【word】 mtg酶诱导大豆11s球蛋白透明冷致水凝胶的制备

MTG酶诱导大豆11S球蛋白透明冷致水凝胶的制备第62卷第12期2011年12月化工CIESCJOURNA1VOL_62NO12DECEMBER2011MTG酶诱导大豆LLS球蛋白透明冷致水凝胶的制备张烨,郭健,杨晓泉,尹寿伟,齐军茹华南理工大学轻工与食品学院,广东广州510640摘要水凝胶的制备逐步朝向安全无毒,高生物相容性的方向发展本工作着重探究一种大豆球蛋白透明冷致水凝胶的制备方法首先利用葡聚糖硫酸盐DEXTRANSULPHATE,DS与大豆LLS球蛋白GLYCININ,1IS在加热过程中形成多阴离子复合物,继而采用微生物转谷氨酰胺酶MICROBIALTRANSGLUTAMINASE,MTG酶在PH70,一定离子强度条件下,通过分子间E一7谷氨酰胺基赖氨酸共价键交联,制备了透明冷致水凝胶,并对其流变学,质构特性,持水性及微结构进行研究结果表明葡聚糖硫酸盐DS的添加赋予大豆11S球蛋白溶液较高的荷电量,在中性条件下,MTG酶具有交联此高荷电多阴离子复合物的能力,从而在较低温度下形成透明冷致水凝胶通过控制DS/11S比值及离子强度可影响该冷致凝胶的持水性,流变学特征及质构特性,获得凝胶强度与透明度同时提高的冷致蛋白基水凝胶扫描电镜观察表明,DS的添加能促进大豆11S球蛋白水凝胶形成规律,稳定的网络结构,使凝胶的持水性增加,解释了DS促进冷致凝胶强度增加的原因关键词大豆11S球蛋白葡聚糖硫酸盐透明凝胶转谷氨酰胺酶流变学DOI103969/JISSN04381157201112038中图分类号TQ44141文献标志码A文章编号04381157201112356009PREPARATIONOFMICROBIALTRANSGLUTAMINASEINDUCEDSOYBEANGLYCININTRANSPARENTCOLDSETHYDROGELSZHANGYE,GUOJIAN,YANGXIAOQUANYINSHOUWEI,QIJUNRURESEARCHCENTERFORFOODPROTEINENGINEERING,SOUTHCHINAUNIVERSITYOFTECHNOLOGY,GUANGZHOU510640,GUANGDONG,CHINAABSTRACTANOVELMETHODOFPREPARINGTRANSPARENTCOLDSETHYDROGELSBYSOYBEANGLYCININ11SWASDEVELOPEDADDITIONOFDEXTRANSULPHATEDSTOSOYBEANGLYCININ1LSINTHEFIRSTSTEPINDUCEDTHE11S/DSSOLUTIONTOFORMSOLUBLECOMPLEXESWITHHIGHERNEGATIVELYCHARGED,WHICHHADASIGNIFICANTEFFECTONIMPROVINGTRANSMITTANCEAFTERTHEPREHEATPROCESSCROSSLINKINGWITHMICROBIALTRANSGLUTAMINASEMTGASEWASUSEDINTHESECONDSTEP,ANDTRANSPARENTGELSWEREFORMEDBY一7GLUTAMY1LYSINEISOPEPTIDEBONDSATPH70WITHLOWIONICSTRENGTHTHERESULTINDICATEDTHATTRANSPARENCYMARKEDLYINCREASEDATDS/11SMASSRATIOOF0005ORMOREANDDECREASEDWHENNACLWASINVOLVEDANDMUCHBETTERHARDNESSWASACHIEVEDBYCOVALENTBONDCROSSLINKEDWITHMTGASESCANNINGELECTRONMICROSCOPYSHOWEDFINERANDMOREINTENSIVENETWORKSOFGELSWEREFORMEDBYADDITIONOFDSWATERHOLDINGCAPACITYWHCINCREASEDWHENMOREDSWASADDEDTHECOMBINEDEFFECTSOFDSCONCENTRATIONANDIONICSTRENGTHINFLUENCEDTHERHEOLOGICALPROPERTIES,ANDDETERMINEDTEXTUREPROPERTIESOFGELSTHEINHIBITORYEFFECTOFDS201I一041I收到初稿,2011一O6一O7收到修改稿联系人杨晓泉第一作者张烨1986,女,硕士研究生基金项目国家自然科学基金项目21076087RECEIVEDDATE20110411CORRESPONDINGAUTHORPROFYANGXIAOQUAN,FEXQYAN163CORNFOUNDATIONITEMSUPPORTEDBYTHENATIONALNATURALSCIENCEFOUNDATIONOFCHINA21076087第12期张烨等MTG酶诱导大豆11S球蛋白透明冷致水凝胶的制备WOULDBEASCRIBEDTOTHEFORMATIONOFFIRMERANDTRANSPARENTSOYBEANGLYCININGELSWITHBETTERCHARACTERISTICSKEYWORDSSOYBEANGLYCININDEXTRANSULPHATETRANSPARENTGELSMICROBIALTRANSGLUTAMINASERHEOLOGY引言水凝胶HYDROGELS是一类通过物理,化学或生物作用交联形成的在水介质中具有高溶胀性但自身不溶解的三维网络高分子材料_1水凝胶能够感知外界刺激,如温度,PH值,离子强度,电场,磁场等的微小变化,能够对刺激产生敏感的响应_2,并具有良好的生物相容性和可生物降解特性,近年来在药物输送载体,人造骨骼,记忆元件开关,生物酶的固定等方面得到广泛的应用_3目前制备水凝胶的材料主要包括生物多糖及人工合成的聚电解质等物理交联主要通过受热,冷冻,搅拌,高压,照射,超声波等物理作用以分子内部范德华力及静电相互作用获得水凝胶,但此类水凝胶力学性能较差L_4而化学交联则需要添加含有双功能基团的交联触发剂,常见方式有自由基诱导,醛交联L_6,活性酯交联7,硫醇化交联等,化学交联型水凝胶具有良好的力学性能和稳定性,但生物降解性和生物相容性欠佳近年来,不少研究者尝试利用微生物酶催化的方法以解决物理交联和化学交联水凝胶存在的不足大豆蛋白是一种优质的食物蛋白资源,具有很高的营养价值大豆蛋白不仅可通过加热形成凝胶,亦可先在低离子强度,远离等电点的条件下对低于凝胶临界浓度的蛋白质溶液进行热处理,使蛋白质分子部分去折叠,疏水基团和酶作用位点暴露,再添加盐离子,酸诱导剂或酶交联剂形成冷致凝胶_1盐离子,如CA可通过钙桥作用屏蔽蛋白质分子间电荷使之发生聚集形成凝胶_】葡萄糖酸内酯GLUCONO一一LACTONE,GDL是常见的酸诱导剂之一,其促使蛋白质分子逐步接近等电点,蛋白质表面斥力减少而逐步形成凝胶1引但热处理过程暴露的疏水基团,以及添加盐离子,酸诱导剂降低静电排斥使蛋白质聚集形成凝胶的冷致机制均不利于大豆球蛋白获得溶胀性良好,透明的凝胶结构N研究表明N引,大豆11S球蛋白能形成硬度较大的冷致凝胶,但其结构有序性较低,为浑浊凝胶蛋白质与多糖都是天然高分子材料,在溶液中共存时,当温度,PH值,离子强度等理化条件适宜,大分子上的部分基团可以相互连接,形成复合物,最终影响体系的性质_】葡聚糖硫酸盐DEXTRANSULPHATE,DS是一种高硫酸化阴离子多糖,TOLSTOGUZOV等_】就蛋白质/多糖相互作用热力学稳定性进行研究,发现硫酸化多糖与蛋白质的相容性较中性多糖,羧基化多糖更佳其中DS对大豆11S球蛋白,卵蛋白,明胶等蛋白质在PHP工时均具有良好相容性但制备冷致凝胶时,添加荷电多糖后稳定,可溶的蛋白质/多糖溶液体系处于高静电排斥环境中,若以降低静电排斥为主要机理的盐诱导和酸诱导方式_1制备冷致凝胶将获得弱化凝胶,降低凝胶的力学性能,不利于凝胶的后续应用微生物转谷氨酰胺酶MICROBIALTRANSGLUTAMINASE,MTG酶是无毒,安全