鬼箭羽提取物质量标准及抗大鼠前列腺增生实验研究

学院代号10716学号0专业代码100800密级陕西中医学院SHAANXIUNIVERSITYOFCHINESEMEDICINE硕士学位论文鬼箭羽提取物质量标准及抗大鼠前列腺增生实验研究学位申请人柴焱专业名称中药学医学硕士科学学位申请学位类型指导教师姓名陈萍论文提交日期2013年4月陕西中医学院学位论文独创性声明及使用授权声明学位论文独创性声明本人郑重声明所呈交的学位论文,是个人在导师的指导下,独立进行研究工作所取得的成果,无抄袭及编造行为。除文中已经特别加以注明引用的内容外,本论文不含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体,均已在文中以明确方式标明并致谢。本人完全意识到本声明的法律结果并由本人所承担的法律责任。学位论文作者签名_日期年月日关于学位论文使用授权的声明陕西中医学院有权保留使用本人学位论文,同意学院按规定向国家有关部门机构送交论文的复印件和电子版,允许被查阅和借阅。本人授权陕西中医学院可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索,可以采用影印、缩印或其他复印手段保存和汇编本学位论文。可以公布包括刊登论文的全部或部分内容。保密论文在解密后应遵守此规定论文作者签名_日期年月日论文导师签名_日期年月日摘要目的通过对中药鬼箭羽的研究,建立鬼箭羽提取物质量标准。研究鬼箭羽提取物对大鼠前列腺增生的防治作用以及作用机制的初步探讨。通过测定大鼠前列腺湿重和前列腺指数明确鬼箭羽提取物对大鼠前列腺增生的防治作用,并通过观察大鼠前列腺病理切片等情况初步探究鬼箭羽提取物治疗大鼠前列腺增生的机制。方法对鬼箭羽提取物进行了薄层鉴别,水分、灰分等的检查,并测定了山柰酚及槲皮素的含量。对其开展了初步毒性研究、基础药效学、抗前列腺增生药效研究,基础药效学实验包括甩尾镇痛实验、扭体镇痛实验、腹腔毛细血管通透性抗炎实验、利尿实验、解热实验抗前列腺增生药效实验是将大鼠分为6组包括模型组、假手术组、阳性组普适泰组、鬼箭羽提取物高、中、低剂量组,除假手术组外,每组大鼠肌肉注射丙酸睾酮5MG/KG/D,并同时每日灌胃相应剂量的药物,持续30天。末次给药24H后,称取各组大鼠重量,颈总动脉插管取血,处死动物,取前列腺并计算前列腺指数,取前列腺腹页固定于10福尔马林液中作常规石蜡切片,HE染色,做病理组织学检查,观察间质炎症、水肿、充血和纤维组织增生等情况。结果鬼箭羽提取物中山柰酚及槲皮素的薄层鉴别条件为硅胶G板,以正己烷乙酸乙酯甲酸431为展开剂,3的三氯化铝乙醇溶液为显色剂。测得鬼箭羽提取物中山柰酚含量为0582MG/ML槲皮素含量为0740MG/ML。药理研究结果表明鬼箭羽提取物有明显的镇痛P001和抗炎P005作用,解热P001和利尿P001作用也很显著采用去势丙酸睾酮腹腔注射法成功建立大鼠前列腺增生模型,模型大鼠前列腺湿重、前列腺指数均显著增加P005病理结果前列腺增生模型的腺上皮变为高柱状,部分腺上皮呈乳头状增生并可见复层样改变,腺腔明显扩大,腔内分泌物增加,腺泡腔内可见凝固体,腺体周围纤维结缔组织及平滑肌明显增厚、增多及炎细胞浸润。用药组大、中、小剂量的前列腺湿重及前列腺指数均下降,病理表现有不同程度的改善,其中低剂量组前列腺重量及前列腺指数均明显下降P005,病理表现改善最明显。结论山柰酚、槲皮素的薄层条件分离好、斑点清晰,具有专属性、可重复性,确定了鬼箭羽提取物中山柰酚及槲皮素的含量,建立的标准可用于鬼箭羽提取物质量控制。药理实验表明,鬼箭羽提取物安全、有效,具有明显的镇痛、抗炎作用增加动物的排尿量、降低体温采用去势丙酸睾酮腹腔注射法成功建立大鼠前列腺增生模型,鬼箭羽提取物能显著降低大鼠的前列腺湿重及前列腺指数,可使模型大鼠前列腺腺体数量减少、体积变小,腺腔分泌物减少,恢复腺上皮的正常形态,使腺体周围间质减少。