腹泻病毒联合检测意义

腹泻病毒联合检测临床意义第1页腹泻病概述和腹泻病毒检测意义荧光免疫法及优势第2页Part1

腹泻病概述和腹泻病毒检测意义腹泻病概述腹泻病发病趋势病毒等其他感染性腹泻现状病毒性腹泻诊断临床意义第3页腹泻病概述腹泻病为多种病原、多种原因引发以大便次数增多和大便性状变化为特点一组疾病，是小朋友患病和死亡主要原因，也是营养不良主要原因[1]。我国每年有8.36亿人次患腹泻，其中5岁下列小儿占3亿次。2023年中国小儿因急性腹泻死亡人数为160万[1]。[1]《小朋友腹泻病诊治专家共识》中华医学会儿科分会消化学组、中华医学会儿科分会感染学组、中华儿科杂志通讯作者：陈洁浙江大学医学院小朋友医院（杭州310003）第4页病名2023年2023年2023年2023年2023年发病数死亡率发病数死亡率发病数死亡率发病数死亡数发病数死亡数霍乱1305317502401570细菌性和阿米巴性痢疾138917718866913207429132379302425224836伤寒和副伤寒116371141363119983117981140413其他感染性腹泻病93761619101258920885678178365912374655143腹泻病发病趋势[2]全国法定传染病（腹泻类）发病数据（数据起源：卫计委网站）第5页病毒等其他感染性腹泻现状第6页病毒等其他感染性腹泻现状2023年中国共报告其他感染性腹泻病例741809例，报告发病率为56.73/0万。既往调查农村地域人群腹泻发病率为1220/10万-3360/10万，就诊率为6.3%-50%，日本，2023年3046家儿科定点监测感染性腹泻病例就达941572例，分析：中国其他感染性腹泻报告病例数与实际发病水平相差甚大[4]。[4]《中国感染性腹泻监测策略思考与提议》作者单位：中国疾病预防控制中心疾控处应急办肠道传染病防制办公室，作者：张静，副研究员，主要从事传染病监测与控制工作第7页病毒等其他感染性腹泻现状成果2023年共报告其他感染性腹泻患者836591例，发病率为62.39/10万。病例发病年纪主要集中在0-5岁组，发病率为447.06／10万（436098例），占总数52.3％（436098／836591），报告病例发病有2个高峰，夏季（第23-35周），占34.33％（287231/836591）；冬季（第43-52周），占23.54％（196939／836591）。报告30起疫情中，5起有明确病原学诊断成果，其中，4起为诺如病毒引发。2023年其他感染性腹泻确诊病例占报告病例数7．16％（59929／836591），其中，病毒感染56687例，细菌感染3242例[5]《2023年中国其他感染性腹泻监测现状分析》《中华预防医学杂志》CASCSCD2023年第4期328-332页,共5页第8页病毒性腹泻诊断临床意义

目前最常见腹泻病毒有4种，其中以轮状病毒、肠道腺病毒最为常见。病毒性腹泻中40%-60%由轮状病毒感染引发，其次是肠道腺病毒、诺如病毒、星状病毒感染[6]。[6]《病毒性腹泻研究进展》雷炳钧，华西医科大学；《临床内科杂志》1998年第4期；第9页病毒性腹泻诊断临床意义腹泻病临床症状相仿，病毒性腹泻治疗方案与细菌等引发腹泻有很大不一样。有报道发觉双重病毒或多重病毒感染腹泻，其症状更严重，病情进展快，造成死亡率更高。由于肠道传染病临床体现和常用辅助检查缺乏显著特异性，因此存在着疾病早期病原体诊断不明确危险原因，从而存在着疾病早期滥用抗生素、生病期延长而增加患者痛苦和经济负担客观原因。