,天然的生物交联剂,且不依赖于电荷相互作用,可以催化蛋白质分子间形成E一一谷氨酰胺基赖氨酸共价键,其强度是疏水键,氢键的2O倍【1,可诱导形成更稳定的凝胶网络结构SONG等阳和BRODERICK等L2利用MTG酶对大豆蛋白和明胶进行催化,形成了具有良好的生物相容性和缓释性能的蛋白基水凝胶,可用于医学领域中作为缓释药物载体和组织工程材料本研究试图添加葡聚糖硫酸盐DS于大豆11S球蛋白溶液中,以期增加混合体系荷电量,并通过热处理,使两者相互作用形成可溶性复合物,并暴露更多酶作用位点合理利用MTG酶交联形成分子间稳定共价键的特点,制备具有良好力学性能,透明,高荷电及高持水性的蛋白基冷致水凝胶本研究对进一步了解蛋白质/多糖在凝胶体系中的相互作用,创新开发外观透明的食品级环境友好输送载体材料具有重要的理论意义和应用价值1实验材料与方法11材料与设备低温脱脂豆粕购于山东禹王公司,杜马斯燃烧法测定其蛋白质含量为559230158葡聚化工第62卷糖硫酸盐DS购于SIGMA公司,相对分子质量为50010微生物转谷氨酰胺酶MTG酶购于日本味之素公司实验所用化学试剂如无特殊注明均为分析纯冷冻干燥机,DELTA124/LSC型,德国CHRIST公司高速冷冻离心机,CR22G型,日本日立公司可见一紫外分光光度计,2501PC型,日本岛津公司旋转流变仪,RS600型,德国HAKKE公司纳米粒度仪,NANOZSMPT2型,英国MALVERN公司质构分析仪,TAXT2I型,美国TA公司扫描电镜,TM3000型,日本日立公司12大豆LLS球蛋白的制备使用文献E221方法提取低温脱脂豆粕中的大豆L1S球蛋白低温脱脂豆粕按照质量/体积比115加人蒸馏水,用2TOOLLNAOH调节PH保持于75,并于室温下搅拌提取2H以使豆粕粉内蛋白质溶出碱溶后的提取液在冷冻离心机中以9000G,4的条件离心30MIN,弃去沉淀,上清液以量筒量取体积,以每1L滤液加入104G比例添加NAHSO,分散后,静置30RAIN,以2TOOLLHCI调节PH至64,在4下静置过夜后以6500G,4的条件离心20RAIN,得到沉淀为大豆11S球蛋白取出沉淀以质量/体积比110加入蒸馏水溶解,调节PH一75,慢速搅拌充分溶解后透析48H每8H更换一次蒸馏水,透析液冷冻干燥后得大豆LLS球蛋白粉末杜马斯燃烧法测定其蛋白质含量为957120132电泳条带及光密度显示其纯度为959/6以上13微生物转谷氨酰胺酶MTG酶纯化及酶活测定MTG酶使用前需要进一步纯化,称取25GMTG酶冰浴下溶于100ML10MMOLTRISHC1缓冲液PH60,搅拌2H后,4,9000G条件下离心20MIN除去不溶物加入NHSO使溶液饱和,除去杂蛋白沉淀后,于4C下使用上述缓冲液进行透析,分3次进行,每次L250体积比,最后用聚乙二醇浓缩透析完全的酶液MTG酶活性采用HYDROXAMALE分析法测量L_2引14LLS/DS热聚集体的制备将大豆11S球蛋白以100GL溶解于蒸馏水中,室温下搅拌2H,以01MOLLHC1和01MOLLNAOH调节PH至7O0001,于CC条件下水化过夜后,在8000G,4条件下离心20MIN,除去微量不溶物,获得大豆11S球蛋白储备液制备时将储备液调节至60GL_,将DS与大豆LLS球蛋白以不同质量比添加至60GL大豆11S球蛋白溶液中,均匀分散后,95条件下热处理30RAIN,冷却至室温后添加一定浓度NAC1溶液,均匀分散,制得11S/DS热聚集体溶液15MTG酶诱导LLS冷致凝胶的制备MTG酶活性单位与蛋白质质量以20UG比例添加到14节制备所得的聚集体溶液中,均匀分散,真空脱气后置于45C条件下孵育4H,制得凝胶16透光率测定采用紫外一可见分光光度计对透光率进行测定,将1_4节制备所得聚集体溶液稀释至浓度为1体积,置于1CM玻璃比色皿中,在540RLM处测定溶液透光率按照15节制备方法,45下于LCM玻璃比色皿中,孵育4H形成凝胶后在540NM处测定凝胶透光率17电位测定采用纳米粒度仪对电位进行测定,将I4节制备所得聚集体溶液稀释至浓