关键词鬼箭羽提取物质量标准前列腺增生ABSTRACTOBJECTIVERESEARCHTRADITIONALCHINESEMEDICINEEUONYMUSALATUSTHUNBSIEBTOESTABLISHTHEQUALITYSTANDARDSOFEUONYMUSALATUSEXTRACTSTUDYTHEPREVENTIVEANDTHERAPEUTICEFFECTOFEUONYMUSALATUSTHUNBSIEBEXTRACTONRATWITHBENIGNPROSTATICHYPERPLASIABPH,ANDPRELIMINARYDISCUSSINGTHEMECHANISMITWASCOMFIRMEDTHATEUONYMUSALATUSTHUNBSIEBEXTRACTCANBEUSEDTOPREVENTANDTHERAPYBPHTHROUGHTHEMETHODOFDETERMININGTHERATPROSTATEWETWEIGHTANDPROSTATEINDEXWEOBSERVETHEPATHOLOGICALSECTIONOFRATPROSTATETOINVESTIGATETHEMECHANISMOFBPHPRELIMINARYMETHODIDENTIFYTHEEUONYMUSALATUSTHUNBSIEBEXTRACTBYTHINLAYERCHROMATOGRAPHYMETHODEVALUATETHEASSAYOFRESURRECTIONLILYELEMENTANDQUERCETININTHEEUONYMUSALATUSTHUNBSIEBEXTRACTWERESERCHTHEBASICPHARMACODYNAMICSANDTOXICITYOFEUONYMUSALATUSTHUNBSIEBEXTRACT,BASICPHARMACODYNAMICSTESTSINCLUDEDTAILFLICKTEST,WRISTINGTEST,CELIACCAPILLARYPERMEABILITYTEST,DIURESISTEST,ANTIPYRETICTESTTHETESTSDIVIDEDRATSINTO6GROUPSMODELGROUP,SHAMOPERATIONGROUP,POSITIVEGROUPPROSTATTABLET,EUONYMUSALATUSTHUNBSIEBEXTRACTGROUPSHIGHDOSEGROUP,MIDDLEDOSEGROUP,LOWDOSEGROUPEVERYGROUPTOOKINTRAMUSCULARINJECTIONOFTESTOTERONEPROPIONATE5MG/KG/DEXCEPTSHAMOPERATIONGROUP,ANDGAVAGERELEVANTDOSEOFMEDICINEFOREACHGROUP,LASTFOR30DAY24HOURAFTERTHELASTMEDICINEDOSE,WEWEIGHTTHERATS,INTUBATIONBLOODFROMCOMMONCAROTIDARTERY,SACRIFICEDTHERATSGETTHEPROSTATEANDCALCULATETHEPROSTATEINDEXFIXTHEPROSTATEABDOMINALPAGEINTHE10FORMALINACETICACIDANDMAKEATRADITIONALPARAFFINSECTION,DYEBYHE,DOTHEPATHOLOGYHISTOLOGICEXAMINATION,OBESERVETHEPHENOMENONOFINTERSTITIALINFLAMMATORY,EDEMA,HYPEREMIAANDHYPERPLASIAOFFIBROUSTISSUERESULTSTHETHINLAYERCONDITIONOFRESURRECTIONLILYELEMENTANDQUERCETINIDETIFICATIONINEUONYMUSALATUSTHUNBSIEBEXTRACTISASFOLLOWSTHESILICONGPLATE,THEDEVELOPINGSOLVENTISMIXTUREOFNHEXANEETHYLACETATEMETHANOICACID431,THECOLORDECELOPINGAGENTIS3ALUMINIUMTRICHLORIDEETHANOLSOLUTIONTHECONTENTOFRESURRECTIONLILYELEMENTANDQUERCETININEUONYMUSALATUSTHUNBSIEBEXTRACTARE0582MG/MLAND0740MG/MLEUONYMUSALATUSTHUNBSIEBEXTRACTSHOWNSIGNIFICANTLYEFFECTOFANALGESIAP001ANDANTIINFLAMMATORYP001,THEANTIPYRETICEFFECTP001ANDDIURETICP001EFFECTAREALSOSIGNIFICANTINTRAPERITONEALINJECTIONOFTESTOTERONEPROPIONATECANSUCESSFULLYBUILDUPTHERATBPHMODELRATSINMODELGROUPHADASIGNIFICANTINCREASEP005OFPROSTATEWETWEIGHTANDPROSTATEINDEXTHERESULTOFPATHOLOGYSHOWEDTHATTHEGLANDULAREPITHELIUMOFBPHGROUPTURNDINTOCOLUMNAR,PARTOFTHEGLANDULAREPITHELIUMSHOWPAPILLARYHYPERPLASIAANDSTRATIFIEDCHANGE,GLANDULARCAVITYSIGNIFICANTLYLARGEN,SECRETIONSINCAVITIESINCREASED,CONCRETIONFOUNDINACINUSCAVITIES,FIBROUSCONNECTIVETISSUEANDSMOOTHMUSCLEAROUNDTHEGLANDSHOWEDSIGNIFICANTLYINCREASEOFTHICKNESSANDNUMBER,ITWASINFLAMMATORYCELLINFILTRATIONALLTHEPROSTATEWETWEIGHTANDPROSTATEINDEXDESCENDINTHEMEDICINEDOSEGROUP,PATHOLOGILYSHOWEDDIFFERENTDEGREEOFIMPROVEMENTEUONYMUSALATUSTHUNBSIEBEXTRACTLOWDOSEGROUPSHOWEDEVIDENTDESCENDOFPROSTATEWETWEIGHTANDPROSTATEINDEXP005,PATHOLOGILYIMPROVEDMOSTCONCLUSIONTHERESOLUTIONOFTHETHINLAYERCONDITIONOFRESURRECTIONLILYELEMENTANDQUERCETINIDETIFICATIONINEUONYMUSALATUSTHUNBSIEBEXTRACTISGOOD,ANDTHESPOTISCLEAR,THROUGHTHEMETHODWECONFIRMTHECONTENTOFRESURRECTIONLILYELEMENTANDQUERCETININEUONYMUSALATUSTHUNBSIEBEXTRACTTHESTUDYSHOWEDTHATEUONYMUSALATUSTHUNBSIEBEXTRACTHADSIGNIFICANTANALGESIAANDANTIINFLAMMATORYEFFECT,ANDDIDSOMEEFFECTONANTIPYRETICANDDIURETICINTRAPERITONEALINJECTIONOFTESTOTERONEPROPIONATECOULDSUCESSFULLYBUILDUPTHERATBPHMODELEUONYMUSALATUSTHUNBSIEBEXTRACTCOULDSIGNIFICANTLYDECREASERATPROSTATEWETWEIGHTANDPROSTATEINDEXITCOULDDECREASETHENUMBERANDTHEVOLUMEOFGLANDINTHEPROSTATEOFBPHRAT,REDUCESECRETIONSGENERATIONINCAVITIES,REFRESHTHEREGULARSHAPEOFGLANDULAREPITHELIUM,REDUCETHEMESENCHYMEAROUNDTHEGLANDKEYWORDSEUONYMUSALATUSTHUNBSIEBEXTRACT,QUALITYSTANDARD,BENIGNPROSTATICHYPERPLASIA目录引言11前列腺增生研究现状111概述112国内外发展概况12鬼箭羽现代研究321鬼箭羽概况322化学成分3221黄酮类成分3222三萜类成分3223甾体类成分3224生物碱类成分4226其他类成分423药理作用4231降血糖、降血脂作用4232对心血管系统作用4233抗肿瘤作用4234抗菌、抗炎作用5235抗氧化作用53选题的目的及意义5正文71鬼箭羽提取物质量标准研究711实验材料712制法713水分测定814灰分测定8141总灰分测定9142酸不溶性灰分测定法915薄层鉴别10151仪器与试药10152方法与结果1016含量测定14161对照品溶液制备14162供试品溶液制备14163色谱条件14164含量测定结果1417结论162鬼箭羽提取物急毒及药效学实验研究1921鬼箭羽提取物急性毒性研究19211实验材料19212实验方法19213实验结果1922鬼箭羽提取物药效学实验研究20221实验材料20222实验方法2123结论28小结与讨论30参考文献34附录38致谢43鬼箭羽提取物质量标准及抗大鼠前列腺增生实验研究引言1前列腺增生研究现状11概述前列腺增生症BENIGNPROSTATICHYPERPLASIA,BPH亦即前列腺肥大,是中老年男性的常见疾病。随着老龄化进程的加快和人民生活水平的提高,我国前列腺增生症BPH的发病明显增加,目前已和欧美国家的发病率相仿,在40岁男性中有510出现前列腺增生的病理改变,发病率随年龄增长而上升,60岁男1性患病率为50,80岁达88,到90岁时,若进行前列腺组织学检查几乎100发2现前列腺增生。BPH已成为我国泌尿外科最常见的疾病。在二十一世纪,随着人口老龄化,前列腺增生的患病率继续增加,将严重影响到老年男性的生活质量甚至出现各种并发症。前列腺增生症主要临床表现为尿频夜尿次数增多、排尿困难、尿潴留、尿失禁等,并可继发膀胱结石、尿路感染、肾功能损害等,可合并腹外疝、痔疮、脱肛等疾病,这些问题都严重影响着患者的睡眠和生活质量,甚至威胁生命。12国内外发展概况BPH的发生必须具有年龄的增长及有功能的睾丸两个重要条件,目前主要有以下几种学说激素内分泌学说、新生血管学说、上皮间质细胞相互作用学说、3细胞凋亡与基因调控学说等,这些发病机制可能在某个阶段、某些组织结构内发挥了相应的调控作用。激素内分泌学说前列腺作为雄激素的依赖性器官,其生长、结构的维持及功能的完整均需要睾丸提供的循环雄激素的支持。睾酮在5还原酶的作用下转化为双氢睾酮DHT,从而发挥雄激素对前列腺的刺激增长作用,导致前列腺4肥大增生,DHT是前列腺内雄激素的活性形式。研究发现BPH组织中DPH含量比5正常组织高34倍,在同一前列腺中,BPH结节内的DPH含量高于正常部分。在正常雄激素水平下,前列腺组织中细胞增殖与凋亡保持平衡,当男性进入老年期前列腺基质细胞增殖和凋亡均呈增加趋势,而凋亡细胞数目远低于增殖细胞数,6最终致使前列腺组织过度增生而引起BPH发生。新生血管学说血管生成过程包括血管形成和血管新生两个过程。1998年7FOLKMAN提出任何实质肿瘤的生长与转移均需要新生血管的形成,BPH的发生有1鬼箭羽提取物质量标准及抗大鼠前列腺增生实验研究8赖于新血管生成,有关BPH与血管新生的研究已有报告,研究血管形成与BPH发生的机理十分必要。血管生成涉及一系列形态学及生化学改变,其生化学机制9涉及到血管生成因子与血管抑制因子之间的调节失衡。