CIK 细胞治疗鼻咽癌的临床研究.pdf

肿瘤学杂志2008年第14卷第1期隋军,教授,硕士研究生导师,云南省肿瘤医院、昆明医学院第三附属医院、昆明医学院临床肿瘤学院院长。2006年荣获云南省“三八红旗手”、中国医院协会“百名优秀院长”、云南省科技成果奖3项、昆明医学院伍达观教研二等奖1项；享受政府特殊津贴。主持国家自然科学基金、云南省自然科学基金等多项基金；出版临床肿瘤外科学、临床肿瘤学概论等多部科研专著；在国内外重要学术期刊发表多篇学术论文。现任中华医学会耳鼻喉科分会委员、中华医学会肿瘤医院管理分会委员、云南省耳鼻喉科分会主任委员、云南省危重病医学会副主任委员、西南地区头颈外科协会委员、云南省中西医结合会常务理事、云南省康复医学会常务理事、中华耳鼻咽喉头颈外科杂志编委、中国耳鼻咽喉头颈外科杂志编委、临床耳鼻咽喉头颈外科杂志编委、中国中西医杂志常务编委。CIK细胞治疗鼻咽癌的临床研究隋军,李晓江,张世文(云南省肿瘤医院,云南昆明650118)摘要:目的观察鼻咽癌患者回输自体CIK细胞后免疫功能变化,探讨CIK细胞对鼻咽癌的治疗作用。方法收集鼻咽癌患者84例,分别抽取放化疗前后、CIK治疗后外周血作免疫指标检测。结果放化疗后,CD3+、CD4+细胞百分率下降,CD8+细胞百分率上升；CD4+/CD8+比值下调,Th1/Th2倒置,与放化疗前比较差异有显著性(P0.05)。CIK治疗后上述指标较治疗前有改善(P0.05),NK细胞百分率变化有显著性差异(P0.05)。结论放化疗对鼻咽癌患者免疫功能有抑制作用。CIK治疗安全可靠,可以改善患者近期免疫功能。主题词:鼻咽肿瘤；杀伤细胞；免疫疗法中图分类号:R739.63文献标识码:A文章编号:1671-170X(2008)01-0035-03AClinicalTrialofCytokineInducedKillerCellsintheTreatmentforNasopharyngealCancerSUIJun,LIXiao-jiang,ZHANGShi-wen(TumorHospitalofYunnanProvince,Kunming650118,China)Abstracts:PurposeToinvestigatetheimmunitychangesinpatientswithnasopharyngealcancer(NPC)aftercytokineinducedkiller(CIK)cellsbeingtransfusedback,andtoexplorethetherapeuticeffectofCIKcellsonNPCpatients.MethodTheimmunityindexesintheperipheralbloodofpatientsweredetectedin84caseswithNPCbefore/afterra-diochemotherapyandafterCIKcellstherapy.ResultsAfterradiochemotherapy,theper-centageofCD3+、CD4+cellsdeclined,thepercentageofCD8+cellsrose；theratioofCD4+/CD8+declined,Th1/Th2reversed.Asalltheaboveindexscomparedwiththosebeforera-diochemotherapy,thedifferencewassignificant(P0.05).AfterCIKcelltherapy,theaboveindexesimproved(P0.05),whilethechangeofpercentageofNKcellswassignificantlydifferent(P0.05)afterradiochemotherapyandafterCIKtherapy.ConclusionsRadiochemotherapycaninhibittheimmunityinpatientswithNPC.CIKcellstherapyissafeandeffective.Itmayimprovetherecentimmunityofthepatients.Subjectwords:nasopharyngealneoplasms；killercell；immunotherapy收稿日期:2007-07-18专题报道35肿瘤学杂志2008年第14卷第1期JournalofOncology,2008,Vol.14,No.11986年Schimidt1首次报道用细胞因子诱导外周血单个核细胞可产生免疫活性杀伤细胞(cytokineinducedkillers),即CIK细胞。因其具有直接杀伤肿瘤细胞,体外增殖快,且不需要IL-2的持续刺激,毒副反应小等优点,成为过继免疫治疗新的研究热点。实验证明其有肯定的体外抗肿瘤作用,随后有临床报道存在一定的体内抗肿瘤作用。本研究试图通过观察回输自体CIK细胞后患者免疫功能变化来探讨其对鼻咽癌的治疗作用。1材料与方法1.1病例选择云南省肿瘤医院20042006年收治的鼻咽癌患者84例,男性70例,女性14例,年龄3875岁,中位年龄55岁。