度为1体积,样液小心移入样品池DTS1060,应避免样品溶液中产生气泡,在25下恒温测定不同DS/11S比值及离子强度下溶液体系的电位18扫描电镜观察采用扫描电镜对凝胶截面微结构进行测定,将15节制备的凝胶用滤纸擦去其表面水分,液氮淬冷后转入冷冻干燥机中除水,然后切取干燥后的凝胶,表面喷金,在15KV加速电压下,放大400倍观察凝胶表面形态19凝胶持水性测定记录离心管质量MO,向离心管中添加适量凝胶后称重得ML,在9000RRAIN条件下离心20MIN,用滤纸小心吸干离心管内及凝胶表面水分后称重得M2则凝胶持水性WHC为WHC一MMOXLOO1110凝胶的流变学性质测定采用旋转流变仪对凝胶流变学性质进行测定,使用平行板装置PP35TI,直径35MM,间隙设置为1MM,实验时将1ML脱气后样品置于平板之第12期张烨等MTG酶诱导大豆11S球蛋白透明冷致水凝胶的制备3563间,小心拭去过量样品并在样品裸露处添加薄层硅油以防止水分蒸发,采用控制应变模式,应变Y一05,频率叫1RADS平衡后恒温45测量4H记录此过程中样品随时间变化的弹性模量G及损耗模量G,随后使凝胶温度恒定于25,然后对样品进行频率扫描,记录弹性模量G及损耗模量G,随频率的变化最后对样品进行应力扫描,记录弹性模量G及损耗模量随应力的变化样品平行测试3次111凝胶的质构性质测定采用质构仪测定凝胶质构性质,样品直径1CM,凝胶厚度15CM,制备过程同15节采用2次压缩模式,压缩形变为样品高度的30,探头P/05,测试探头下行速度采用10MMS,探头进入凝胶过程检测速度10MMS_,测试后速度10MILLS,检测温度为25样品平行测试3次2实验结果与讨论21DS对大豆LLS球蛋白溶液热聚集行为的影响首先研究了不同DS/11S比值对溶液电位及透光率的影响如图1A所示,大豆11S球蛋白溶液的电位随DS/11S比值增加而提高,当DS/11S比值为0100时,溶液的电位可达到508MV,说明DS的添加可赋予大豆11S蛋白溶液体系较高的荷电量热处理后,随着DS/11S比值的增加,大豆11S球蛋白溶液的透明度以540NM时透光率表示明显较未添加DS的溶液呈上升趋势图1B,当DS/11S比值超过0050时,溶液的透光率与加热前相当结合11S/DS溶液体系电位的变化,可认为透光率的增加与溶液体系的荷电量相关VARDHANABHUTI等研究了DS在中性条件下对一乳球蛋白热稳定性的影响,发现DS主要是通过与蛋白质结合为多阴离子复合物,通过复合物间的静电排斥作用阻止蛋白质不可溶聚集体的生成因此,在溶液体系中加入DS,其通过加热与大豆11S球蛋白带正电荷区域以静电相互作用结合形成复合物,分子间的静电斥力抑制了热诱导过程中大豆11S球蛋白不可溶聚集体的形成,从而提高了大豆11S球蛋白溶液的透光率为了进一步阐述DS与大豆11S球蛋白相互作用的机制,本文研究了离子强度对11S/DS溶液体系透光率及电位的影响如图2A所示,NAC1毫,薯董DS/1ISMASSRATIOAPOTENTIAL00,0050010001300200033005001OODS/LLSMASSRATIOBTRANSMITTANCEAT540NM图1DS/LLS比值对10GL大豆LLS球蛋白溶液透光率及电位的影响FIG1EFFECTSOFDS/11SMASSRATIOONTRANSMITTANCEANDPOTENTIALOF10GL一SOYBEANGLYCININSOLUTION对11S/DS溶液体系具有静电屏蔽作用,随着NAC1的添加,体系电位逐步下降DS/11S比值为0033的溶液中,当NAC1浓度由5MMOL增加至50MMOL时,加热后体系的_电位由一367MV下降至一15MV,此时,溶液的透光率由872下降至558再次印证DS与大豆11S球蛋白形成的复合物之间主要通过静电排斥作用获得澄清的11S/DS溶液体系22MTG酶诱导LLS冷致凝胶形貌学表征在食品加工过程中,一般采用葡萄糖酸内酯GLUCONO一一LACTONE,GDL进行酸化或CA抖通过钙桥作用,屏蔽蛋白质表面电荷,