上皮间质细胞相互作用学说间质细胞在前列腺生长中起重要作用,CUNHA1987发现胚胎间质植入正常大鼠前列腺可诱发BPH,而且增生程度与植入量呈正比。FRANKS1970发现间质细胞含有雄激素受体,将间质细胞与上皮细胞分离后,上皮细胞就失去了生长能力及对雄激素的敏感性。提示雄激素作用的发挥有赖于间质上皮相互作用,而上皮间质细胞相互作用是前列腺分化、生长发育的重要内在因素。有研究发现在BPH组织中上皮细胞与间质细胞的连结素蛋白含量明显升高,进一步证实上皮间质的相互作用与BPH的发生有关。另外成熟前10列腺间质细胞被重新激活,逆转成胚胎状态,刺激上皮细胞增生,形成BPH。细胞凋亡与基因调控学说前列腺的正常大小有赖于腺体内细胞增殖与凋亡的平衡,当出现凋亡的减少及增殖的增多均可引起BPH,与凋亡相关研究主要集中在BCL2家族、PCNA和KI67。BCL2为凋亡抑制基因而BAX为促进凋亡基因,11二者同属BCL2家族,其比例决定了细胞是否发生凋亡,有实验表明BPH的12BAXMRNA及BAX/BCL2显著降低,说明细胞凋亡参与了BPH的病理。前列腺增生症大致属于中医学“癃闭”的范畴。“癃闭”之病名首见于内经,并对其病因病机、病位进行论述。伤寒杂病论将其辨为气化不行、水热互结、脾肾两虚挟热等证型。中医学认为,年老体衰、肾气亏虚是前列腺增生症的发病基础,瘀血、痰浊、湿热是基本的病理因素,劳力过度、情志刺激、外感13六淫、饮食不节是常见的发病条件,本虚标实是基本病机特点。中医以补肾祛瘀法、益气散结法、解毒祛湿利尿法、清热利湿合活血化瘀行水法等,在辨证分型基础上,多是两种或两种以上治法相结合,达到治疗的目的。BPH的治疗方法多种多样,包括观察等待、药物治疗和外科疗法。部分前列腺增生症患者排尿症状较轻可选择观察等待。如果症状较重,为缓解患者下尿路症状并延缓疾病进展,则需要药物治疗。治疗BPH的主要药物作用为通过松弛平滑肌而改善排尿症状的受体阻滞剂及通过降低双氢睾酮而缩小前列腺体积的5还原酶抑制剂等药物,但这些药物有引发体位性低血压、无力、勃起功14能障碍以及性欲低下等并发症的可能文献报道植物制剂如普适泰等可有效改2陕西中医学院2013届硕士学位论文15善排尿症状且无明显副作用在国内,利用中药治疗前列腺增生也有较多研究应用,但尚无作用明确且广泛使用的中药制剂。对部分使用药物治疗效果不佳、下尿路症状严重、合并有膀胱结石或者出现输尿管返流的患者可考虑行手术治疗,经尿道前列腺电切术是前列腺增生手术治疗的金标准,还有激光气化剜除、前列腺支架、开放前列腺摘除术等其他治疗方式,但手术费用高昂、部分合并有严重心肺疾病的患者及高龄患者不宜手术治疗,且部分病人术后会出现出血、前列腺电切综合征等近期并发症及尿失禁、尿道狭窄等远期并发症。2鬼箭羽现代研究21鬼箭羽概况鬼箭羽即卫矛科卫矛属植物卫矛,学名EUONYMUSALATUSTHUNBSIEB英文名WINGEDEUONYMUS。又名八树陕西、篦梳风湖南、鬼箭、六月凌、四面锋、蓖箕柴、四棱树、山鸡条子、四面戟、见肿消、麻药广东。为卫矛科植物卫矛的具翅状物的枝条或翅状附属物。以根,带翅的枝及叶入药。全年采根,夏秋采带翅的枝及叶,晒干。鬼箭羽主要产于我国东北、华北、西北至长江流域以及海南、广东等地各地,日本、朝鲜也有分布。适应性强,耐寒,耐荫,耐修剪,耐干旱、瘠薄。对二氧化硫有较强抗性。生长较慢。22化学成分221黄酮类成分董陆路等用分光光度法测定鬼箭羽叶、翅、茎、果各部位总黄酮的含量分别16为6,35,623,0153,0331。结果表明黄酮的含量以叶、翅居多。现已分得的黄酮类化合物有槲皮素、金丝桃甘、槲皮素3半乳糖木糖苷、柚皮素、山柰酚、香橙素、D儿茶素、去氢儿茶素。222三萜类成分鬼箭羽中三萜类化合物多为齐墩果烷型和木栓烷型,少数为羽扇豆烷型。张振家等从毛叶卫矛根乙醇提取物的氯仿萃取物部分,分离得到6个三萜化合物,即雷公藤内酯甲、雷公藤内酯乙、美登木酸、绿舒筋酮、雷公藤三萜酸B和齐墩果1720酸12烯3,29二醇。