NF-κB信号通路

1、nf-b信号通路,主要内容,背景介绍 ikk复合物的上游信号 ib激酶的结构和激活方式 ib蛋白的作用 nf-b的转录调节,一.背景介绍,1. nf-b信号通路 2. nf-b家族 3. ib蛋白家族 4. ib激酶复合物 nf-b信号通路激活对肿瘤发生 发展的影响,背景1,nf-b信号通路,最基本的nf-b信号通路，包括受体和受体近端信号衔接蛋白， ib激酶复合物， ib蛋白和nf-b二聚体。 当细胞受到各种胞内外刺激后，ib激酶被激活，从而导致ib蛋白磷酸化，泛素化，然后ib蛋白被降解， nf-b二聚体得到释放。然后nf-b二聚体通过各种翻译后的修饰作用而被进一步激活，并转移到细胞核中。在

2、细胞核里，它与目的基因结合，以促进目的基因的转录,nf-b经典和非经典通路,nf-b的 经典信号通路和非经典信号通路的主要区别就在于： 在nf-b的 经典信号通路中， ib蛋白的降解使nf-b二聚体得到释放。 而在nf-b非经典信号通路中，则是通过p100到p52的加工处理，使信号通路激活,nf-b家族,背景2,nf-b家族由p50、p52、p65、c-rel和relb五个成员组成。它们分别由nfkb1, nfkb2, rela, rel和relb基因进行编码。 它们都具有一个n端rel同源结构域（rhd），负责其与dna结合以及二聚化。 另外,在p65、c-rel和relb中，存在着转录激活

3、区域tad，对基因表达起正向调节的作用。 p50和p52不存在转录激活区域，它们的同型二聚体可以抑制转录,nf-b二聚体的存在方式,nf-b二聚体与ib蛋白结合 nf-b二聚体与dna结合 nf-b二聚体结构 氨基末端为免疫球蛋白相似区域，对某一种形式的b位点具有选择性。 c-末端疏水区域提供nf-b各亚基之间的连接,一般， nf-b是以二聚体的形式存在的，而它的二聚体又有两种存在方式,背景3,ib蛋白家族,ib蛋白家族包括七个成员：ib、ib、 ib 、ib、bcl-3、p100和p105 。 作用：在细胞质中与nf-b二聚体结合，并对信号应答具有重要作用。 ib蛋白的结构特点：存在锚蛋白重

4、复区域（即多个紧密相连的钩状重复序列，每个重复序列含有33个氨基酸,背景4,ib激酶复合物,ikk/ikk1 (chuk) ikk/ikk2(ikbkb) 调节亚基 nemo 在特定的nf-b 信号通路中，ikk和ikk是选择性需求的,背景5,nf-b信号通路激活 对肿瘤发生发展的影响,1. nf-b信号通路激活对肿瘤发生发展的促进作用。 nf-b 所致的gadd45和（生长抑制dna损伤基因）联合表达下调是很多肿瘤细胞逃逸凋亡机制的关键步骤。 nf-b 还可上调cyclind1（ccndi） 等基因的表达, 促进细胞生长。 nf-b 激活对肿瘤的转移具有明显的促进作用。 2.nf- b信号通

5、路激活对肿瘤发生发展的抑制作用。 rela(p65) 亚基在p53- 介导的凋亡过程中具有重要作用,很多胞外刺激信号都可以引起nf-b 信号通路的激活,如：促炎症细胞因子tnf-、白介素il-1 ,细菌脂多糖(lps) ,t 细胞及b 细胞有丝分裂原,病毒双链rna 以及各种物理和化学压力等。虽然这些胞外刺激所产生的胞内早期信号途径各不相同，但一般认为,大多数此类胞外刺激起始的信号传递反应将最终激活ikk复合物。在这个传递过程中，衔接蛋白起着重要的作用,二. ikk复合物的上游信号,在很多nf-b信号通路中，许多的信号中间物都是共有的，特别是ikk复合物的上游信号。不同的信号通路可利用一些共有

