地黄苏合香合剂对轻微肝性脑病模型大鼠治疗的实验研究.pdf

专题地黄苏合香合剂对轻微肝性脑病模型大鼠治疗的实验研究刘赫，梁妍，刘雁勇，杨楠，纪超，左萍萍，龚韬，廖磊，侯晓明，蔡哲摘要目的观察中药地黄、苏合香（地苏合剂）对四氯化碳（）致轻微肝性脑病（）大鼠模型的治疗作用。方法采用灌胃给予致化学性肝损伤大鼠模型，通过开场实验和水迷宫实验，观察地苏合剂低、中、高个剂量组对模型鼠自发运动、空间记忆能力的影响，并检测肝脾及血液生化学指标；阳性药采用乳果糖。结果造模周后发现模型鼠的自发运动明显减少，水迷宫空间记忆能力明显下降；服用地苏合剂周后高剂量治疗组模型鼠的自发运动和空间学习记忆明显改善（，）；同时血中丙氨酸氨基转移酶（）和血氨（）浓度明显低于未治疗组（，）。结论地苏合剂对轻微肝性脑病模型大鼠有明显的治疗作用。关键词地黄；苏合香；轻微肝性脑病；行为学；丙氨酸氨基转氨酶；血氨，：（）（），（）（）：；中图分类号文献标识码文章编号（）本文著录格式刘赫，梁妍，刘雁勇，等地黄苏合香合剂对轻微肝性脑病模型大鼠治疗的实验研究中国康复理论与实践，（）：肝性脑病（，）是指发生于肝脏功能严重障碍引起的以代谢紊乱为基础的中枢神经系统功能失调综合征。发病初期以自主活动减少、定向力障碍为主；继而产生神经精神症状，如性格改变、行为异常等。它是慢性肝病及严重肝病患者常见的并发症和死亡原因，病死率高达，严重影响患者的生活质量。第届世界消化病协会将分为、型，其中将过去称为亚临床和隐性正式命名为轻微（，），是发病过程中的一个特殊阶段。因此，研究针对基金项目：国家自然科学基金（）；北京中医药科技项目（）；科技部重大新药创制科技专项项目（）。作者单位：中国医学科学院基础医学研究所；北京协和医学院基础学院药理室，北京市；北京市中药研究所中药化学室，北京市；卫生部中日友好医院临床医学研究所免疫学研究室，北京市。作者简介：刘赫（），女，辽宁沈阳市人，博士研究生，主要研究方向：神经药理学。通讯作者：左萍萍（），女，湖南长沙市人，教授，研究员，博士生导师，主要从事衰老与神经退行性病的基础药理研究。现任国家食品药品监督管理局评审专家；北京神经科学会理事；中国药理学会衰老与老年痴呆专家委员会委员；中国药理学会麻醉药理专家委员会委员；中国医促会中老年保健专业委员会主任委员。担任中国药理学通报、基础医学与临床、中华医学杂志编委；中国康复理论与实践杂志常务编委、中国药理学报理事；副编辑等。的有效中药制剂，对阻止病程发展改善患者预后，具有重要的临床与社会学意义。本研究在前期工作的基础上，选择地黄和苏合香两味药组成的“地苏合剂”，观察其对化学性肝损伤诱导的肝性脑病早期的治疗作用及相关机制。材料与方法实验动物级雄性大鼠只，由北京大学医学部提供，动物合格证号：（京）。饲养条件：分笼饲养，每笼只，自由饮食、饮水，自然昼夜节律光照，室温在，相对湿度在。药品与试剂本实验采用的“地苏合剂”含地黄提取物（水苏糖含量，梓醇含量）及苏合香：均由北京市中药研究所中药化学室提供；乳果糖（杜秘克）：规格：袋，含乳果糖，苏威制药有限公司，批号：；四氯化碳（，）：北京市化学试剂公司，批号：，实验前用灭菌的橄榄油配成浓度。天门冬氨酸氨基转移酶（）、丙氨酸氨基转移酶（）和血氨（）试剂盒购自南京建成科技有限公司。实验方法轻微肝性脑病大鼠模型的制备及给药只大鼠在适应环境周后随机分为正常对照组、模型中国康复理论与实践年月第卷第期，组、阳性药组。除正常对照外，其余组采用经典的诱发肝纤维化模型，即灌胃给予造模，每周次，连续周。阳性药给予乳果糖、地苏合剂低剂量（地黄提取物苏合香）组、中剂量（地黄提取物苏合香）组和高剂量（地黄提取物苏合香）组。各组每周次分别灌胃给予相应受试药物，对照组给予蒸馏水共周。行为学实验开场实验（）开场实验箱为无盖箱，内壁和底板均为黑色，底板均分为个方格，沿箱壁格为外周格，其余个格成为中央格。实验室内为暗光，开场顶部光源打开，保证开场中心部位始终有比较明亮的环境。测试时将大鼠放于敞箱中央，上方监控系统与计算机连接，自动记录内大鼠的活动情况，分析指标为自发运动总距离、跨格次数及中央区停留时间。实验结束后取出大鼠，将开场底部及四壁清理干净，喷洒酒精除去气味后继续测试下一只大鼠。本实验旨在评价大鼠自发运动。水迷宫（）该水迷宫主要由个直径的不锈钢圆柱形黑色水池和个可移动位置的直径的平台（实台）组成。预先在水池里注入清水，使水面高出实台，水温控制在（），水中加入黑色墨水，呈黑水白鼠对比。实台置于某一象限的中间，将大鼠于实台所在象限的对侧象限边弧度处头朝池壁入水，每次训练。水池上空监控系统与计算机相连接。