因此，针对轮状病毒、肠道腺病毒研制迅速精确诊断技术，对指导临床对症治疗和避免滥用抗生素有主要意义，尤其是对婴幼儿腹泻诊断上更故意义。[6]《病毒性腹泻研究进展》雷炳钧，华西医科大学；《临床内科杂志》1998年第4期；第10页病毒性腹泻诊断临床意义1、为疾病诊断和鉴别诊断、临床疗效观测和预后提供根据符合循证医学标准，提升医疗诊治科学性。症状学诊治转变为病因学诊治客观上减少抗生素滥用、缩短无须要病程减少无须要病患痛苦、减少无须要经济负担不一样病因，不一样自然病史，不一样临床相，不一样预后转归判断第11页病毒性腹泻诊断临床意义轮状病毒最常见致腹泻病毒，常温稳定，在环境表面存活数日，粪便中可存活数月，55摄氏度30分钟灭活粪口途径传染，秋冬季高发，起病急，潜伏期1~2天，症状期3~8天，发热呕吐腹痛，喷射性水样腹泻，易造成脱水病程自限，多数预后良好，婴幼儿较重，少数脱水死亡初次感染可减少再次感染几率，并减轻再次感染严重性，各型无交叉免疫，可数次感染第12页病毒性腹泻诊断临床意义轮状病毒轮状病毒（Rotavirus，简称RV）是一种双链核糖核酸病毒，属于呼肠孤病毒科。它是婴儿与幼儿腹泻单一主因，几乎世界上每个大约五岁小孩都曾感染过轮状病毒最少一次。然而，每一次感染后人体免疫力会逐渐增强，后续感染影响就会减轻，因而成人就很少受到其影响。轮状病毒总共有七个种，以英文字母编号为A、B、C、D、E、F与G。其中，A种是最为常见一种，而人类轮状病毒感染超出90%案例也都是该种造成。第13页病毒性腹泻诊断临床意义轮状病毒轮状病毒是借由粪口途径传染。它会感染与小肠连结肠黏膜细胞（enterocyte）并且产生肠毒素（enterotoxin），肠毒素会引发肠胃炎，造成严重腹泻，有时候甚至会由于脱水而造成死亡。虽然轮状病毒于1973年就被由澳洲露丝·毕夏普（RuthBishop）所发觉，并且造成婴儿与幼儿总计超出50%以上由于严重腹泻而住院治疗案例，不过在公共卫生社群中它仍然没有被广泛地重视，尤其是在发展中国家更是如此。除了对人类健康影响之外，轮状病毒也会感染动物，是家畜病原体之一。第14页第15页第16页病毒性腹泻诊断临床意义肠道腺病毒对温度敏感，对含氯剂和脂溶剂不敏感，抗紫外线，认真洗手粪口途径传染终年可发病，冬春多发，病程长，多超出一周，腹泻呕吐，可多器官受累，心肌炎，CNS自限，预后良好，腺病毒是肠套叠主要原因，40%肠套叠与腺病毒有关感染后可取得持久免疫力，很少二次感染第17页病毒性腹泻诊断临床意义肠道腺病毒腺病毒(adenovirus)是一种没有包膜直径为70～90nm颗粒，由252个壳粒呈廿面体排列组成。每个壳粒直径为7～9nm。衣壳里是线状双链DNA分子，约含35000bp，两端各有长约100bp反向反复序列。由于每条DNA链5'端同相对分子质量为55X103Da蛋白质分子共价结合，能够出现双链DNA环状构造。第18页病毒性腹泻诊断临床意义肠道腺病毒腺病毒对呼吸道、胃肠道、尿道和膀胱、眼、肝脏等均可感染，人腺病毒约1/3已知血清型一般与人类疾病有关，但一种血清型可引发不一样临床疾患；相反，不一样血清型也可引发同一种疾患。第19页病毒性腹泻诊断临床意义肠道腺病毒胃肠炎许多腺病毒在肠道细胞中复制，随粪便排出，但大多血清型与胃肠道疾病无关。