乳腺癌中HER-2检测

乳腺癌病理诊断标准中的几个问题1整理课件一、乳腺肿瘤WHO分类及预后肿瘤名称后的编码为：肿瘤学国际疾病分类编码〔ICD-O〕生物学行为编码为：0为良性肿瘤，1为交界性或生物学行为未定肿瘤，2为原位癌或上皮内肿瘤Ⅲ级，3为恶性肿瘤2整理课件1.上皮性肿瘤1.1浸润性导管癌，非特殊性.310年生存率35%～50%1.1.1混合性癌1.1.2多型性癌1.1.3伴有破骨巨细胞的癌1.1.4伴有绒癌特征的癌1.1.5伴有黑色素特征的癌1.2浸润性小叶癌.3〔预后与浸润性导管癌相似〕1.3小管癌.3〔预后极佳，与同龄无乳腺癌妇女相似〕1.4浸润性筛状癌.3〔预后极佳，10年生存率90%～100%〕1.5髓样癌〔合体细胞生长结构＞75%，没有腺管结构，中度～明显弥漫淋巴细胞浸润，中度～明显核多形性，完整的肿瘤组织学边界〕.3〔预后比浸润性导管癌好，10年生存率50%～90%〕1.6黏液癌及其他富于黏液的肿瘤.3〔10年生存率80%～100%〕1.6.1黏液癌1.6.2囊腺癌和柱状细胞黏液癌1.6.3印戒细胞癌3整理课件1.7神经内分泌肿瘤.3〔组织学级别是最重要的预后指标之一〕1.7.1实性神经内分泌癌1.7.2非典型类癌1.7.3小细胞/燕麦细胞癌1.7.4大细胞神经内分泌癌1.8浸润性乳头状癌.3〔预后较好〕1.9浸润性微乳头状癌.3〔预后与血管浸润、腋窝淋巴结转移有关〕1.10大汗腺癌.3〔预后与非大汗腺癌无差异〕1.11化生性癌.31.11.1纯上皮化生性癌.3〔大局部病例预后非常好〕1.11.1.1鳞状细胞癌1.11.1.2伴有梭形细胞化生的腺癌1.11.1.3腺鳞癌1.11.1.4黏液表皮样癌1.11.2上皮/间叶混合性癌.3〔高度侵袭性〕4整理课件1.12富于脂质的癌.3〔不详〕1.13分泌性癌.3〔在儿童和青少年有极好的预后，在年长患者有浸润性行为〕1.14嗜酸细胞癌.3〔不详〕1.15腺样囊性癌.3〔低度恶性，单纯切除可治愈〕1.16腺泡细胞癌.3〔不详〕1.17富于糖原的透明细胞癌.3〔比浸润性导管癌更具有侵袭性〕1.18皮脂腺癌.3〔不详〕1.19炎症性癌.3〔5年存活率25%～50%〕1.20小叶肿瘤1.20.1小叶原位癌.21.21导管内增生性病变1.21.1通常型导管增生1.21.2平坦型上皮非典型增生〔DIN1A〕1.21.3非典型导管增生〔DIN1B〕1.21.4导管原位癌.2〔包括DIN1C、DIN2、DIN3或DCIS1级、DCIS2级、DCIS3级〕5整理课件1.22微小浸润导管癌〔无编码.极少淋巴结转移.临床按DCIS处理〕1.23导管内乳头状肿瘤1.23.1中心型乳头状瘤.01.23.2外周型乳头状瘤.01.23.3非典型乳头状瘤1.23.4导管内乳头状癌.21.23.5囊内乳头状癌.21.24良性上皮增生1.24.1包括各种类型腺病1.24.1.1硬化腺病1.24.1.2大汗腺腺病1.24.1.3盲管腺病1.24.1.4微腺管腺病1.24.1.5腺肌上皮腺病1.24.2放射性瘢痕/复合性硬化性病变1.24.3腺瘤1.24.3.1管状腺瘤.01.24.3.2泌乳腺瘤.01.24.3.3大汗腺腺瘤.01.24.3.4多型性腺瘤.01.24.3.5导管腺瘤.06整理课件2.腺肌上皮病变2.1肌上皮增生2.2腺肌上皮腺病2.3腺肌上皮瘤.02.4恶性肌上皮瘤.3〔极少发生局部复发或远处转移〕3.间叶肿瘤3.1血管瘤.03.2血管瘤病3.3血管周细胞瘤.13.4假血管瘤样间质增生3.5肌纤维母细胞瘤.03.6纤维瘤病〔侵袭性〕.13.7炎症性肌纤维母细胞瘤.13.8脂肪瘤.03.8.1血管脂肪瘤.03.9颗粒细胞瘤.03.10神经纤维瘤.03.11神经鞘瘤.03.12血管肉瘤.33.13脂肪肉瘤.33.14横纹肌肉瘤.33.15骨肉瘤.33.16平滑肌瘤.03.17平滑肌肉瘤.37整理课件4.纤维上皮性肿瘤4.1纤维腺瘤.04.2叶状肿瘤.1〔良性、恶性均可复发〕4.2.1良性.04.2.2交界性.14.2.3恶性.34.3导管周围间质肉瘤，低级别.34.4乳腺错构瘤5.乳头肿瘤5.1乳头腺瘤.05.2汗腺瘤样腺瘤.05.3乳头派杰病.3〔预后取决于在其下方是否存在导管内癌和乳腺深部组织的浸润癌〕6.恶性淋巴瘤6.1弥漫大B细胞淋巴瘤.36.2Burkitt淋巴瘤.36.3结外MALT型边缘区B细胞淋巴瘤.36.4滤泡型淋巴瘤.37.转移性肿瘤8.男性乳腺肿瘤8.1男性乳腺发育8.2癌8.2.1浸润癌.3〔预后与女性乳腺癌相似〕8.2.2原位癌.28整理课件二、标准的病理报告内容9整理课件

