血库操作规程

血库操作规程,朱士伟 2015-3-26,目录,ABO血型鉴定（玻片法、试管法）标准操作规程5RhD血型鉴定（玻片法、试管法）标准操作规程9ABO血型正反定型及RhD血型（微柱凝胶卡式法）标准操作规程11交叉配血试验（盐水法）标准操作规程15凝聚胺交叉配血试验标准操作规程17交叉配血试验（微柱凝胶卡式法）标准操作规程19新生儿溶血病（HDN）血型血清学检查标准操作规程22不规则抗体筛选标准操作规程26孕妇血清中红细胞血型抗体效价测定标准操作规程29医用低速离心机（X5型）标准操作规程31低速离心机（160C型）标准操作规程33HHW型电热恒温水浴箱标准操作规程35HYC-360型医用冷藏箱标准操作规程36200型血液冷藏箱标准操作规程38低温保存箱标准操作规程40,FYQ型免疫微柱孵育器标准操作规程42TD-3A血型血清学用离心机标准操作规程43WGH-I数码恒温解冻箱标准操作规程44HXC-608型医用血液冷藏箱标准操作规程45PH-A恒温摆动保存箱标准操作规程47LX-18X血小板运输箱标准操作规程48GZR-II型高频热合器标准操作规程50XS生物显微镜标准操作规程51室内质控标准操作规程52血库室间质评标准操作规程60血库配制自备试剂的标准操作规程63血标本接收及处理标准操作程序65血液入库操作规程66血液储存操作规程67血液出库操作规程69病毒灭活冰冻血浆、冷沉淀凝血因子复溶操作规程70血液报废操作规程71实验室医疗废弃物处理操作规程72,ABO血型鉴定（玻片法、试管法）标准操作规程,3、原理：根据红细胞上有或无A抗原或/和B抗原，将血型分为A型、B型、AB型及O型4种。可利用红细胞凝集试验，通过正、反定型准确鉴定ABO血型。所谓正定型，是用已知抗-A和抗-B分型血清来测定红细胞上有无相应的A抗原或/和B抗原；所谓反定型，是用已知A细胞和B细胞来测定血清中有无相应的抗-A或/和抗-B。4、试剂4.1血清抗A、抗B；4.2 5%A、B及0型试剂红细胞盐水悬液；4.3受检者血清或血浆；4.4受检者5%红细胞盐水悬液;,5、样本采集及处理 用一次性EDTA-K2真空采血管抽取静脉血1ml，将标示有患者姓名、性别、年龄、住院号、病室/门急诊、床号等信息的标签贴在标本管上，由医护人员或专门人员将患者标本送交血库。6、操作步骤6. 1玻片法 （正定型）6.1.1分型血清 l 滴于鉴定卡内，再各加受检者 5红细胞悬液 1 滴，混和。 6.1.2 将鉴定卡不断轻轻转动，使血清与细胞充分混匀，连续约 15 min，以肉眼观察有无凝集(或溶血)反应。 6.2 试管法 （正定型）6.2.1取洁净小试管2支，分别标明抗A，抗B，用滴管分别加抗A、抗B分型血清各1滴于试管底部，再以滴管分别加入受检者5%红细胞盐水悬液1滴，混合。6.2.2反定型：另取洁净小试管3支，分别标明A，B和O细胞。用滴管分别加入受检者血清1滴于试管底部，再分别以滴管加入A，B和O型5%试剂红细胞悬液1滴，混合。立即以1000r/min离心1min。6.2.3将试管轻轻摇动，使沉于管底的红细胞浮起，先以肉眼观察有无凝集（或溶血）现象。如肉眼不见凝集，应将反应物倒于玻片上，再以低倍镜检查。7、结果判断：凝集为阳性（+），不凝集为阴性（-）,8、干扰：8.1分型血清质量性能符合要求，用毕后应放冰箱保存，以免细菌污染。 8.2试剂红细胞以3个健康者同型新鲜红细胞混和，用生理盐水洗涤1次，以除去存在于红细胞中的抗体及可溶性抗原。8.3试管、滴管和玻片必须清洁干燥，防止溶血。8.4操作方法应按规定，一般应先加血清，然后再加红细胞悬液，以便容易核实是否漏加血清。8.5按理IgM抗-A和抗-B与相应红细胞的反应温度以4为最强，但为了防止冷凝集现象的干扰，一般仍在室温（2024）内进行试验，37可使反应减弱。8.6离心时间不宜过长或过短，速度不宜过快或过慢，以防止假阳性或假 阴性结果。8.7观察时应注意红细胞呈特异性凝集、继发性凝固以及缗钱状排列的区别。