6、的信号元件激活和抑制通路。 trafstnf受体相关因子 ikk复合物的上游信号衔接蛋白 rips受体作用蛋白 tak1tgf-激活性激酶1 ikk复合物的激酶 niknf-b诱导激酶,1. trafstnf受体相关因子,tnf受体相关因子trafs家族成员是一大类胞内接头蛋白，能直接或间接与多种tnf 和il-1/toll-like 受体家族成员结合。介导多种下游信号通路的信号传导 ，其中包括nf-b 信号通路。从而影响细胞的生存、增殖、分化和死亡，并参与多个生物学过程的调控。 在几乎所用的nf-b信号通路中， trafs都是关键的信号中间 物。 traf蛋白家族： traf蛋白家族一共有7

7、个成员，分别是traf1、 traf2、 traf3、traf4、 traf5、 traf6、 traf7,traf蛋白质在结构上具有很高的同源性，同源性一般大于30%，其特征性的结构是所有成员在羧基端都有一个c-末端traf结构域，即包括一个卷曲螺旋结构，介导同型和异型蛋白之间的相互作用。 另外，traf2-7的n-末端存在一个ring指结构，其可以作为e3泛素连接酶起作用，即将泛素转移到目的蛋白上。ring 指结构后还有5 到7 个锌指结构域,traf蛋白的结构,trafs的功能,1,通过tradd，traf2和 tnf-的受体tnfr1结合，向下传递信号，激活ikk。在此过程中，其rin

8、g指区域作为e3连接酶是必须的。但是其具体作用机制还需要深入研究。 在tnfr1信号通路中，单一的敲除traf2或traf5， nf-b信号通路的激活仍会出现。但是双敲除traf2和traf5，则会造成 nf-b信号通路中，ikk复合物的激活出现缺陷。因此，在tnfr1信号通路中，需要traf2和traf5的共同作用,在toll-likeil-1信号通路中， traf6可与受体复合物发生作用，激活ikk。但是， traf6的e3连接酶作用机制也是需要进一步证明的。 因此，在nf-b信号通路中， traf2、traf5和traf6在激活ikk复合物方面起着重要的作用,2,另外， traf蛋白家族

9、成员中， traf3也是较广泛的研究成员。 traf3是既可以介导nf-b经典信号通路，也可以介导非经典信号通路。在经典信号通路中， 其可以与受体直接作用激活ikk复合物。而在非经典信号通路中， traf3通过nik（nf-b诱导激酶）激活ikk，从而激活信号通路。 在一些情况下， traf3可以诱导nik的泛素化和降解，抑制信号通路的激活。但是这时候，其他 traf家族成员可以介导traf3的降解，结果造成nik的积累和活化，促进非经典信号通路正向激活。 因此，不管在经典还是非经典信号通路中， traf蛋白在诱导ikk激活方面发挥着很重要的作用,2. rips受体作用蛋白,rips是经典nf

10、-b信号途径中的关键的衔接蛋白。 rips既可以通过蛋白结合区域直接作用于信号通路的上游，也可以通过与nemo结合激活ikk复合物。并且，在大多数的traf依赖型信号通路中， rips都被牵涉其中。 rip蛋白家族一共有7个成员，分别为rip1-7。 rip蛋白的结构特征是：都具有保守的丝氨酸/苏氨酸激酶区域,rip1,rip1具有一个死亡结构域，可以介导其他衔接蛋白和受体的死亡结构域之间的相互作用。 rip1不仅可以招募ikk复合物，其更重要的作用是激活ikk复合物。 rip1激酶区域对ikk的激活并不是必需的，一般的作用是集合一个信号复合物元件，通过nemo的寡聚化，和ikk的自磷酸化，诱

