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千里之行，始于足下让知识带有温度。第第2页/共2页精品文档推荐标准葡萄糖DNS比色法测定.doc标准准葡萄糖DNS比色法测定的办法

采纳3，5-二硝基水杨酸比色法测定水解液中还原糖含量，用752型分光光度计举行比色测定。

1葡萄糖DNS比色法的测定原理

3,5－二硝基水杨酸与还原糖共热后被的还原为棕红色的3-氨基-5-硝基水杨酸。在一定范围内，还原糖的量与棕红色物质色彩的深浅成正比关系，利用分光光度计，在540nm波长下测定光密度值，查对标准曲线并计算，便可求出样品中还原糖的含量。

2测试药品

（1）1mg/mL葡萄糖标准液

精确     称取80℃烘至恒重的分析纯葡萄糖100mg，置于小烧杯中，加少量蒸馏水溶解后，转移到100mL容量瓶中，用蒸馏水定容至100mL，混匀，4℃冰箱中保存备用。

（2）3,5-二硝基水杨酸（DNS）试剂

3测试办法

（1）葡萄糖标准曲线制作

①按下表制备9个试管。

②向9支试管中分离加入DNS试剂0.5ml，充分混合。

③将9支试管放入沸水浴中加热煮沸5min。

④将试管放入盛有冷水的烧杯中冷却。

⑤向各管中分离加入4mL蒸馏水，充分混合。

⑥以空白（1＃）管做对比，用分光光度计于540nm波长下分离测定各管溶液的OD值。

⑦以每管在540nm下的吸光值为纵坐标，每管所含的葡萄糖浓度为横坐标作图，即可得到一条通过零点的直线。假如直线不通过零点则需重做。

标准葡萄糖曲线浓度的量取

Tab.2.2Preparationonstandardcurveofglucose

试管编号标准葡萄糖溶液(mL)蒸馏水(mL)终于浓度(mg/mL)

100.50

20.050.450.1

30.10.

40.2

40.1

50.350.3

50.20.30.4

60.250.250.5

70.30.20.6

80.350.150.79

0.4

0.1

0.8

（2）测定步骤

①样品稀释。

②取2支试管，其中一支做对比，向样品试管中加入稀释后的样品溶液0.5mL，空白不加。

③向两支试管中分离加入DNS试剂0.5ml，于沸水浴中加热5min，然后冷却。④彻低冷却后向空白试管中加入蒸馏水4.5ml，样品试管中加入蒸馏水4ml。⑤以空白为对比，测定溶液在540nm下的OD值。（3）计算

%1009.0%????=

纤维素和半纤维素养量

液体体积

稀释倍数还原糖浓度）还原糖得率（

（4）葡萄糖标准曲线

图葡萄糖标准曲线FigStandardcurveofglucose

葡萄糖浓度与OD值之间的相关关系可表示为式回归方程：y=2.15

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