8.8判断结果后应仔细核对、记录，避免笔误。,9、凝强度判断:观察结果应仔细，首先注意有无凝集，再按下述情况说明凝集强度：9.1 4：红细胞凝聚成一大块，血清透明清晰。9.2 3：红细胞凝集成数小块，血清尚清晰。9.32：红细胞凝集分散成多个小块，可见游离红细胞。9.41：肉眼可见大颗粒，周围有较多红细胞。9.5 ：镜下可见数个红细胞凝集在一起，周围有很多红细胞。9.6混合凝集视场（MF,mixed field）：镜下可见数个红细胞凝集，大多数红细胞分散分布为MF。阴性（）：镜下未见凝集，红细胞均匀分布。,ABO血型正反定型及RhD血型（微柱凝胶卡式法）标准操作规程,4.2原理：本试验采用排阻层析原理，即在微柱凝胶介质中，红细胞抗原与相应抗体结合，形成红细胞免疫复合物，在一定离心条件下，该复合物不能通过凝胶间隙而浮于胶表面或悬于胶中；如无相应抗体结合，则不能形成红细胞免疫复合物，在一定离心条件下，分散的红细胞可以通过凝胶间隙沉于微柱腔底部。ABO血型基础血型抗原与抗血清反应与A1，B细胞反应抗-A抗-B抗-A,BA1BAA+0+0+/+BB0+/+0ABAB+00OH000+/+/+,4.2.1Rh血型Rh血型系统包括的主要血型抗原：C,c,E,e,D Cde=R1 Cde=R2 CcDdee=R1r与抗-D阳性反应的红细胞为Rh阳性。5、样本采集和处理：5.1受血者血样为EDTA-K2抗凝血。抽取受血者静脉血12ml于专用管（紫色头管）内，离心分离出血浆。5.2将细胞配成0.8%的悬液备用。 6、 试剂：6.10.9%的生理盐水；6.2长春博迅公司的血型定型试剂卡；6.3长春博迅公司的0.8%的A、B型试剂红细胞悬液；,8、操作程序：8.1工作准备：8.1.1将0.8%A、B型试剂红细胞悬液室温平衡。准备样本，标记卡。8.1.2 0.8%样本红细胞制备：将8l压积红细胞加到1ml生理盐水中充分混匀。8.1.3 将50lA1、B标准反定细胞加入血型卡的第5-6管中，将待检者血浆或血清50l加到血型卡的第5-6管中。将0.8%样本红细胞分别加入到血型卡的第1-4管中，各50l。8.1.4将血型卡放入血型血清学专用离心机离心5分钟后，判断结果，并作好记录。,9、结果判断： 100%的红细胞沉在微管的底部+/-100%的红细胞沉在微管的下端1/3之内1+80%的红细胞沉在微管的下端2/3之内2+80%的红细胞沉在微管的上端2/3之内3+80%的红细胞沉在微管的上端1/3之内4+凝集的细胞全部处于微管的顶部d.p.双群Hemo.溶血。,医疗机构临床用血管理办法,4+ 3+ 2+ 1+ +/- - 溶血 双群,12、注意事项：12.1每日实验前，先取出标准细胞和微柱凝胶卡，放置一段时间到室温，以防冷凝集。12.2实验前将卡离心5分钟。必须标注血型卡。12.3血型卡封口已损坏时，管中干涸，或有气泡时，卡不可使用。12.4红细胞浓度要在0.8%左右，不可太浓或太稀。12.5纤维蛋白可吸附部分红细胞，应将血样充分离心。12.6反定管先加样，以便标准细胞与血清或血浆反应。先加细胞后加血浆。12.7正反定型对照，确定结果及A亚型。正定型结果若为弱阳性，应怀疑为ABO亚型，可重做完全测试，正反结果不符时，请设计实验分析。,12.8质控（ctl）为阳性时，请先用生理盐水洗细胞，再做血型。12.9严格按标准程序操作可检出弱抗原，血型亚型。12.10某些药物，疾病可导致弱阳性及正反定型不符。12.11细菌及异常血清蛋白可影响结果。12.12禁用严重溶血标本，它会强烈干扰结果的判读。严禁使用非抗凝血标本配制红细胞悬液，以免出现假阳性结果。12.13被酶处理过的红细胞会产生非特异性凝集，禁用被污染的标本和材料。12.14卡配套的专用离心机，以确保结果的准确。,交叉配血试验（盐水法）标准操作规程,4.2原理：天然类血型抗体与对应红细胞抗原相遇，在室温下的盐水介质中出现凝集反应。通过离心，观察受血者血清与供血者红细胞以及受血者红细胞与供血者清之间有无凝集现象，判断供血、受血者之间有无ABO血型不合的情况。