11、导ikk复合物的激活。 rip1只出现在nf-b经典信号通路中，而对于cd40或ltr介导的非经典信号通路中是不需要rip1的,rip2,rip2包括一个c-末端半胱天冬酶活性和招募区域（card），可介导受体和衔接蛋白之间的相互作用。这个card区域，也使rip2在一个特殊的nf-b信号通路中起着重要的作用，即抗原受体信号通路。在抗原受体信号通路中，有着显著的cards作用，由于，bcl10和card11属于card包含蛋白，在抗原受体信号通路中对于激活ikk有着决定性的作用。这个信号通路是需要rip2。同样，细胞内结构识别受体nod-lrr家族成员也属于card包含蛋白，也需要rip2来激

12、活ikk。 与rip1相似， rip2的激酶区域对ikk的激活也不是必需的， 在nf-b经典信号通路中， rip2与tak1和trafs作用，直接诱导nemo的泛素化，和下游信号通路激活,rip3 在nf-b信号通路中， rip3由于和rip1具有同型作用基序 （rhim），所以与rip1具有同等功能。但是在信号通路中， rip3的重要性远远比不上rip1，因为当rip3缺失时，大多数的nf-b信号通路是正常的。在特殊情况下， rip3可能影响和阻碍rip1诱导的nf-b信号通路的激活。 rip蛋白总结： rip1（作为一个死亡结构域和nemo的衔接蛋白）与rip2（作为一个card到nemo

13、的衔接蛋白），在一些nf-b经典信号通路中扮演着类似的角色。 通过与nemo结合，rip蛋白招募ikk复合物。通过nemo的寡聚化或泛素化依赖机制直接介导ikk复合物的激活,3. tak1/niktgf-激活性激酶1/ nf-b诱导激酶,tak1和nik作为ikk激酶出现在nf-b信号通路中。其中，在经典信号通路中， tak1被涉及。而在非经典信号通路中， nik有诱导ikk激活和p100磷酸化的作用。 tak1 tak1一般在rip蛋白激活ikk的信号通路中（例如：抗原受体和nod-lrr信号通路），都要被涉及。但是其作用机制并不明确。主要表现在： 在不同的经典信号通路中， tak1的基因被

14、敲除， nf-b信号通路的激活会出现不同程度的缺陷。 tak1是否作为一个ikk-k直接或通过一个媒介激酶（如：mekk3）介导ikk的激活，这是不清楚的。 通过许多相同的信号中间物，ltr介导的ikk的激活是不需要tak1的。 因此，对于tak1的作用机制我们还需要更深入的研究,nik,在rip蛋白缺失的情况下， nik主要负责激活nf-b的非经典信号通路。 nik可直接磷酸化，激活ikk。 nik受到结合的traf蛋白，ciap1和ciap2（e3连接酶）的调节，当traf蛋白，ciap1和ciap2发生降解时，可导致nik的积累和ikk的激活。 小结 在nf-b非经典信号通路中，traf

15、和nik可以不通过nemo，充分激活ikk，从而使信号通路激活。 在nf-b经典信号通路中， traf和rip蛋白，和tak1都是必需的,对于nf-b信号通路的激活，ikk是非常重要的。因此，了解ikk活性的调节已经成为掌握nf-b信号通路激活的核心。 1. ikk复合物 2. ikk的激活 3. ikk的酶作用底物,三.ib激酶的结构和激活方式,1.ikk复合物,ikk（又称ikk1），85kd ikk（又称ikk2），87kd nemo（又称ikk），48kd,具有较高的序列同源性和相似的结构。 在n-末端均含有蛋白激酶区,靠近中间区域的亮氨酸拉链区(lz) 及螺旋-环-螺旋(hlh,包括