而40型和41型腺病毒可引发婴幼儿与年少（4岁下列）小朋友胃肠炎，致腹痛、腹泻。C组腺病毒能引发某些婴幼儿肠套叠。第20页病毒性腹泻诊断临床意义肠道腺病毒引发其他疾患腺病毒11、12型能引发小朋友急性出血性膀胱炎，尿中出现病毒。37型可引发女性宫颈炎和男性尿道炎，常由性传输感染。在免疫功能低下者可引发偶发或严重病毒感染，尤其在器官移植病人中发生严重呼吸道感染和病毒性肝炎，多由1、5和7型腺病毒引发。艾滋病患者可感染多种血清型腺病毒，并能出现抗原性介于中间杂合型毒株，并且常为致死性腺病毒感染。主要原因是腺病毒E1A蛋白可反式激活HIV转录，加速HIV复制。临床发觉37%艾滋病患者病毒性腹泻是由腺病毒所致。第21页病毒性腹泻诊断临床意义肠道腺病毒腺病毒感染后可取得对同型持久免疫力与绝大多数呼吸道感染病原相比，机体对腺病毒再感染能产生有效免疫。起保护作用是体内产生循环中和抗体。正常健康成人一般也具有多型抗体。约40%～60%6～15岁人具有1、2和5型中和抗体，但3、4和7型抗体很少。母亲抗体能保护婴儿免除严重腺病毒呼吸道感染。第22页病毒性腹泻诊断临床意义诺如病毒诺如病毒，又称诺瓦克病毒（NorwalkViruses，NV）是人类杯状病毒科(HumanCalicivirus，HuCV)中诺如病毒（Norovirus,NV）属原型代表株。它是一组形态相同、抗原性略有不一样病毒颗粒。第23页病毒性腹泻诊断临床意义诺如病毒粪口途径传染，水源、食物污染易造成爆发流行潜伏期1~2天，症状连续1~2天，恶心呕吐腹部痉挛性腹泻，普遍感到病情严重，一日内数次剧烈呕吐预后良好抗体没有免疫作用，可反复感染第24页病毒性腹泻诊断临床意义诺如病毒诺如病毒最早是从1968年在美国诺瓦克市爆发一次急性腹泻患者粪便中分离病原。2023年8月第八届国际病毒命名委员会同意名称为诺如病毒，它与在日本发觉札幌样病毒，合称为人类杯状病毒。诺如病毒感染性腹泻在全世界范围内都有流行，全年均可发生感染，感染对象主要是成人和学龄小朋友，寒冷季节展现高发。美国每年在所有非细菌性腹泻爆发中，60-90%是由诺如病毒引发。荷兰、英国、日本、澳大利亚等发达国家也都有类似成果。在中国5岁下列腹泻小朋友中，诺如病毒检出率为15%左右，血清抗体水平调查表白中国人群中诺如病毒感染亦十分普遍。第25页病毒性腹泻诊断临床意义诺如病毒“诺如病毒”感染性腹泻属于自限性疾病，没有疫苗和特效药品，公众搞好个人卫生、食品卫生和饮水卫生是预防本病关键，要养成勤洗手、不喝生水、生熟食物分开，避免交叉污染等健康生活习惯。第26页病毒性腹泻诊断临床意义诺如病毒诺如病毒遗传高度变异，在同一时期和同一小区内也许存在遗传特性不一样毒株流行。诺如病毒抗体没有显著保护作用，尤其是没有长期免疫保护作用，极易造成反复感染。诺如病毒有许多共同特性：直径约为26～35nm，无包膜，表面粗糙，球形，呈二十面体对称；从急性胃肠炎病人粪便中分离，不能在细胞或组织中培养，也没有合适动物模型；基因组为单股正链RNA；在氯化铯密度梯度中浮力密度为1.36～1.41g/cm3；电镜下缺乏显著形态学特性，负染色电镜照片显示，NV是具有典型羽状外缘，表面有凹痕小圆状构造病毒。第27页病毒性腹泻诊断临床意义诺如病毒诺如病毒基因组全长约7.7kb，包括3个开放阅读框（Open

