补体和循环免疫复合物的检测课件

第11章

补体和循环免疫复合物的检测

第11章

补体和循环免疫复合物的检测

1补体（C）：是一组存在于人和动物血清与组织液中的具有酶活性的不耐热的糖蛋白。补体（C）：2补体性质不稳定0~10℃条件下活性只能保持3~4d56℃、30min灭活

多种理化因素（射线、机械振荡、酒精）均可破坏补体所以：补体活性检测要快，保存在－20℃补体性质不稳定3第一节补体活性和组分的检测第一节补体活性和组分的检测4一、血清补体总活性测定（CH50试验）原理：在溶血反应中，当红细胞和溶血素定量时，在规定的反应时间内，溶血程度与补体的活性呈正相关。（但非直线关系）Ag激活补体溶血红细胞溶血素一、血清补体总活性测定（CH50试验）原理：Ag激活补体溶血5应用：正常值：50-100U/ml

增高：急性炎症、组织损伤、恶性肿瘤等降低：严重肝病、某些自身免疫性疾病（如肾小球肾炎、SLE等)以引起50%溶血所需要的最小补体量为1U溶血率7050300（%）血清补体应用：正常值：50-100U/ml以引起50%溶血所需溶血率650％溶血标准管2%绵羊红细胞悬液0.5mlH2O2.0ml1.8%NaCl溶液2.0ml2%SRBC悬液0.5ml50％溶血标准管2%绵羊红细胞悬液0.5ml7CH50测定方法试管号1：20稀释血清缓冲液2U溶血素2%SRBE0.101.400.50.50.151.350.50.50.201.300.50.50.251.250.50.5

0.301.200.50.50.351.150.50.50.401.100.50.50.451.050.50.50.501.000.50.50.001.500.50.5选择溶血程度与50%溶血标准管最为接近的两管，测定OD值，以OD值最接近标准管的定为最高有效反应管。CH50测定方法试管号1：20稀释血清850％溶血的总补体值CH50（U/ml）＝1/血清用量×稀释倍数1u

0.3ml×20总补体活性参考范围：50~100U/ml50％溶血的总补体值CH50（U/ml）＝1u9CH50试验方法评价1、测定的是补体9种成分的综合水平2、方法简便、快速，但敏感性较低3、影响因素多CH50试验方法评价1、测定的是补体9种成分的综合水平10(一)

免疫溶血法C4活性测定：去C4血清+致敏红细胞——不溶血+

待测血清——溶血溶血程度与待测血清中的C4活性成正相关二、补体成分测定(一)免疫溶血法C4活性测定：去C4血清+致敏红细胞——不11C3含量检测1、方法：单扩法

免疫比浊法2、应用：正常值(二)

免疫化学法C3含量检测1、方法：单扩法(二)免疫化学法12第二节

补体结合实验（CFT)第二节补体结合实验（CFT)13补体结合试验CFTcomplementfixationtest原理：用已知的指示系统检测试验系统是否结合补体。试验系统：待测样品和已知抗原（或抗体）指示系统：SRBC和溶血素溶血—阴性；不溶血—阳性补体补体结合试验原理：用已知的指示系统检测试验系统是否结合补体。14补体参与的抗原抗体反应补体参与的抗原抗体反应15方法评价①灵敏度高。比沉淀反应和凝集反应的灵敏度高得多，能测定0.05μg/ml的抗体。②特异性强。各种成分都事先滴定，选择最佳比例，出现交叉反应的机率小。③易于普及，试验结果显而易见；④试验条件要求低，不需要特殊仪器或只用分光光度计。方法评价①灵敏度高。比沉淀反应和凝集反应的灵敏度高得多，能测16方法评价但参与反应的成分多，影响因素复杂，操作步骤繁锁，所以常常被其他方法所取代。但对于免疫学技术的基本训练仍是一个很好的试验。方法评价但参与反应的成分多，影响因素复杂，操作步骤繁锁，所以17第三节循环免疫复合物的检测第三节循环免疫复合物的检测18概述

免疫复合物是机体内抗原抗体形成的抗原抗体复合物，沉积在血管壁、皮肤、脏器的免疫复合物称为局部免疫复合物，随血液循环的称为循环免疫复合物。局部免疫复合物用免疫组化法检测，而循环免疫复合物检测技术分为抗原特异性检测技术和非抗原特异性检测技术两类。概述免疫复合物是机体内抗原抗体形成的抗原抗体复合19一、PEG（聚乙二醇）沉降法：1、

