计数和分析到目前已经有幼稚细胞分析和有核红细胞分析功能11，甚至具有血液细胞中的某些寄生虫进行提示的功能。有些新的功能与参数目前只限定在实验室中研究，还未能得到广泛应用。方便快捷，新型的血液分析仪具有自动进样系统。在操作方便的基础上，血液分析仪不断增加检测速度，目前已经可以达到每小时检测150个样本。方便快捷的操作使得血液分析仪在对大量样本检测上显示出了明显优势。技术更新，技术更新最突出的是细胞检测技术的更新，从最初的电阻抗法到检测的激光散射、细胞化学(过氧化酶和嗜碱细胞染色)、特殊细胞染色技术、比色法和多角度偏振光散射等技术，可以说发生了翻天覆地的变化12。流水线化，流水线化是将血液常规分析中的所有步骤和项目进行系统性联合，将血液常规分析、网织红细胞分析、血片的制备(选择、涂片、编号、染色、干燥)等系列步骤通过仪器自动完成。流水线化是血液分析仪多年来努力的方向，目前终于在国外一些资金雄厚的实验室和检验室得以实现，为将来广泛应用奠定了基础。综上所述，经典血涂片镜检与先进的血液分析仪在血液研究和疾病诊断中各自发挥着重要的作用。血液分析仪在血液研究和血液常规分析等方面表现出多方面优势，而且有着良好的发展前景，因此，对于动物血液的基础指标测定和疾病的常规检测应该大量应用血液分析仪，可以作为血细胞分析的一种过筛手段。然而，仪器分析并不能完全取代人工分类13，特别目前血液分析仪与血涂片相比还有诸多问题有待进一步发展解决，各国很多专家认为经血液分析仪检查过的样本需要进行血涂片复检。因此，鼓励中学生物课和高校生物及医学相关专业开设好血涂片制作与观察技术这门实验课。无论是血液分析仪还是血涂片，只有通过实验、实践不断提高知识水平和实验技能才能让其发挥出其更科学的作用。主要参考文献1GulatiGL,HyunBH,AshtonJK.Hematologyinstrumentsforclinicallaboratories,LabMed,1984,15:395.2TatsumiN,TsudaL,FurotaA,HayashiM,MatsumotoH.Principleofbloodcellcounter-developmentofelectricimpedancemethod.SysmexJInt,1999,9:820.3BainBJ.Diagnosisfromthebloodsmear.NEnglJMed,2005.353(5):498507.4RuimyR,Armand-LefevreL,AndremontA.Shorttimetopositivityinbloodculturewithclusteredgram-positivecocciondirectsmearexaminationishighlypredictiveofStaphylococcusaureus.AmJInfectControl,2005,33(5):304306.5NadirE,KaufshteinM.Imagesinclinicalmedicine.Candidaalbicansinaperipheral-bloodsmea.NEnglJMed,2005,353(10):9.6BabeKS,ReinhardtJF.Diagnosisof1egionellasepsisbyexaminationofaperipheralbloodsmear.ClinInfectDis,1994,19(6):11641165.7MarksPW,ZukerbergLR.CaseRecordsoftheMassachusettsGeneralHospital.NEnglJMed,2004,351(13):13331341.8SimsKL.Peripheral-sinophiliaanddiagnosisofhypereosinophilicsyndrome.LabMed,2006,37:440442.9McPhersonRA,PincusMR.Henrysclinicaldiagnosisandmanagementbylaboratorymethods,21st.Philadelphia:SaundersElsevier,2007,468.10BarnesPW,McFaddenSL,MachinSJ,etal.TheinternationalconsensusgroupforhematologyreviewlsuggestedcriteriaforactionfollowingautomatedCBCandWBCdifferenti