以疏水相互作用形成凝胶高荷电的天然高分子溶液由于体系存在强烈的静电排斥作用,很难通过上述方法形成稳定的凝胶大豆蛋白是MTG酶的良好底物之一,为如M0A孽3564化工第62卷名暑考NACL/MMOLAPOTENTIALNAC1/MMOLBTRANSMITTANCEAT540NM图2离子强度对10GL大豆11S球蛋白溶液透光率及电位的影响FIG2EFFECTSOFIONICSTRENGTHONTRANSMITTANCEANDPOTENTIALOF10GLSOYBEANGLYCININSOLUTIONMTG酶通过分子间一7谷氨酰胺基赖氨酸共价键,其作用效果不受体系荷电量的影响本文试图利用MTG酶对高荷电的11S/DS热聚集体进行交联,以期制备高荷电,高力学强度及具有良好持水性的透明凝胶图3显示MTG酶诱导的11S冷致凝胶外观形态可以看出,在不添加NAC1条件下,未添加DS形成的弱凝胶沿着瓶壁滑下,并呈浑浊状随着DS/11S比值增加,凝胶强度逐步提高图3A,说明MTG酶具有交联高荷电溶液形成稳定凝胶的能力为进一步了解DS/11S比值及离子强度对凝胶透明度的影响,按照15节方法制备凝胶如图3B所示依据ISHIMOTO等2朝关于蛋白透明凝胶定义划分图中凝胶区域凝胶透光率测定结果表明,A,B类凝胶透光率仅为06左右,而通403O20UZLOOO00050O10002000330100DS/11SMASSRATIOA1MTGASECROSSLINKED60GL1LLSCOLDSETGELSWITHDIFFERENTDS/I1SMASSRATIO0000500L00L330020003300500LOODS/LLSMASSRATIOB1APPEARANCEOFMTGASECROSSLINKED60GUL1SCOLDSETGELSWITHDIFFERENTDS/L1SMASSRATIOANDIONICSTRENGTH图3DS/11S比值,离子强度对MTG酶诱导60GL大豆LLS球蛋白冷致凝胶外观形态的影响FIG3EFFECTSOFDS/11SMASSRATIOANDIONICSTRENGTHONAPPEARANCEOFMTGASECROSSLINKED6OGL11SCOLDSETGELSATURBIDWEAKGELST1BTURBIDGELST1CTRANSLUCENTGELS1T1ODTRANSPARENTGELST10过提高DS/11S比值,降低NAC1浓度则能逐步获得透光率10以上的透明凝胶D类当不添加NAC1且DS/11S比值为0100时,凝胶透光率高达67402,由此表明,DS/11S比值及NAC1浓度是控制MTG酶诱导11S冷致凝胶透明度的重要因素扫描电镜SEM是观察凝胶表面微观结构的常用表征手段之一以SEM观察MTG酶诱导11S冷致凝胶断面结构图4,结果显示,以MTG酶交联大豆11S球蛋白所形成的凝胶呈现无序的片层叠加状结构随DS/11S比值的增加凝胶BFREQUENCYSWEEPCSTRAINSWEEP图5DS/LLS比值对MTG酶诱导60GL11S冷致凝胶流变性质的影响FIG5EFFECTSOFDS/11SMASSRATIOSONRHEOLOGICALPROPERTIESOFMTGASEINDUCED60GL一11SCOLDSETGELSFILLEDSYMBOLSG,OPENSYMB0LSG,DS/11SMASSRATIO0O00005000500100010002000200033口003301000100值小于0020时,添加DS有利于形成富有弹性的凝胶,NA的加入能提高凝胶弹性图6C继续增加DS反而使凝胶弹性减小而凝胶内聚性增加DS/LLS比值达0033或以上时,凝胶内聚性更为突出,而NA对弹性的影响效果下降MATSUDOMI等口研究葡聚糖硫酸盐与鸡蛋白蛋白作用制备热致凝胶,扫描电镜观察发现DS添加使得凝胶网络致密是凝胶强度增强的重要原因TURGEON等2阳研究一卡拉胶/乳清蛋白冷致凝胶,发现添加1的C一卡拉胶能改善凝胶质构性质,使凝胶硬度和抗形变量提高,并认为多糖良好