223甾体类成分3鬼箭羽提取物质量标准及抗大鼠前列腺增生实验研究陈科等从鬼箭羽中分得4种甾体成分,经理化性质及波谱数据分析为豆甾421烯3酮,豆甾4烯3,6二酮,谷甾醇和6羟豆甾4烯3酮。鬼箭羽2022中还含有3种强心苷类化合物,为3OL鼠李吡喃糖基L14二羟基2022强心甾烯3OD葡萄吡喃糖基L14二羟基强心甾烯3OD2022葡萄吡喃糖基16D葡萄吡喃糖基L14二羟基强心甾烯。224生物碱类成分鬼箭羽中有多种生物碱存在,如卫矛羰碱、卫矛碱、雷公藤碱、鬼箭羽碱、22新鬼箭羽碱、雷公藤新碱和雷公藤碱己。225酚酸类成分郎素梅等从鬼箭羽中分离得到4个酚酸类化合物,分别为对羟基苯甲酸、3,423二羟基苯甲酸、3甲氧基4羟基苯甲酸和3,5二甲氧基4羟基苯甲酸。匡海学等从鬼箭羽中获得2,4,6三甲氧基苯酚和3,4二羟基苯甲酸甲酯。卫矛种子油24中含饱和脂肪酸20、油酸、亚油酸、亚麻酸、己酸、乙酸和苯甲酸等。226其他类成分25申凤玉等还从鬼箭羽中分离得到木栓酮及鬼箭羽醇23药理作用231降血糖、降血脂作用尚文斌等给予四氧嘧啶性糖尿病小鼠鬼箭羽发现鬼箭羽能够降低糖尿病小鼠的血糖,并且小鼠眼眶后静脉丛取血测全血黏度,发现可使糖尿病小鼠的高、26低切变率下的全血黏度明显下降。杨海燕等研究发现鬼箭羽可以促进正常脂肪细胞低浓度胰岛素刺激脂肪细胞的葡萄糖摄取,此作用可能是其降糖作用机制之27一。王秋娟等研究发现在高糖条件下,鬼箭羽提取物可以减少肾小管上皮细胞28LDH释放率,降低NAG活性,提高ALP的活力。可能有预防和减轻糖尿病肾病并发症的作用。232对心血管系统作用董陆路等对小鼠腹腔注射不同PH的水的提取物可显著增加治疗组小鼠抗缺29氧的生存时间。233抗肿瘤作用SEOUK等发现鬼箭羽正丁醇部位对MMP9有强大的抑制作用,在100G/ML时4陕西中医学院2013届硕士学位论文30抑制活性90。KIMCH等研究了鬼箭羽在人类子宫平滑肌细胞中产生的细胞毒作用和机制,发现鬼箭羽对健康志愿者外周血单核细胞有微弱毒性作用31。CHUNGTW等从鬼箭羽中分离得到咖啡酸CA发现CA可以抑制裸鼠体内HEPG232肿瘤的异种抑制移植。234抗菌、抗炎作用谷树珍发现鬼箭羽醇提取物能抑制金黄色葡萄球菌和大肠埃希杆菌,且对后者的作用优于前者,而对铜绿假单胞杆菌无抑菌作用。鬼箭羽醇提物和总黄烷能33明显抑制PC诱导的小鼠耳廓迟发型接触性皮炎。235抗氧化作用CHUNGHS发现鬼箭羽可以增加RIFN预处理后巨噬细胞的NO和TNF产34生,并发现NFB对鬼箭羽的调节作用有重要影响。HUANGD等发现鬼箭羽EA总黄酮TFEA、总皂苷TSEA和总多糖TPEA的抗氧化作用可能与清除35自由基和降低脂质过氧化有关。3选题的目的及意义通过查阅国内外相关文献,对鬼箭羽药理作用阐述并不完善,根据临床应用情况,鬼箭羽的镇痛抗炎、利尿解热以及抗前列腺增生的作用,但缺乏相应的实验研究来证实其药理作用,致使鬼箭羽的研究出现很多空白,基于此原因本课题将从鬼箭羽提取物入手,证实其就有镇痛抗炎、利尿解热以及抗前列腺增生的作用。鬼箭羽提取物质量标准并未有正式报道,本课题也欲对鬼箭羽提取物质量标准进行系统研究,为其将来的开发应用提供实验依据。本课题还将探讨鬼箭羽提取物的作用机制,通过试验研究证明鬼箭羽提取物是一种新型防治前列腺增生的药物,为其进一步实验研究和将来的临床应用提供实验依据。市面上销售的治疗前列腺的药物大多数为西药,但是副作用过大,对肝肾的损伤是不可逆转的。剩余治疗前列腺增生的就为天然药物的提取物,虽然毒副作用较小,但治疗周期很长,使患者长期处于病痛的这么当中,因此本课题将采用现代分析和手段进行系统分析研究,确定最佳量效关系,进行药效物质基础药效作用机理研究,终将成为一种高效低毒的抗前列增生药物,对减轻广大前列腺增生患者的痛苦,提高中老年男性生活质量具有重要意义。鬼箭羽的临床应用很广泛,常用于月经不调,产后淤血腹痛,跌打损伤肿痛。