肿瘤临床分期(按1992年福州分期标准2)包括:期4例,期16例(T2N0M05例,T1N1M07例,T2N1M04例),期42例(T3N01M021例,T02N2M016例,T3N2M05例),期22例(T4N02M010例,T03N3M06例,T4N3M06例)。均为鳞状细胞癌。前期治疗方式包括:单纯放疗20例,化疗+放疗64例。上述患者在行CIK治疗前均已获完全缓解。同期选取20例健康者(无免疫性疾病及重要脏器功能障碍)作基本对照。1.2仪器与主要试剂Forma311型CO2培养箱；Forma1205型生物安全柜；COULTER公司XL型流式细胞仪；CS-3000PLUS血细胞分离仪；HumanTh1/Th2CytokineKit由BD公司提供；GIBCO提供无血培养基(AIMV)。1.3CIK细胞体外扩增患者常规治疗结束1个月后。血细胞分离机封闭式管道采集单个核细胞,无血清培养基AIMV调整细胞数为1106个/ml,第1天加入rhIFN-1000U/ml,培养24h后加入rhIL-2300U/ml,rhIL-1300U/ml及OKT350ng/ml继续培养,每隔4d更换培养基,调整细胞数为1106个/ml,补加rhIL-2300U/ml,每8小时在补加rhIL-2的同时补加OKT350ng/ml,2周开始收集CIK细胞,生理盐水洗涤3次,加入10%人血白蛋白,用生理盐水配成100ml细胞悬液后静脉回输,每天回输1次,分3d输完,每次回输细胞数在21066106以上,回输前经细菌、真菌和支原体检测均为阴性。1.4临床观察和检测观察细胞悬液回输时患者的不良反应,按照WHO统一标准评价毒性3。采用流式细胞仪检测患者放化疗前1周以及CIK治疗前后2周免疫指标(T细胞亚群、B细胞和NK细胞)。IL-2和IFN-细胞因子代表Th1细胞,IL-4和IL-10细胞因子代表Th2细胞。检测健康者相应免疫指标。1.5统计方法所有数据经SPSS10.0进行统计学分析。统计检验采用两样本均数t检验。2结果2.1临床观察CIK细胞回输后,患者的食欲、精神、体力均有改善者78例,睡眠改善者60例。4例患者回输时出现面部潮红伴轻微烦躁感,无发热、皮疹及其他不良反应。回输后测血常规、肝肾功能均无明显改变。2.2免疫指标观察与健康者比较,所选鼻咽癌患者CD3+、CD4+细胞百分率下降,CD8+细胞百分率上升；CD4+/CD8+比值下调,Th1/Th2倒置,有显著性差异(P0.05)。放化疗对上述指标有进一步的影响,CD3+、CD4+细胞百分率下降,CD8+细胞百分率上升；CD4+/CD8+比值下调,Th1/Th2倒置,有显著性差异(P0.05)。CIK治疗后,鼻咽癌患者CD3+、CD4+细胞百分率有上升,CD8+细胞百分率下调；CD4+/CD8+比值上调,Th1/Th2正置,与治疗前比较有显著性差异(P0.05)。放化疗后B细胞绝对值有进一步下降,但无显著性差异(P0.05),NK细胞百分率明显下降(P0.05),NK细胞百分率明显升高(P0.05),表明CIK细胞对体液免疫的影响不明显。本研究中84例患者回输CIK细胞后,除少数(4/84)有轻微烦躁感外,未发现其他明显不良反应,可以认为该治疗安全可靠。本研究仅仅探讨CIK治疗对患者近期免疫功能的影响,其远期疗效有待进一步研究。另外,CIK治疗能否抑制鼻咽癌患者放化疗后肿瘤转移复发是临床上需要随访观察的问题。参考文献:1SchmidtRE,MurrayC,DaleyJFetal.AsubsetofnaturalkillercellsinperipheralblooddisplaysamatureTcellphenotypeJ.JExpMed,1986,164(1):351-356.2胡雨田.咽科学(耳鼻咽喉科全书)M.上海:上海科技出版社,2000.406.3孙燕.内科肿瘤学M.北京:人民卫生出版社,2001.994-997.4ZanussiS,VaccherE,CaffauC,etal.Interferon-gammasecretionandPerforinexpressionareimpairedinCD8+TlymphocytesfrompatientswithundifferentiatedcarcinomaofnasopharyngealtypeJ.CancerImmunolImmunother,2003,52(1):28-32.5程钢,邵建水,陈志,等.鼻咽癌外周血免疫指标研究J.第一军医大学学报,2002,22(12):1104-1105,1108.6张玉晶,陈育标,夏云飞,等.初治鼻咽癌患者的细胞免疫功能和检测指标的评价J.中国肿瘤临床与康复,2004,11(6):481-484.7OktiaR,YamaguchiY,EmiA,etal.Enhancementoflymphokine-activatedkillercellinductionusinganti-CD25andanti-CTLA-4monoclonalantibodiesJ.OncolRep,2007,17(6):1429-1435.8LoughlinPM,CookeTG,GeorgeWD,etal.Quantifyingtumour-infiltratinglym