当设定的训练时间已到或动物已爬上实台，计算机停止跟踪并记录下游泳轨迹和自动计算出动物在水池中所游过的路程及找到实台所需的时间（即寻台潜伏期）等指标。若动物在之内尚未找到实台，则将动物拿到实台上并停留，若动物在内找到实台，记录自动停止，也让其在实台上停留方结束训练。适应性训练次后开始正式实验测试。本实验用来测试大鼠的空间学习记忆能力。取样及生化指标测定实验第周结束时，断头处死动物，取血用赖氏法测、，无蛋白滤液法测血氨等指标，取血前禁食。处死后每组选只动物迅速取出肝脏、脾脏进行称重，脏器指数是与对照组相同脏器的湿重之比求得。统计学处理所得数据用（珚）表示，采用统计软件分析。组间比较采用单因素方差分析，为有显著性差异。结果大鼠行为学结果在造模周时发现模型组大鼠自主活动明显减少，开场实验中跨格总距离明显缩短（），经周给予阳性药及地苏合剂高剂量治疗的两组大鼠自发运动总距离明显延长（，），见图。同样，水迷宫寻台潜伏期在造模周前各组未见明显差异，但造模周时发现模型组的寻台潜伏期明显延长（）。而经阳性药和地苏合剂高剂量治疗的两组大鼠寻台潜伏期明显比模型组缩短（），见图。大鼠生化指标结果实验第周，模型组大鼠肝、脾指数与对照组相比明显降低（），而阳性药和地苏合剂中、高剂量组肝指数有明显改善（）；低剂量的脾脏指数明显改善（）。血清学指标显示，模型组大鼠与对照组相比明显升高（），阳性药和地苏合剂高剂量组有明显改善（）；模型组大鼠血氨与对照组相比显著升高（），中、高剂量和阳性药组有明显改善（），见表。中国康复理论与实践年月第卷第期，表大鼠肝脾指数、丙氨酰基转移酶（）及血氨（）测定结果组别剂量（）肝脏指数脾脏指数（）（）对照模型乳果糖地苏合剂低剂量中剂量高剂量注：与对照组比较，：，：；与模型组比较，：，：。讨论近年以来，我国发病学已有重大改变，在发病率持续增高的同时，已由重症肝性脑病为主转为为主。临床发现的发病率相当高，国外文献报道为，国内许氏报道为，陈氏报道为。不仅人群多，且病程长。因此，及早开展药物预防与干预具有重要的社会意义和迫切的临床意义。然而，当前无论对的动物模型还是临床对进行防治的研究报道均较少。左右肝硬化患者发展为临床型。本实验采用经典的四氯化碳（）连续灌胃给药形成肝纤维化动物模型，其特点是与人类疾病特征相似、病变有明显的纤维化形成过程的分期，造模方法简单易行，死亡率低等。我们连续观察该模型周后发现动物出现运动量明显减少和学习认知能力障碍等相当于临床初期的主要表现，同时伴有血氨明显升高和肝功损害。尽管的发生机制十分复杂，但高血氨的重要致病作用已得到广泛认可。因此可以认为，本模型较成功地模拟了的基本症状，为进一步的药物干预研究奠定了基础。本实验观察的中药处方组成为：地黄、苏合香两味药，是在中医理论指导下结合对地黄多年实验研究及临床实践基础上提出的，是根据慢性肝病“体用同调”，即“养肝体与益肝用”同时进行的治疗法则提出来的。生地黄甘苦寒，养阴生津、通利二便，入心、肝、肾经，能滋肾阴而养肝体、扶正护肝；苏合香辛香温能开闭塞、益肝用、除秽醒神、活血化瘀、芳香开窍；一寒一温，相合为用，药少力专，同调共济，由此而形成本处方。目前尚未见该两味药合用治疗的报道。根据形成的病程较长和中药既有预防又可干预的特点，我们采用造模同时进行治疗。我们对地黄有效部位已初步确定为低聚糖和环烯醚萜类两个部位。有报道地黄低聚糖对肝硬化患者有改善肝功、降低血氨、降低内毒素、预防大脑诱发电位异常和改善临床症状的作用，是治疗的重要物质基础之一。基础和临床研究表明，其疗效与西药乳果糖匹敌且作用机理相类似。但不同的是，水苏糖对肠道菌群的改善比乳果糖更有针对性，只增殖健康菌双歧杆菌、乳酸杆菌，而不增加产气荚膜杆菌，没有乳果糖腹胀、过于甜腻、不宜长期服用的缺点。此外，地黄中以梓醇为主的环烯醚萜类成分有保肝、抗乙肝病毒、保护脑神经、改善代谢性脑病的作用。我们在体外实验还观察到梓醇有促进神经细胞生长的作用。而近期有报道，给代谢性脑病的糖尿病大鼠服用梓醇（、）周可剂量依赖地改善模型鼠的认知功能、增加抗氧化酶活性、减少脑内海马神经元凋亡及神经生长因子（）的水平。由此可见，在治疗代谢性脑病方面，本实验高剂量组所投梓醇（相当于）与该报道具有异曲同工之效。此外，我们对苏合香的活性成分肉桂酸进行体外观察发现，其具有拮抗神经细胞氧化损伤和清除自由基的作用。我们将进一步从神经发生的新视角观察的发病机理与药物干预效果。参考文献贾林建议将亚临床肝性脑病更名为轻微型肝性脑病世界华人消化杂志，（）：龚韬，廖磊，侯晓明，等地黄低聚糖对大鼠肝损伤造成的血氨升高和认知障碍的影北京中医药，：徐叔云，卞如濂，陈修药理实验方法学版：人民卫生出版社，：许其增，杨文英，谢雨觉脑干听觉诱发电位对亚临床肝性脑病的诊断意义临床肝胆