临床血液学检验技术-第六章-第二节-造血干细胞植入效果的检验-课件

第一章造血及造血调控第一节造血器官与造血微环境临床血液学检验技术第六章造血干细胞移植相关检验技术第二节造血干细胞植入效果的检验目录一、植入状态的检验二、嵌合体检验一、植入状态的检验第二节造血干细胞植入效果的检验1.红细胞血型用该方法判断植入是否成功的原理是在红细胞血型系统中，供者与受者的血型不同。移植后若受者表现为供者的血型，与供者的交叉配血实验无反应，则表明allo-HSC已植入。常用的血型系统为ABO血型系统，但也可以利用其他血型系统来识别供、受者间的差异。该方法是一种定性方法，移植后6个月是进行植入状态分析的最佳时机，不适用于移植后早期的植入状况检测。2．红细胞同工酶谱红细胞同工酶有遗传多态性，可以用于区分供者和受者的造血干细胞移植状态。应用前提为供、受者红细胞同工酶的表型不同。该技术的基本原理是将电泳技术与酶显色方法结合起来，根据酶蛋白分子的大小和所带电荷的不同，通过电泳使之分离。然后利用酶的特异催化活性，作用于底物而显色。根据各种同工酶特有的谱型（谱带的位置、数目、泳动速度、活性强弱等）可判别同工酶的型别。该方法敏感性较红细胞血型法高，但仍只能分析红细胞系统的植入状态，常需分析多个同工酶谱以找到供受者间差异。该方法易受输血情况影响。一、植入状态的检验第二节造血干细胞植入效果的检验一、植入状态的检验3.血清免疫球蛋白谱由于免疫球蛋白多肽链上氨基酸的不同，各类及各型Ig表现出不同的抗原特异性。Ig的抗原决定簇是由遗传决定的，表现出同种异型，具有遗传多态性。Ig重链同种异型表现在IgG、IgA和IgE3类免疫球蛋白上，轻链的同种异型表现在J链上。为了排除由于输血带来的外源性Ig的影响，对免疫球蛋白的同种异型分析通常在最近一次输血100天后进行。第二节造血干细胞植入效果的检验一、植入状态的检验

4.性染色体核型分析人类体细胞第23对染色体（性染色体）在女性为XX，男性为XY，利用这一差别可区分当供、受者性别不同时HSC植入状态。用常规染色体核型分析检测受者的骨髓或外周血的有核细胞时，若发现女性受者的性染色体核型变为XY或男性受者的性染色体核型变为XX，则表明供者的HSC已植入。但该方法的敏感性较低，大约为1%～10%。第二节造血干细胞植入效果的检验一、植入状态的检验5.HLA抗原HLA遗传区域是人体的主要组织相容性复合体（majorhistocompatibilitycomplex，MHC），它位于人类第6号染色体短臂上，包含着已发现的HLA-A、B、C、D、DR、DQ和DP等7个座位，可产生上亿种表型。移植后如果受者在移植前与供者不相同的某一HLA位点转换为与供者相同，则表明成功植入。第二节造血干细胞植入效果的检验

在造血干细胞移植中，造血嵌合体是指供体来源的造血细胞部分或完全植入到受体体内形成的两种不同来源的细胞混合物。二、嵌合体检验第二节造血干细胞植入效果的检验1.限制片段长度多态性（restrictionfragmentlengthpolymorphisms，RFLP)(1)RFLP是一种非常有效的区别供者和受者DNA多态性的方法。RFLP可通过失去或获得限制酶作用位点，或通过在限制部位插入或造成DNA的缺失而产生，前者通常为2个等位基因的多态性，而后者则为多个等位基因多态性。

二、嵌合体检验第二节造血干细胞植入效果的检验(2)用特异探针区别供者和受者独特的等位基因，经Southern杂交显示出DNA“指纹图谱”，利用供、受者之间指纹图谱的差异判断是否植入。(3)它借溶质在两相间分配系数、亲和力、吸附能力、离子交换或分子大小不同引起的排阻作用的差别使不同溶质进行分离。二、嵌合体检验第二节造血干细胞植入效果的检验2.VNTR、STR和VNTR/STR-PCR(1)在检测嵌合体的各种方法中可变数目串联重复（variablenumbertandemrepeats，VNTR）尤其适用于早期检测，其变化所致的DNA多态性可用人工合成的寡核苷酸探针检测。当结合Southern印迹分析时，即使目标DNA仅占DNA总量的1%～2%时，寡核苷酸探针仍可检测出混合嵌合体。二、嵌合体检验第二节造血干细胞植入效果的检验第二节造血干细胞植入效果的检验二、嵌合体检验(2)短片段串联重复（shorttandemrepeats，STR），也称微卫星标记，具有高度多态性及个体特异性。STR基因分型技术已广泛应用于人类学、遗传学、亲子鉴定和法医个体识别等研究领域，可准确判定性别、血型、HLA全相合时的异基因造血干细胞移植是否存活。3.高效液相色谱（highperformanceliquidchromatography，HPLC）

是溶质在固定相和流动相之间进行的一种连续多次的交换过程，它借溶质在两相间分配系数、亲和力、吸附能力、离子交换或分子大小不同引起的排阻作用的差别使不同溶质进行分离。HPLC对PCR产物的定量检测具有高敏感性、高准确性、高重复性以及快速、无污染的优势，与STR技术的结合势必为移植后植入证据的检测开辟一个新的领域。第二节造血干细胞植入效果的检验二、嵌合体检验本章小结

造血干细胞移植植入证据的检测已经成为移植后常规检查项目。植入证据的检测方法多种多样，不同检测方法各有其特点。红细胞血型，性染色体核型分析因其简便可靠将仍具有独特的应用价值；VNTR和STR因其呈高度