的持水性使两相更好地兼容CAPRON等2认为,持水性好能够加快蛋白质网络的形成并降低凝胶形成的蛋白质临界浓度,与本文质构及22节结果一致由此推断,MTG酶诱导的11S冷致凝胶,其力学性能可通过对DS/LLS比值及NAC1浓度的设计加以控制,以获得应用所需的质构特性3结论1本研究发现了一种使用MTG酶诱导高荷电球蛋白溶液制备透明冷致水凝胶的方法该方法有机结合了蛋白质/多糖高荷电体系透明,稳定的优势,以MTG酶诱导形成分子间稳定共价键的交联方式成功制备高荷电,高持水性同时机械强度良好的透明冷致水凝胶2随DS/LLS比值的增加,大豆L1S球蛋白溶液体系电势增高,经热处理后,11S/DS溶液体系主要通过静电相互作用,形成稳定,可溶,透明的复合物3中性条件下,DS/11S比值越高,越有利于获得高荷电量,网络结构细密清晰,力学性能较高且持水能力较佳的水凝胶大豆蛋白是亲水的天然高分子材料,能依靠其侧链上的氨基,羧基和羟基等亲水性基团和氢键作用使大豆蛋白吸附水分MTG酶诱导大豆LLS球蛋白透明冷致水凝胶为高荷电蛋白基水凝胶,在网络间静电斥力作用下,蛋白质网络弹性伸展,水分子或能更容易进入蛋白网络并与亲水基团及氢键相互作用,并可通过DS/11S比值变化对该水凝胶溶胀能力,PH及离子强度刺激敏感度进行控制该蛋白基水凝胶安全,无毒,可控,具有作为输送体系材料的潜质,有望应用于生物活性物质的保护,输送及控制一释放体系,作者将作进一步研究鲫跚姗伽枷姗姗瑚枷卯第12期张烨等MTG酶诱导大豆IIS球蛋白透明冷致水凝胶的制备3567堑呈DS/LLSMASSRATIOAHARDNESSDS/LLSMASSRATIOCSPRINGINESS羞喜童DS/LLSMASSRATIOBFRACTURABILITYDS/11SMASSRATIODCOHESIVENESS图6DS/LLS比值及离子强度对MTG酶诱导60GL11S冷致凝胶质构性质的影响FIG6COMBINEDEFFECTSOFDS/LLSMASSRATIOANDIONICSTRENGTHONTEXTUREPROPERTIESOF60GL一11SCOLDSETGELSREFERENCESE13233456CHENSC,WUYC,MIFL,LINYH,YULC,SUNGHWANOVELPHSENSITIVEHYDROGELCOMPOSEDOFN,OCARBOXYMETHYLCHITOSANANDALGINATECROSSLINKEDBYGENIPINFORPROTEINDRUGDELIVERYJJOURNALOFCONTROLLEDRELEASE,2004,96285300RICHTEA,PASCHEWG,KLATTS,LIENIGJ,ARNDTKF,ADLERHJPREVIEWONHYDROGELBASEDPHSENSORSANDMICROSENSORSJSENSORS,2008,8561581KNUTHKHYDROGELCONTROLLEDRELEASEDRUGDELIVERYSYSTEMJFOREIGNMEDICALSCIENCESOFPHARMACY,1994,215297300WANGPIN王品,CUIYINGDE崔英德,YINGUOQIANG尹国强,HEMING何明,ZHANGBUNING张步宁RESEARCHANDAPPLICATIONOFPROTEINBASEDHYDROGELSJCHEMICALINDUSTRYANDENGINEERINGPROGRESS化工进展,2009281221692179NGUYENKT,WESTJLPHOTOPOLYMERIZABLEHYDROGELSFORTISSUEENGINEERINGAPPLICATIONSJBIOMATERIALS,2002,232243074314HWANGDC,DAMODARANSCHEMICALMODIFICATIONSTRATEGIESFORSYNTHESISOFPROTEINBASEDHYDROGELJAGRICFOOD7E891O111Z13CHEM,1996,443751758