16、大段的卷曲螺旋(coiled-coil) 及靠近c-末端的亮氨酸拉链区,虽然一些实验证明在ikk复合物中，可能会含有一些其他成分，,如ikk关联蛋白1( ikkap1) 、促分裂原活化蛋白激酶1 (mekk1) 、nf-b 诱导激酶(nik) 及调节蛋白ikap 等，但是需要进一步的证明,ikk复合物的组成,ikk复合物各组分的作用,ikk：在经典的nf-b信号途径中， ikk并不是必需的。 它在nf-b 受体活化因子( receptoractivator of nf- b ,rank) 引起nf-b 活化转导途径及nf-b 活化 变更途径中是必需的。ikk的缺失可导致许多发育 上的缺陷。 i

17、kk：ikk是促炎症反应因子刺激诱导nf-b 的激活的主 要激酶。ikk缺陷的细胞对tnf和il-1 等刺激不会 引起nf-b 的活化。ikk的活化是避免因局部缺血或 充血引起严重炎症反应而导致多组织功能丧失所必需的。 nemo：在经典的nf-b信号通路中， nemo是必需的。 nemo 可能通过与ikk和ikk的直接作用而介导ikk复合物的 组装, 并且还能促进ib 蛋白与ikk激酶复合物的相互作 用,ikk复合物的组装,ikk、 ikk和 nemo共同组成了ikk复合物(nemo2ikk1ikk1)2。 ikk和 ikk可通过亮氨酸拉链区域形成二聚体，即ikk：ikk异型二聚体。其实ikk

18、和 ikk也具有其同型二聚体，但是在正常情况下很难存在。 通过ikkc-末端的nbd区域，ikk和 ikk可与nemo结合，结合的部位是第一个卷曲螺旋结构的47-80残基。其中， ikk与nemo结合的亲和力要高于ikk,虽然， ikk复合物的核心构成只包括ikk/ ikk/ nemo，但是其中还有两个很重要的特征需要我们注意： 激酶伴侣蛋白hsp-90/cdc37。研究证明，伴侣蛋白hsp-90是与ikk复合物结合的，同时伴侣蛋白hsp-90的抑制物会抑制ikk复合物的激活，因此，可以说ikk复合物的激活是需要hsp-90的。由于hsp-90还与nf-b信号通路中的其他激酶结合，cdc37已

19、经渐渐取代了hsp-90在ikk复合物的激活中发挥作用。 elks（转录激活因子ets样蛋白）。其作为一个ikk复合物的调节成分。但是其对ikk复合物的重要性还需要进一步证明,2.ikk的激活,ikk复合物的激活首先是需要ikk亚基的t环丝氨酸的磷酸化。但是目前这种磷酸化的机制并不明确。其中，ikk的磷酸化位点是丝氨酸177和181， ikk的磷酸化位点是丝氨酸176和180。另外，激活的t环丝氨酸如果突变成谷氨酸则会产生ikk激活，而突变成丙氨酸则会取消信号应答。 ikk复合物的激活中一个普遍的元素是：对traf家族成员的需要和诱导traf的寡聚化从而向下传递信号。这说明信号复合物的集合对于

20、ikk的激活的重要性。 nemo的c-末端区域介导ikk的激活。被rip1介导的nemo的可诱导的寡聚化被认为可以激活ikk，并且这一点已经得到了证明。 但是，根据以上的发现，我们并不能得到ikk激活的具体机制,ikk激活需要的条件,最近的一些发现为我们在研究ikk的激活的机制上提供了线索：,在 酵母中，野生型的ikk表达的激酶活性被nemo的共表达所提高，而那些t环被突变成谷氨酸的ikk，其活性也很高，但是其活性不会随着nemo 的共表达发生变化,说明：ikk的激酶活性被nemo所提高，是通过ikk的t环磷酸化促进而发生的,研究发现，反式自磷酸化作为nemo和ikk的一种本能的高次结构构成结

