消毒灭菌与病原微生物实验室生物安全

第三章 消毒灭菌与病原微生物实验室生物安全,李文姝,基本概念 消毒（disinfection）：杀死物体上或环境中的病原微生物、 并不一定杀死细菌芽胞或非病原微生物的 方 法。 灭菌（sterilization）：杀死 物体上所有微生物的方法(包括芽 孢)。 清洁（cleaning）：除去尘埃和污秽以减少微生物数量的方法。 无菌（asepsis）：不存在活菌的意思。 无菌操作：防止细菌进入人体或其他物品的操作技术。 防腐（antisepsis）：体外防止或抑制细菌生长繁殖的方法。,消毒灭菌,例： 外科手术 无菌操作 内服抗生素 抑菌 接种环火焰烧灼无菌 火化灭菌 局部皮肤75%酒精擦拭 消毒,一、消毒灭菌的方法,常用的消毒和灭菌方法可分为 物理和化学两种方法,(一) 物理灭菌法,热力灭菌法辐射杀菌法滤过除菌法干燥与低温抑菌法,热力灭菌 原理： 破坏菌体蛋白质与核酸，使其肽 链断裂，蛋白质 变性凝固，核酸 解链崩解, 导致细菌死亡。,种类： 常用热力灭菌法,巴氏消毒法,种类,效果,用途,湿热,巴斯德创用，61.1-62.830分钟，71.7 30秒钟（常用）,消毒（杀死病原菌，不破坏营养成分）,牛奶，酒类,方法,流通蒸气法,100 蒸气1530分钟,消毒（杀死细菌繁殖体，不杀死芽胞）,不耐高温、高压物品,间歇灭菌法,反复多次流动蒸气,灭菌,不耐高温、高压物品,湿热效力大于干热 原因 （1）湿热中细菌菌体蛋白较易凝固变性 （2）湿热的穿透力比干热大 （3）湿热的蒸汽有潜热效应,高压蒸汽灭菌器,辐射杀菌法 紫外线（ ultraviolet ray,UV) : 260nm-266nm（最佳杀菌波长） 杀菌原理：使DNA上相邻的T碱基通过共价键结合成 二聚 体，干扰DNA复制与转录，导致细菌死亡 特点： 穿透力弱 适用范围：适于空气和物体表面消毒,电离辐射 如 ： -ray，-ray 机理: 干扰DNA 合成、破坏细胞膜、酶系统紊乱等 适用物品：不耐热的物品（食品、药品及医疗用品） 微波（microwave) 机理：热效应 适用物品：非金属物品、食品,滤过除菌法（filtration） 机理：用物理阻留的方法将液体或空气中的细菌除去, 以达到除菌目的 器具：滤菌器（filter） 适用物品：不耐高温物品（血清、毒素、抗生素）以及 空气等的除菌,干燥与低温抑菌法,用途：保存菌种,（二）化学消毒灭菌法 消毒剂杀菌机理：1.使菌体蛋白变性和凝固 酚、醇、酸硷、醛类， 重金属盐类（高浓度） 2 .干扰细菌的酶系统（酶失活） 氧化剂、重金属盐类（低浓度） 3. 损伤细菌细胞膜 酚类（低浓度）、表面活性剂,按杀菌能力又可将消毒剂可分,类别 作用机制 常用种类酚类 蛋白变性，细胞膜损伤 石炭酸醇类 蛋白变性 乙醇（70%-75%）氧化剂 氧化、蛋白沉淀 高锰酸钾、过氧乙酸 碘酒重金属盐 氧化、蛋白酶变性 红汞、硫柳汞表面活性剂改变细胞膜通透性 新洁尔灭染料 干扰氧化、抑制繁殖 龙胆紫烷化剂 菌体蛋白质及核酸烷基化 甲醛、烷氧乙烷,常用消毒剂的种类（按化学成分）,常用消毒剂的应用,生物灭菌法,抗生素Antibiotic细菌素Bacteriocin 噬菌体Bacteriophage,二、消毒灭菌的应用,医疗器械物品的消毒灭菌室内空气的消毒灭菌手和皮肤的消毒黏膜的消毒病人排泄物和分泌物的消毒灭菌病人污染物品的消毒饮水的消毒环境的消毒,根据消毒或灭菌对象，选择合适的消毒灭菌方法,消毒剂,微生物,环境,性质,浓度,作用时间,种类,数量,有机物,温度,酸硷度,三、影响消毒灭菌效果的因素,第四节 病原微生物实验室生物安全,生物安全（biosafety）是生物技术安全（safety of biotechnology）的简称。 狭义 指现代生物技术的研究、开发、应用及转基因生物可能对生物多样性、生态环境和人类健康产生潜在的危害。 广义 指与生物有关的各种因素对社会、经济、人类健康及生态环境所产生的危害或潜在风险。,病原微生物所致的安全问题，如病原微生物实验室的安全隐患、生物武器、生物恐怖、重大传染病的暴发流行等，也是人类社会所面临的最现实的生物安全问题。 病原微生物实验室生物安全的核心是防扩散和防感染。 关于病原微生物实验室生物安全，我国法令包括对病原微生物的分类管理，对实验室的分级管理，实验室感染的控制以及监督和法律责任等。,一、病原微生物的分类,根据传染性、感染后对个体或者群体的危害程度，病原微生物分为四类： 第一类 是指能够引起人类或者动物非常严重疾病的微生物，以及我国尚未发现或者已经宣布消灭的微生物。 第二类 是指能够引起人类或者动物严重疾病，比较容易直接或者间接在人与人、动物与人、动物与动物间传播的微生物。,第三类 是指能够引起人或动物疾病，但一般情况下对人、动物或环境不构成严重危害，传播风险有限，实验室感染后很少引起严重疾病，并且具备有效治疗和预防措施的微生物。 第四类 是指在通常情况下不会引起人或动物疾病的微生物。如小鼠白血病病毒等。 第一类、第二类统称为高致病性病原微生物。,二、病原微生物实验室的分级,一、二级实验室不得从事高致病性病原微生物实验活动。三级、四级实验室从事高致病性病原微生物实验活动。 从事高致病性病原微生物相关实验活动应当有名以上的工作人员共同进行。在同一个实验室的同一个独立安全区域内，只能同时从事一种高致病性病原微生物的相关实验活动。应有健全安全保卫制度 。,实验室工作人员应掌握实验室技术规范、操作规程、生物安全防护知识和实际操作技能。应有符合要求的防护用品，应建立健康档案；进行预防接种。 实验室应有科学、严格的管理制度，定期对实验室设施设备、材料等进行检查、维护和更新，应对废水、废气以及其他废物进行合理处置，防止环境污染。,生物安全,三、实验室感染的控制以及监督和法律责任,实验室感染控制工作包括定期检查实验室的生物安全防护、病原微生物菌（毒）种和样本保存与使用、安全操作、实验室排放的废水和废气以及其他废物处置等实施情况。 实验室发生高致病性病原微生物泄漏时，预防、控制措施包括：封闭被病原微生物污染的实验室或可能造成病原微生物扩散的场所；开展流行病学调查；对病人进行隔离治疗，对相关人员进行医学检查；对密切接触者进行医学观察；进行现场消毒；对染疫或者疑似染疫的动物采取隔离、扑杀等措施。,监督的主要内容是监督病原微生物实验室执行国家有关法律、行政法规、国家标