5鬼箭羽提取物质量标准及抗大鼠前列腺增生实验研究近代临床研究证明,还可用于治疗肺源性心脏病、冠心病、心绞痛、支气管哮喘、糖尿病、慢性活动性肝炎、肝硬化腹水、慢性胆囊炎、甲状腺结节、子宫肌瘤、脑外伤性癫痫、硬皮病、银屑病、过敏性疾病、类风湿性关节炎、慢性粒细胞白血病等疾病,而且本课题开发了新的临床应用,必将会增大鬼箭羽在临床上的使用,也为鬼箭羽开发新的市场,提高经济效益。我省为鬼箭羽的主产地,具有独特的资源和地理优势。因此该项目的成功开发有效的推动地方中药种植业和产业的可持续发展,提高中药产业的创新能力和市场竞争力。6陕西中医学院2013届硕士学位论文正文1鬼箭羽提取物质量标准研究11实验材料仪器PB211D型电子分析天平德国赛多利斯KQ250DE超声波清洗仪昆山市超生仪器有限公司HHS4型电热恒温水浴锅北京科伟永兴仪器有限公司WATERS2690高效液相色谱仪FOEA26810D型纯水机MILLIPORE公司对照品山柰酚批号110861201209中国药品生物制品检定所槲皮素批号100819905中国药品生物制品检定所。试剂乙腈为色谱纯,其他试剂均为分析纯。鬼箭羽购于陕西西安药材公司,经陕西省中医药研究院杨志峰研究员鉴定为鬼箭羽的干燥叶、翅。12制法本实验对5种提取方法进行初步筛选方法1取鬼箭羽药材约2G,精密称定,置250ML的锥形瓶中,精密加入50乙醇100ML密塞,称定重量,静置1小时后,加热至沸腾,并保持微沸1小时。放冷后,取下锥形瓶,密塞,再称定重量,用水补足减失的重量,摇匀,用干燥滤器滤过。精密量取滤液25ML,置已干燥至恒重的蒸发皿中,在水浴上蒸干后,于105干燥3小时,置干燥器中冷却30分钟,迅速精密称定重量,计算浸出物的含量。方法2取鬼箭羽药材约4G,精密称定,置250ML的锥形瓶中,精密50乙醇100ML密塞,塞紧,冷浸,前6小时内时时振摇,再静置18小时,用干燥滤器迅速滤过,精密量取续滤液20ML,置已干燥至恒重的蒸发皿中,在水浴上蒸干后,于105干燥3小时,置干燥器中冷却30分钟,迅速精密称定重量,计算浸出物的含量。方法3取鬼箭羽药材约4G,精密称定,置250ML的锥形瓶中,精密95乙醇100ML密塞,塞紧,冷浸,前6小时内时时振摇,再静置18小时,用干燥滤器迅速滤过,精密量取续滤液20ML,置已干燥至恒重的蒸发皿中,在水浴上蒸干后,于7鬼箭羽提取物质量标准及抗大鼠前列腺增生实验研究105干燥3小时,置干燥器中冷却30分钟,迅速精密称定重量,计算浸出物的含量。方法4取鬼箭羽药材约2G,精密称定,置250ML的锥形瓶中,精密加入95乙醇100ML密塞,称定重量,静置1小时后,加热至沸腾,并保持微沸1小时。放冷后,取下锥形瓶,密塞,再称定重量,用水补足减失的重量,摇匀,用干燥滤器滤过。精密量取滤液25ML,置已干燥至恒重的蒸发皿中,在水浴上蒸干后,于105干燥3小时,置干燥器中冷却30分钟,迅速精密称定重量,计算浸出物的含量。方法5取鬼箭羽药材约2G,精密称定,置250ML的锥形瓶中,精密加入水100ML密塞,称定重量,静置1小时后,加热至沸腾,并保持微沸1小时。放冷后,取下锥形瓶,密塞,再称定重量,用水补足减失的重量,摇匀,用干燥滤器滤过。精密量取滤液25ML,置已干燥至恒重的蒸发皿中,在水浴上蒸干后,于105干燥3小时,置干燥器中冷却30分钟,迅速精密称定重量,计算浸出物的含量。表1提取方法筛选结果取样量G烘干后重量G皿重G浸出物含量方法1200816583946577397326方法24001096147960734184方法340175704229703744121方法420006952443951918262方法5200257245657241243220小结由结果可知方法1的效果优于其他方法并且结合相关文献,确定了鬼箭羽提取物的制法为鬼箭羽药材加10倍量60乙醇回流提取第一次加6倍量溶剂,回流2H,第二次加5倍量溶剂,回流2H合并二次提取液,滤过100目,提取液合并减压浓缩,真空干燥,粉碎过80目,即得。