21、果而发生，其展开的分子量近似激活的ikk,说明：反式自磷酸化可能是ikk激活的主要机制,ikk的nbd区域的丝氨酸残基的磷酸化，可以抑制ikk的活性，和阻止通过与nemo的共表达而发挥作用的ikk活性的增加,说明：nbd/nemo之间的作用对于nemo介导的ikk激活很重要,ikk激活机制的探索,因此，我们可以知道在ikk激活中，反式自磷酸化是主要的作用机制,ikk激活途径可能是一个反馈调节的重要机制。接受刺激后，nemo与ikk的结合区域被磷酸化，磷酸化位点为丝氨酸68。这个磷酸化可诱导nemo二聚体的分离，和阻碍ikk与nemo之间的相互作用，从而终止信号通路。这种构象的变化可被伴侣分子h

22、sp-90或ikk复合物的磷酸化酶所识别，通过hsp-90或者nemo在丝氨酸68的脱磷酸化的作用，可以使ikk复合物恢复活性。 根据以上的研究发现，ikk的激活模型被提出。（见下页,ikk激活的反馈调节,ikk的激活模型,1.在静息状态下，(nemo2ikk1ikk1)复合物中，ikks通过与nemo相互作用而被抑制。 2.在有刺激物的情况下，nemo结合一个rip蛋白（nemo泛素化），使ikk的蛋白激酶区域暴露，诱导t环丝氨酸残基的反式自磷酸化或者由ikk-k磷酸化t环丝氨酸残基。 3.被激活的ikk可磷酸化下游的酶作用底物（如ib s），从而激活nf-b信号通路。 被激活的ikk还可磷

23、酸化ikk的丝氨酸740和nemo的丝氨酸68,使得nemo二聚体与ikk的分离,阻止激酶的反复激活。 4. cdc37/hsp-90（伴侣分子）和 pp2a/pp2c（磷酸化酶）可以介导ikk复合物的重组,小结,在nf-b信号通路中，寡聚化的出现是一个共有的主题。 traf蛋白的寡聚化使其可以顺利向nf-b信号通路下游传递信号。 rip蛋白的寡聚化在nf-b经典信号通路中是必需的。其与nemo相互作用诱导ikk复合物的积聚。 nemo的寡聚化/泛素化在激活nf-b信号通路中也是很重要的。 同时，nemo的泛素化在dna损伤反应中也很重要,一个复杂的nf-b信号通路中，对于ikk的激活，是需要

24、上游信号元件的寡聚化和泛素化。 但是，在非经典信号通路中，rip介导的nemo的寡聚化不会发生，ikk是通过niks直接介导t环磷酸化所激活的。ikk对于nemo的低亲和力也促使nik进入ikk的t环发挥作用，而不是ikk。 ikk的激活是一个短暂事件，其从属于反馈调节机制。 多数的反馈调节机制作用于上游信号元件，其中作用最显著的是脱泛素化酶a20和cyld。 ikk的c-末端nbd的磷酸化也是一种重要的反馈调节环的元件。 蛋白磷酸酶2a（pp2a），也可以通过转移t环磷酸化来阻碍ikk的激活,3.ikk的酶作用底物,自由的ib家族成员： ikk、ikk可磷酸化ib丝氨酸32、36和 ib的丝

25、氨酸19、23。其中，作为ikk的酶作用底物， ib要优于ib。大多数情况下，ib降解速度比ib慢。 ikk可以磷酸化p100的丝氨酸672。 与nf-b结合的ib： 是一种更好的ikk的酶作用底物,ib蛋白的主要作用是掩盖nf-b的核定位信号，阻止其入核，及其与dna的结合，使nf-b以非活化形式存在于细胞的胞质中 。因此，对于研究nf-b信号通路来说， ib蛋白的研究很重要。 典型的ib蛋白ib, ib和ib 前体ib蛋白p100 和 p105 非典型的ib蛋白ib 和 bcl-3,四.ib蛋白的作用,ib ib ib,1.典型的ib蛋白,三种经典的ib蛋白，它们有其各自唯一的功能特征。另