5、样本采集及处理 血样本为血浆（EDTA-K2抗凝）。抽取受血者静脉血34ml，3000转/分离心2分钟，分离出血浆，并将红细胞配成2%盐水悬液。将供血者血样以同样方法分离血清（血浆），并配制2%红细胞悬液。配血所用受血者血样必需是输血前3天内的。,6、操作步骤：6.1 取洁净小试管2支，1支标明受血者血清（PS）+供血者细胞（DC）；另1支标明供血清（DS）+受血者细胞（PC）。6.2 按标记主侧管放受血者血清1滴，加供血者红细胞悬液1滴。次侧管放供血者血清1滴，加受血者红细胞悬液1滴，混匀，以1000r/min离心1min，轻轻侧动试管，观察结果。6.3观察结果：先观察试管上层液有无溶血，再斜持试管轻轻侧动或轻轻弹动，观察管底反应物有无凝集（必要时用显微镜观察）。冬季室温较低，应将试管保温，以防冷凝集素引起的凝集反应。7、结果判断：ABO同型配血，主侧和次侧均无溶血、无凝集表示无输血禁忌，可以输血。异型配血时，主测无凝集，次测凝集，无溶血， 可以输给少量。输异型血时， 如次测不凝集，不可以输血，应重新复查血型或追查其原因。,凝聚胺交叉配血试验标准操作规程,4.2原理：针对不规则抗体的检出及鉴定多采用红细胞的凝聚反应试验，而凝聚反应试验的成效则与分布红细胞表面之电荷以及抗体的亲和性息息相关。凝聚胺法是利用低离子介质（LIM）来降低介质的离子强度，进而减少红细胞之间距，以促进红细胞和血清（血浆）中的抗体发生特异性结合；接着加入凝聚胺（polybrene）此种多价阳离子聚合物来中和红细胞上的阴性电荷，使细胞间发生非特异性凝聚；最后加入重悬液，使之中和由凝聚胺所引起之非特异凝聚，倘若没有凝聚发生，则判定为阴性；若有凝集，则得知存在特殊性之抗原抗体反应，则判定为阳性。6、试剂：台湾 贝索的试剂盒：1)低离子溶液（LIM）2)聚凝胺溶液（POLYBRENE）3)悬浮液（RESUSPENDING）,7、操作步骤7.1 取试管两支,分别标明主次侧管,主侧管加入受血者血清两滴,再加入25%献血者红细胞悬液1滴,次侧管反之。7.2每支试管中加入0.7mlLIM液,混匀;再各加入2滴POLYBRENE液,混匀。7.3 3400转离心10秒，弃上清液，不要沥干，让管底残留约0.1ml液体。7.4轻摇试管，目测红细胞有无凝集，若无凝集则必须重作。7.5加2滴resuspeneing液，轻摇试管混合并同时观察结果。,8、结果判断立即目测并镜检观察凝集状态。如果30秒内凝集散开，代表是由polybrene引起的非特异性聚集，配血结果相合。若凝集不散开，则为红细胞抗原抗体结合的特异性凝集，配血结果不相合。若反应可疑，可进一步用显微镜观察。,10、注意事项10.1可以用含EDTA之血浆代替血清使用。10.2 若病人血清含肝素多，如洗肾患者，则应加入双倍量的Polybrene液和肝素。10.3试剂使用前，应恢复室温再做。10.4在冬天气温极低的情况下，操作交叉配血试验，由于某些病人血清可能含有冷凝集素等因素而导致假阳性结果出现。若有怀疑，建议在最后滴加RESUSPENDING液时将试管立即置于370C水浴中,轻轻转动试管混合,并在30秒内观察结果。,0.8%-1%样本红细胞制备：加20l样本压积红细胞悬浮于2ml0.9%的生理盐水中。红细胞悬液的配制悬液浓度（%）压积红细胞（滴）盐水（滴）2 1 2 ml（40） 5 1 0.8 ml（16） 10 1 0.4 ml（8） 20 1 0.2 ml（4）,不规则抗体筛选标准操作规程,6.3微柱凝胶抗人球蛋白法筛选红细胞不规则抗体6.3.1试剂：生理盐水，、号不规则抗体筛选细胞（0.5-0.8%的浓度），博迅的不规则抗体筛查卡。6.3.2仪器：离心机，微柱凝胶卡专用孵育器及离心机。6.3.3操作程序：微柱凝胶抗人球蛋白法筛选红细胞不规则抗体的具体方法如微术凝胶配血法，具体操作如下：1）将准备好的检测卡做好标记； 2）将0.5-0.8%、筛检红细胞各50l分别加入对应的微管中; 3）将待检者