13水分测定照水分测定法中国药典2010年版一部附录H第一法,取鬼箭羽提取物2G,铺平于干燥至恒重的扁形称量瓶中,厚度不超过5MM,精密称定,打开瓶盖在100105干燥5小时,将瓶盖盖好,移至干燥器中,冷却30分钟,精密称定,再在上述温度干燥1小时,冷却,称重,至连续两次称重的差异不超过5MG为止。根据减失的重量,计算鬼箭羽提取物中含水量。含水量见表18陕西中医学院2013届硕士学位论文表2鬼箭羽提取物水分测定结果编号称量瓶重G被测物重G烘干后重G含水量G含水量11891209200179208608900529925621889379200362208255400718735931795059200362198842300699834941768752200027196203000674933751791080200459198450200703735161687054200665188062500709435414灰分测定141总灰分测定照灰分测定法中国药典2010年版一部附录K取鬼箭羽提取物3G,置炽灼之恒温重的坩埚中,称定重量,缓缓炽热,注意避免燃烧,至完全碳化时,逐渐升温至500600,使完全灰化并至恒重,根据残渣重量,计算鬼箭羽提取物中总灰分的含量。表3鬼箭羽提取物总灰分测定结果编号坩埚重被测物重灰化后重灰分重灰分131813093004073204033022714756233054203003313327711022291742334907083007883513303022595751434920153004963514379022364744530375633008603060215022652753632661383001703288924022786759142酸不溶性灰分测定法照灰分测定法中国药典2010年版一部附录K取上项所得的灰分,在坩埚中小心加入稀盐酸约10ML,用表面皿覆盖坩埚,置水浴上加热10分钟,表面皿用热水5ML冲洗,洗液并入坩埚中,用无灰滤纸滤过,坩埚内的残渣用水洗于滤纸上,并洗涤至洗液不显氯化物反应为止,滤渣连同滤纸移置同一坩埚中,干燥,炽灼至恒重。根据残渣重量,计算鬼箭羽提取物中酸不溶性灰分的含量。9鬼箭羽提取物质量标准及抗大鼠前列腺增生实验研究表4鬼箭羽提取物酸不溶性灰分测定结果编号坩埚重被测物重酸化后重灰分重灰分131813093004073181693000384013233054203003313305992000572019334907083007883490890000182006434920153004963492090000075002530375633008603037569000008063266138300170326642000028200915薄层鉴别151仪器与试药硅胶G薄层板自制硅胶G青岛胜海精细硅胶化工有限公司规格100MM100MM,型号G,厚度02025MM,批号20100916紫外灯上海精科实业有限公司,WFH210B紫外透射反射仪双槽层析缸规格100MM200MM对照品山奈酚批号110861201209中国药品生物制品检定所槲皮素批号100819905中国药品生物制品检定所其他试剂均为分析纯152方法与结果1521供试品溶液制备取鬼箭羽提取物1G加水20ML溶解超声10分钟,用石油醚6090萃取两次,每次20ML,弃去石油醚层,水层加稀盐酸20ML,水浴1H,取出迅速冷却,用乙酸乙酯萃取两次,每次20ML,弃去水液,合并乙酸乙酯液,蒸干,残渣加甲醇5ML溶解,过滤,作为供试品溶液。1522对照品溶液制备取山柰酚、槲皮素对照品,加甲醇制成每1ML各含05MG的溶液,作为对照品溶液。1523薄层层析10陕西中医学院2013届硕士学位论文方法1照薄层色谱法中国药典2010年版一部附录B试验,分别吸取供试品溶液5L,对照品溶液各2L,分别点于同一硅胶G薄层板上,以正丁醇水冰乙酸415展开剂,展开,取出,晾干,喷以3的三氯化铝乙醇溶液,置紫外光灯365NM下检视。结果见图1123451山柰酚2、3、4鬼箭羽提取物5槲皮素图1方法2照薄层色谱法中国药典2010年版一部附录B试验,分别吸取供试