26、外，在应激反应引起的经典nf-b信号通路中，这三种类型的ib蛋白都是必需的,在三种经典的ib蛋白中，ib是nf-b活化过程中最强的负反馈因子,保证nf-b 活化的迅速发生和关闭;而ib和ib则能缓冲系统活化的波动趋势从而使nf-b 保持一个相对较长的响应时间。 ib、ib专一性抑制含有rela和c-rel的二聚体,ib蛋白家族最广泛的研究成员：ib,ib是ib蛋白家族最经典的成员。 在nf-b信号通路中， ib可以与最普遍的nf-b二聚体p65：p50结合，防止其入核及与dna结合。因此，在ib缺失的情况下，已激活的nf-b信号通路的终止是显著推迟的。 ib与p65:p50异源二聚体结合后，只

27、掩饰p65的核定位序列（nls），而p50的nls则暴露。p50的nls与ib的核导出序列（nes）结合，使ib与nf-b二聚体的复合物在细胞质和细胞核之 间穿梭运动。 当经典信号通路激活的时候， ib迅速降解，释放出多个nf-b二聚体。 在非经典信号通路中， ib一般不是必需的,ib和ib,ib的表达最初是在造血细胞中发现的，与ib相比，其降解和再合成具有明显的延迟现象。它的降解依赖于ikk复合物，它的表达受到nf-b的调节。 ib的功能目前还没有确定，它的缺失并不能显著影响nf-b信号通路。最近的研究表明， ib可能在细胞核中起调节nf-b二聚体与b位点结合的作用。但是这一结果需要进一步验

28、证,2.前体ib蛋白p100 和 p105,p105 p105作为一个ib蛋白，可以被已激活的ikk复合物诱导降解。 p105通过20s蛋白酶体加工处理后形成p50，在此过程中，发生在翻译阶段。不需要scf -trcp。 另外， p105基因3端也可以编码一个独立的调节因子ib,scf复合物（ skp1、cdc53/cullin和f-box蛋白质）是泛素-蛋白酶系e3中的组成之一。-trcp（-transducin repeat-containing protein，转导重复相容蛋白）作为f盒蛋白的一员，特异识别磷酸化的ib和-catenin，介导后者经泛素-蛋白酶复合体途径降解,p100,p

29、100主要出现在非经典通路中，在其加工过程中需要ikk和 scf -trcp，最后被降解成p52 。因此，p100加工处理成p52的过程是一个包括磷酸化和泛素化的受调控的过程。 p100是relb的唯一调节因子，因为包含relb的nf-b二聚体只结合p100。 p100也可以作为传统的ib蛋白，调节p65包含的ikk下游复合物的活性。同时，其也可以限制p65的nf-b活性，起反馈调节的作用。 因此， p100可以对nf-b的活性有正向和反向的调节,因此， p100对于nf-b信号通路的调节是很重要的。 p100具有选择性调节特殊的nf-b复合物的功能。 p100作为ib蛋白，在特殊的nf-b信

30、号通路的下游区域发挥作用。 p100具有特殊nf-b二聚体的基础活性的调节功能,p100加工处理成p52的过程,p100： relb异源二聚体,ikk,scf -trcp,导致p100的泛素化,使p100磷酸化，磷酸化位点:丝氨酸866、870、872,形成p52：relb异源二聚体，从而激活nf-b信号通路,3.非典型的ib蛋白ib 和 bcl-3,bcl-3 bcl-3伴随着p50和p52构成的同型和异型二聚体在细胞核中被发现 的。 p50同型二聚体可以与目标dna的b位点结合，从而抑制nf-b 信号通路。bcl-3有两种作用方式：可以通过从b位点转移p50同型二聚体的方式，介导转录抑制物

31、的释放， b位点暴露，从而激活nf-b 信号通路。 也可以稳定p50同型二聚体，和阻止p65、p50或者其它含有tad的二聚体进入b位点的方式，抑制信号通路。 cyclin d1是一种bcl-3调节基因。 去泛素化酶cyld，可以通过阻止bcl-3在细胞核积累，及其与p50，p52同型二聚体的共激活作用，来反向调节bcl-3功能。 bcl-3也可以通过在正常或者癌细胞中增强hdm2基因的表达，来调节p53,ib,ib与bcl-3较为相似，与其他的ib蛋白只有较弱的同源性。 ib在il-1 和 tlr4诱导的nf-b反应中表达上调，并且其表达主要集中在细胞核中。 nf-b激活的通路中， ib可以

