疟疾病原学监测

1、 采样、保存和检测方法按间接荧光抗体试验技 术规程采集滤纸血，待滤纸血晾干后，按编号装入塑 料袋，送省疾控中心进行IFA检测。采样、保存和检 测方法见疟疾防治手册。 3 媒介密度监测 3.1 监测范围：由市和监测点区县疾控机构选择开 展小学生工FA检测调查点附近的1个自然村，开展媒 介密度监测。 3.2 监测时间：每年6月初1 0月初，每月中旬 进行媒介按蚊密度监测1次。 3.3 监测方法：采用诱蚊灯法，从当地日落2 O分 钟后开始，诱集6小时。第二天，将集蚊盒取出，鉴 定计数。 4 数据收集、统计和上报 龙湖区、南澳县疾控机构应于每月1 5日将上 个月的监测情况上报市疾控中心，市疾控中心应及

2、 时总结、分析和上报全市疟疾监测工作。 5 其它问题 5.1 龙湖区、南澳县卫生行政部门应于今年2月 底前，将监测单位(点)名单上报市卫生局疾控科。 5.2 市疾控中心应于今年3月中旬前，组织对备 监测单位(点)进行疟疾监测工作技术培训。 第二节发热病人血检 1 血片制作 1.1设备 1.1.1载玻片 玻片在使用前应清洗。新片应浸入有液 态洗涤刹的清水中1020分钟，用干净棉巾逐个擦拭， 再放入盛有清水的容器中换水34次，晾干，最后用 干净、柔软的棉巾将玻片擦亮。已用过的玻片应先浸 泡于洗涤剂溶液中12天，或浸泡于煮沸的5肥皂 水l2小时逐个擦去玻片上的旧血膜痕迹，用清水漂 洗34次，再玻片擦

3、干和擦亮。洗净的玻片每10 20张用白纸包好后放入塑料袋内，保存于干燥环境中 备用。 1.1.2 采血针一律使用一次性使用的采血针。 1.1.3 75乙醇棉球用于采血前后的消毒。 1.2 取血方法 采血部位以耳垂较为合适，也可在手指末端采 血，婴儿可从拇趾或足跟取血。先用75乙醇棉球 消毒取血部位，待干后，以左手拇指和食指轻轻捻 转耳垂边缘或夹住被检者手指尖稍下方，右手持消 毒刺针，迅速刺入取血部位12毫米深，然后用左 手大拇指、食指和右手中指协同挤出血滴。 1.3 涂制血膜 取玻片2张，1张作载片，1张作推片(具有光滑 边缘)，右手拇指和食指夹持推片侧缘中部，用推片 的左下角刮取血液45l(

4、约火柴头大小)， 再用该端中部刮取血液l1.5l。将左下角的血滴 涂于载片的中央偏右，由里向外划圈涂成直径为 0.8cm的圆形厚血膜(厚血膜的厚度以一个油镜视野 内可见到510个白细胞为宜)。用干棉球抹净角上 的血渍，然后将推片下缘平抵载玻片的中线，当血 液在载玻片与推片之间向两侧扩展至约2cm宽时， 使两玻片保持2535角，从右向左迅速向前推 成舌状薄血膜。推制时速度要均匀，血滴大小、推 片与载片之间夹角大小及展开血膜的速度快慢等常 影响血膜的厚薄。制成的薄血膜应在玻片上形成平 铺的血细胞，细胞之间互相接触而不相互重叠。每 张载玻片上分别做1个薄血膜，1个厚血膜。标准血 膜的位置如下图所示。

5、 标准血膜的位置图 1.4血膜染色前的处理 待血膜自然干燥后，用铅笔将受检者号码写 在薄血膜上，然后用甲醇固定薄血膜并对厚血膜 进行溶血处理。未处理血膜的放置时间夏天不宜 超过48小时，冬天不宜超过72小时，否则厚血膜 会自然固定且不能溶血影响镜检。 2 血膜的染色 2.1 吉氏染液配制 吉氏粉 10g 甘油 500ml 甲醇 加至1000 ml 将吉氏粉10g置于研钵中，加入少量甘油小心 充分研磨，缓慢溶解，边加边磨，至500 ml甘油加 完研磨均匀为止，然后倒入1000 ml容量瓶中。每 次加入少量甲醇至研钵中，多次洗涤研钵中的残留 液，洗净为止,洗液均并入容量瓶中，再加入部分 甲醇，塞紧