BRANDLF,HENKEM,ROTHSCHENKS,GSCHWINDR,BREUNIGM,BLUNKT,TESSMARJ,GOEPFERICHAPOLYETHYLENEGLYCO1BASEDHYDROGELSFORINTRAOCCULARAPPLICATIONSFJADVANCEDENGINEERINGMATERIALS,2007,91211411149LUTOLFMPHUBBELLJASYNTHETICBIOMATERIALSASINSTRUCTIVEEXTRACELLULARMICROENVIRONMENTSFORMORPHOGENESISINTISSUEENGINEERINGJNATUREBIOTECHNOLOGY,2005,2314755FUKUSHIMADRECENTPROGRESSOFSOYBEANPROTEINFOODSCHEMISTRY,TECHNOLOGY,ANDNUTRITIONJFOODREVIEWSINTERNATIONAL,1991,73323351IKEDAS,FOEGEDINGEA,HAGIWARATRHEOLOGIEALSTUDYONTHEFRACTALNATUREOFTHEPROTEINGELSTRUCTUREJLANGMUIR,1999,152585848589BRYANTCMMCCLEMENTSDJMOLECULARBASISOFPROTEINFUNCTIONALITYWITHSPECIALCONSIDERATIONOFCOLDSETGELSDERIVEDFROMHEATDENATUREDWHEYJTRENDSINFOODSCIENCETECHNOLOGY,1998,9143151TAYSK,XUGQ,PERERC0AGGREGATIONPROFILEOFLLS,7SAND2SCOAGULATEDWITHGDLJFOODCHEMISTRY,2005,91457462MORRISVJ,MACKIEAR,WILDEPJ,KIRBYAR,MILLSEC0岛LSI100【III叠们3568化工第62卷1,14151,16317,GUNNINGAPATOMICFORCEMICROSCOPYASATOOLFORINTERPRETINGTHERHEOLOGYOFFOODBIOPOLYMERSATMOLECULARLEVELJLEBENSMITTEWISSENSCHAFTANDTECHNOLOGIES,2001,34310LUX,LUZH,YINLJ,CHENGYQ,LILTEFFECTOFPREHEATINGTEMPERATUREANDCALCIUMIONS0NTHEPROPERTIESOFCOLDSETSOYBEANPROTEINGELJFOODRESEARCHIPR口0口Z,2010,4316731683KOHYAMAK,NISHINARIKRHEOLOGICALSTUDIESONTHEGELATIONPROCESSOFSOYBEAN7SAND11SPROTEINSINTHEPRESENCEOFGLUCONO一8一LACTONEJAGRICFOODCHEM,1993,41814WUPEIXI吴培熙,ZHANGLIUCHENG张留城POLYMERBLENDINGMODIFICATION聚合物共混改性MBEIJINGCHINALIGHTINDUSTRYPRESS,1998208222GRINBERGVY,TOLSTOGUZOVVBTHERMODYNAMICINCOMPATIBLEOFPROTEINSANDPOLYSACCHARIDESINSOLUTIONSJFOODHYDROCOLLOIDS,L997,112145一L58MALTAISA,REMONDETTOGE,GONZALEZR,SUBIRADEMFORMATIONOFSOYPROTEINISOLATECOLDSETGELSPROTEINANDSALTEFFECTSEJJOURNALOFFOODSCIENCE,2005,7016773JOSEPHDTEMPERATUREANDAFFECTTRA