32、被诱导表达。其一旦表达，会直接和p50同型二聚体结合。可以说， ib是作为p50同型二聚体的一个共激活因子起作用的。 ib也可以反向调节包含p65的nf-b复合物。 因此，可以说， ib也可以选择性的抑制和激活nf-b信号通路,小结,通过对ib蛋白的深入讨论，我们感觉，仅仅把ib蛋白作为nf-b信号通路的抑制因子已经不太恰当了，因为ib蛋白也可以作为nf-b信号通路的辅助因素，选择性的与各种nf-b二聚体发生作用。尤其是非典型的ib蛋白，这种作用更加明显。 所以说，对于经典的ib蛋白的作用主要是与nf-b二聚体结合，阻止其入核，与dna结合，从而抑制nf-b信号通路。而对于非典型的ib蛋白来说

33、，其可以选择性的激活或者抑制nf-b信号通路,随着nf-b信号通路的深入研究，人们渐渐将重点转移到nf-b的转录调节是怎么样开始和终止的。 1. 共激活因子的调节 2. nf-b信号通路的终止,五.nf-b的转录调节作用,1.共激活因子的调节,现以p65：p50为例，来说明nf-b的转录调节。 nf-b转录调节中的激酶： pka（蛋白激酶a），存在在一个带有细胞溶质nf-b： ib的复合物中，随着ib的降解，其在细胞质中磷酸化p65，磷酸化位点是丝氨酸276。这个磷酸化可以促进p65和转录辅助激活因子cbp（-camp反应元件结合蛋白）/p300的相互作用。 msk1和msk2（分裂素和压力激

34、活激酶 ），可在细胞核中磷酸化p65的丝氨酸276. msk1、msk2与pka享有共同的酶作用底物，即特异性的p65。但是其具体作用机制还需要进一步证明,p65的磷酸化调节,pka在细胞质中磷酸化p65的丝氨酸276。 msk1和msk2在细胞核中磷酸化p65的丝氨酸276。 ikk和ikk可磷酸化p65的丝氨酸536。 p65的丝氨酸529可以被ck2（蛋白激酶）诱导磷酸化。 pkc能磷酸化p65的丝氨酸311。 由此看来， p65的磷酸化位点主要发生在两个区域：一个是rhd的二聚体化的功能域（包括丝氨酸276和311），一个是c-末端tad区域（包括丝氨酸529和536）。 这些磷酸化中

35、的每一种都可能有助于通过诱导构象变化促进cbp/p300与p65的结合。从而完成p65的激活,p65的乙酰化调节,p65的乙酰化发生在细胞核中，可能被cbp/p300和结合的hats（组蛋白乙酰转移酶 ）诱导，乙酰化的位点是p65的赖氨酸310。p65的乙酰化使其和ib的结合作用大大减弱，促进转录活性。但是其在核内可以被hadc3（组蛋白去乙酰化酶）脱去乙酰基，从而促进p65和ib的有效结合，形成的复合物在crmi（核质运输蛋白）的协助下被排出核外，终止转录活性。 因此，p65的乙酰化可增强目的基因转录活性,p65的乙酰化需要两个基本条件,p65的磷酸化对于赖氨酸310的乙酰化是必需的。 丝氨酸276磷酸化的缺乏或过表达具有催化活性的pkac，会阻碍赖氨酸310的乙酰化。 丝氨酸536的磷酸化也可以显著增加赖氨酸310的乙酰化。 ikk通过smrt的磷酸化促进赖氨酸310乙酰化，导致hdac3从smrt辅阻碍物复合物的转移。 另外， i