原理：低浓度的PEG能选择性地沉淀IC，一般PEG的最终浓度选择3.5％，PEG＞5％将失去对IC的选择性。2、

方法：PEG（7％）+等量待检血清→4℃16-18小时后离心沉淀→NaOH溶解→280nm测定A值，A＞0.21判为阳性。3、

评价：简单方便，既可检测又可以用于分离；但特异性差，血清中的大分子蛋白质易造成假阳性。一、PEG（聚乙二醇）沉降法：1、

原理：低浓度的PEG能20C1q固相法1、

原理；固相C1q+待测血清（IC）+酶标抗人IgG+底物——根据颜色深浅判断IC含量2、

评价：敏感度较高重复性好结果稳定性易受影响二、ELISA测定循环免疫复合物

：C1q固相法二、ELISA测定循环免疫复合物：21免疫复合物检测的临床意义1、

可作为评价疾病的活动情况及其对治疗的反应性、恶化预兆和疾病分期的指标。2、

可帮助诊断某些疾病。3、

可协助研究疾病的发病机理。免疫复合物检测的临床意义1、

可作为评价疾病的活动情况及其22思考题简答题：1、CFT的原理2、CH50的原理思考题简答题：23第11章

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补体和循环免疫复合物的检测

24补体（C）：是一组存在于人和动物血清与组织液中的具有酶活性的不耐热的糖蛋白。补体（C）：25补体性质不稳定0~10℃条件下活性只能保持3~4d56℃、30min灭活

多种理化因素（射线、机械振荡、酒精）均可破坏补体所以：补体活性检测要快，保存在－20℃补体性质不稳定26第一节补体活性和组分的检测第一节补体活性和组分的检测27一、血清补体总活性测定（CH50试验）原理：在溶血反应中，当红细胞和溶血素定量时，在规定的反应时间内，溶血程度与补体的活性呈正相关。（但非直线关系）Ag激活补体溶血红细胞溶血素一、血清补体总活性测定（CH50试验）原理：Ag激活补体溶血28应用：正常值：50-100U/ml

增高：急性炎症、组织损伤、恶性肿瘤等降低：严重肝病、某些自身免疫性疾病（如肾小球肾炎、SLE等)以引起50%溶血所需要的最小补体量为1U溶血率7050300（%）血清补体应用：正常值：50-100U/ml以引起50%溶血所需溶血率2950％溶血标准管2%绵羊红细胞悬液0.5mlH2O2.0ml1.8%NaCl溶液2.0ml2%SRBC悬液0.5ml50％溶血标准管2%绵羊红细胞悬液0.5ml30CH50测定方法试管号1：20稀释血清缓冲液2U溶血素2%SRBE0.101.400.50.50.151.350.50.50.201.300.50.50.251.250.50.5

0.301.200.50.50.351.150.50.50.401.100.50.50.451.050.50.50.501.000.50.50.001.500.50.5选择溶血程度与50%溶血标准管最为接近的两管，测定OD值，以OD值最接近标准管的定为最高有效反应管。CH50测定方法试管号1：20稀释血清3150％溶血的总补体值CH50（U/ml）＝1/血清用量×稀释倍数1u

0.3ml×20总补体活性参考范围：50~100U/ml50％溶血的总补体值CH50（U/ml）＝1u32CH50试验方法评价1、测定的是补体9种成分的综合水平2、方法简便、快速，但敏感性较低3、影响因素多CH50试验方法评价1、测定的是补体9种成分的综合水平33(一)

免疫溶血法C4活性测定：去C4血清+致敏红细胞——不溶血+

待测血清——溶血溶血程度与待测血清中的C4活性成正相关二、补体成分测定(一)免疫溶血法C4活性测定：去C4血清+致敏红细胞——不34C3含量检测1、方法：单扩法

免疫比浊法2、应用：正常值(二)

免疫化学法C3含量检测1、方法：单扩法(二)免疫化学法35第二节

补体结合实验（CFT)第二节补体结合实验（CFT)36补体结合试验CFTcomplementfixationtest原理：用已知的指示系统检测试验系统是否结合补体。试验系统：待测样品和已知抗原（或抗体）指示系统：SRBC和溶血素溶血—阴性；不溶血—阳性补体补体结合试验原理：用已知的指示系统检测试验系统是否结合补体。37补体参与的抗原抗体反应补体参与的抗原抗体反应38方法评价①灵敏度高。比沉淀反应和凝集反应的灵敏度高得多，能测定0.05μg/ml的抗体。②特异性强。各种成分都事先滴定，选择最佳比例，出现交叉反应的机率小。③易于普及，试验结果显而易见；④试验条件要求低，不需要特殊仪器或只用分光光度计。方法评价①灵敏度高。比沉淀反应和凝集反应的灵敏度高得多，能测39方法评价但参与反应的成分多，影响因素复杂，操作步骤繁锁，所以常常被其他方法所取代。但对于免疫学技术的基本训练仍是一个很好的试验。方法评价但参与反应的成分多，影响因素复杂，操作步骤繁锁，所以40第三节循环免疫复合物的检测第三节循环免疫复合物的检测41概述

免疫复合物是机体内抗原抗体形成的抗原抗体复合物，沉积在血管壁、皮肤、脏器的免疫复合物称为局部免疫复合物，随血液循环的称为循环免疫复合物。