6、瓶塞，摇匀，再加甲醇稀释至1000 ml 的刻度，塞紧瓶塞，充分摇匀，室温放置。每天用 力摇动此溶液5分钟，3天后即可储存至玻璃瓶中塞 紧备用。 2.2缓冲液配制 溶液I: 无水磷酸氢二钠 9.5 g 蒸馏水 加至1000 ml 溶液II: 磷酸二氢钾 9.07g 蒸馏水 加至1000 ml 将上述两种磷酸盐分别置于1000mL容量瓶中，分 别加入部分蒸馏水摇匀使溶解后，再加入蒸馏水稀释至 1000mL，充分摇匀。此配就的溶液I和溶液II分别装入 玻璃瓶中塞紧备用。临用时，根据选用pH的不同，按下 表用量，再配制成不同pH的缓冲溶液用于染液的稀释和 染色后的冲洗。根据选用的不同pH，将上述表中

7、溶液I 和溶液的相应用量倒入1000mL容量瓶中，加入部分蒸 馏水，混合摇匀后，再加入蒸馏水稀释至1000mL的刻 度，塞紧瓶塞反复摇匀后，即配制成不同pH的缓冲溶液。 表21 配制不同pH缓冲溶液的用量表 PH溶液I 用量 (m1) 溶液II 用量 (m1) 稀释成的 总m1数 6.637631000 6.849511000 7.063371000 7.2 7.4 73 81 27 19 1000 1000 2.3 染色用水 常用的染液的稀释用水和染色 的冲洗用水，是中性的蒸馏水或经煮沸过滤的 冷开水。在没有蒸馏水的情况下，也可用井水、 河水、泉水或雨水。因稀释和冲洗用水的pH在 7.07.

8、2时，染色的效果最佳。因此，也可选用 临时配制的缓冲蒸馏水溶液，以取得较好的染 色效果。 2.4染色方法 2.4.1 单张血膜片染色 取蒸馏水或pH7.0 7.2缓冲液lmL加入吉氏染液l滴，混合均匀后， 滴在厚、薄血膜上，染色2030分钟，然后水 洗、晾干。 2.4.2 成批血膜染色 将血膜片朝一个方向插入染色缸中，或每 对玻片血膜朝外，背靠背插入染色缸中，倒入 新配的2吉氏染液(2m1吉氏原液加入蒸馏水或 pH7.07.2缓冲液至l00ml、，摇匀)浸没厚薄 血膜，染色30分钟后，向染色缸中注入缓冲液 或自来水，直到溢出，除掉染液表面上的浮渣， 将染色缸中残余的染液倾出，加入新水，反复 冲

9、洗23次，然后取出玻片，将血膜朝下插在 晾片板上干燥。 染色较好的血膜，红细胞呈淡红色，嗜酸 性细胞的颗粒呈鲜红色，淋巴细胞及疟原虫胞 浆呈兰色或淡蓝色，白细胞的核呈紫蓝色，疟 原虫的核呈红色。 3 血片制作和染色质量评价标准 血片制作和染色的质量以下表中的标准进 行评价。制作、染色和清洁度达到好、中者 为合格，要求制作和染色的合格率应在85 以上，清洁度合格率应在80以上。 表2-2血片制作和染色质量评价标准 好中差 血片 制 作 质 量 厚 血 膜 血量 位置 直径 外观 4.0-5.0mm3 玻片右1/3 0.8-1.0cm 圆形厚薄膜均 匀,边缘整 齐 略多或略少 稍偏右 0.7-0.8或1.0-1.2 cm 圆形稍不均、不整 齐 过多或过少 偏右过多 0.7或1.2 cm 厚薄不匀影响着 色 薄 血 膜 血量 位置 长宽 外观 1.5-2.0mm3 玻片1/2- 1/3处 1.52.0cm 舌状厚薄均匀 略多或略少 稍偏右或偏左 稍大或稍小