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frames，ORFs）。ORF1编码非构造蛋白，包括RNA聚合酶（RNA-dependentRNApolymerase，RdRp）；ORF2和ORF3分别编码主要（VP1）和次要（VP2）衣壳蛋白。VP1蛋白构造上可分为S和P区两个相邻区域，其中S区形成内壳，组成VP1底座；P区形成拱样构造突出于内壳外。P区可深入分为P1和P2两个亚区，后者位于VP1最外层，高度变异，目前以为是免疫识别和受体结合关键部位。ORF1/ORF2重组及P2区变异大大丰富了NV遗传多样性。根据VP1序列同源性，诺如病毒可分为GI~GV五个基因群（Genogroup），其中引发人类感染主要是GI和GII群，基因群可深入分为不一样基因型（Genotype）。自1995~1996年诺如病毒初次造成世界性大流行以来，GII群中第4基因型GII.4，始终在世界范围内流行中占据主导地位，且几乎每隔两、三年，GII.4便会引发一次大范围流行，同步出现一种新变异株。

第28页病毒性腹泻诊断临床意义诺如病毒传输途径诺如病毒感染性强，以肠道传输为主，可通过污染水源、食物、物品、空气等传输，常在小区、学校、餐馆、医院、托儿所、孤老院及军队等处引发集体爆发。疾控专家称，病程为自限性，一般2～3天即可恢复。第29页病毒性腹泻诊断临床意义诺如病毒感染者粪便和呕吐物中能够发觉诺如病毒，能够通过几个方式感染诺如病毒：1、食用诺如病毒污染食物或饮用诺如病毒污染饮料；由于病毒很小，并且摄入不到100个病毒就能使人发病。接触诺如病毒污染物体或表面，然后手接触到口。2、直接接触感染者，如照顾病人、与病人共餐或使用相同餐具也可引发传输。直接接触到感染者(如照顾病人，与病人同餐或使用相同餐具)。3、食物能够被污染手、呕吐物或粪便污染物体表面直接污染，或者通过附近呕吐物细小飞沫污染。尽管病毒在人体外很难繁殖，不过一旦存在食品或水中，就能引发疾病。[5]4、有些食品在送至饭店或商店前也许被污染。某些爆发是由于食用从污染水中捕捉牡蛎。其他产品如色拉和冰冻水果也也许在起源地被污染。第30页病毒性腹泻诊断临床意义诺如病毒“诺如病毒”感染性腹泻是一种急性肠道传染病，由“诺如病毒”引发，具有发病急、传输速度快、包括范围广等特点，症状多体现为呕吐、腹泻。潜伏期多在24～48h，最短12h，最长72h。感染者发病突然，主要症状为恶心、呕吐、发热、腹痛和腹泻。小朋友患者呕吐普遍，成人患者腹泻为多，24h内腹泻4～8次，粪便为稀水便或水样便，无黏液脓血。大便常规镜检WBC<15，未见RBC。原发感染患者呕吐症状显著多于续发感染者，有些感染者仅体现出呕吐症状。另外，也可见头痛、寒颤和肌肉痛等症状，严重者可出现脱水症状。第31页病毒性腹泻诊断临床意义第32页病毒性腹泻诊断临床意义第33页

第34页第35页第36页第37页病毒性腹泻诊断临床意义星状病毒人星状病毒于1975年从腹泻婴儿粪便中分离得到，球形，直径28-35nm，无包膜，电镜下表面构造呈星形，有5～6个角。核酸为单正链RNA，7.0kb，两端为非编码区，中间有三个重合开放读码框架第38页病毒性腹泻诊断临床意义星状病毒该病毒呈世界性分布，粪-口传输，是引发婴幼儿、老年人及免疫功能低下者急性病毒性肠炎主要病原之一，其致病性已日益受到重视，人类感染腺病毒主要症状是严重腹泻，伴随发热、恶心、呕吐。本病为自愈性疾病，大部分患者在出现症状2-3天时，症状会逐渐减轻，但也有很少数症状加重，造成脱水。第39页病毒性腹泻诊断临床意义预防目前使用疫苗仅有用于预防鸡星状病毒疾病，为灭活苗。人类星状病毒疾病疫苗至今没有研制成功。但加强锻炼有助于抵抗该类疾病。第40页病毒性腹泻诊断临床意义星状病毒冬季多发潜伏期3~4天，症状期3~5天症状轻，少见脱水与迁延性腹泻有关第41页病毒性腹泻诊断临床意义为流行病学监测积累资料在人群中传输规律，为临床医生提供相对可靠病原体感染谱，为经验性诊断和治疗提供科学根据制定针对性公共卫生应对策略：隔离传染源：切断传输途径：环境卫生，个人卫生，认真洗手等等保护易感人群：疫苗明确病因学诊断能够消除无须要恐慌：尤其是爆发疫情第42页病毒性腹泻诊断临床意义为科学研究提供可靠数据科研需要大量基础数据支持，临床和流行病学资料积累，促进研究工作深入开展为提升医疗单位、有关科室科研水平提供工具、办法学确保第43页Part2荧光免疫法及优势临床常见病原学检测办法第44页措施学特点病毒分离培养技术特异性强、时间长、成本、技术要求高、敏感性不强电镜检测成果直观、精确，设备昂贵、专业性强、人员要求高、病毒滴度要求高不符合常规临床检测免疫学措施敏度高;特异性强;应用面广易于普及,试验成果显而易见;试验条个体要求低,缺陷:操作步骤繁锁、自动化水平不高分子生物学措施敏捷度、精确性高，时间长设备和操作人员专业要求高、成本昂贵免疫学办法，因检测精确、速度快、应用面广得到临床门诊青睐！临床常见病原学检测办法第45页免疫学办法分很多种，包括：酶联免疫检测、胶体金法、荧光免疫法。临床常见病原学检测办法第46页临床常见病原学检测办法酶联免疫检测办法技术特点技术特点是用酶来标识特定抗体，在检测过程中，假如样本中有对应病毒，带有酶标识抗体就会与其结合，利用酶催化作用，就能够检测出病毒。优缺陷酶联免疫检测办法具有非常好长处，敏捷度高，检测精确；缺陷是操作相对复杂，一种试剂只能检测一种病毒，检测时间较长；尤其是对腹泻病毒检测具有很大缺陷，由于，酶联免疫检测试剂一般一种检测板上有96个试