1.标本名称〔肿块切除、单纯乳房切除、乳腺癌改进根治、乳腺癌根治〕2.手术部位3.组织学类型4.分级〔Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级〕5.肿块大小〔cm〕6.血管、淋巴管侵犯情况7.乳头是否受累8.腋下淋巴结转移情况9.ER、PR、c-erbB-2等免疫组化检测情况10整理课件分级方法对3项肿瘤主要特征进行评判：表现腺体分化的腺管形成、核多形性以及核分裂计数。应用1～3计分系统对每个因素进行独立的评估。将3组数值加在一起，可得到3～9的积分结果。其相应的组织学级别如下：Ⅰ级〔grade1)--------高分化：3～5分Ⅱ级〔grade2)--------中分化：6～7分Ⅲ级〔grade3)--------低分化：8～9分11整理课件12整理课件免疫组化标记分为两类：A、诊断用标记：如CD23、CD5、bcl-10、CD10、CK〔pan〕、CK18、CK20desmin、a-SMA、HHF-35。此类标记结果只分〔+〕、〔-〕，不须划分等级，供病理科医生诊断或鉴别诊断用。B、治疗用或预后用标记：如ER、PR、cerbB-2、P-gp、GST-π、TopoⅡ、TS、P63、P53、P27、P21。此类标记结果不能只分〔+〕、〔-〕，必须划分等级，应分为〔-〕、〔+〕、〔++〕、〔+++〕。临床医生据此指导化疗用药和判断预后。13整理课件各家医院检测结果不一致的原因1.病理医生经验缺乏，尤其是对每一种抗体的准确的阳性定位〔细胞膜、细胞浆、细胞核〕缺乏足够的认识，从而发生错误判断。例如：ER应定位在细胞核，PR定位在细胞核，C-erbB-2应定位在细胞膜。2.免疫组化的实验操作不标准。3.组织标本固定不当〔此与临床医生有关〕。4.组织脱水处理不当〔机器质量差、试剂未及时更换、程序未调到最正确状态〕。14整理课件C-erbB-2细胞浆表达15整理课件ER浆表达ER浆表达ER+++16整理课件PR++17整理课件

三、乳腺癌中HER-2的检测及其临床意义18整理课件〔一〕HER-2概况◆Her-2:又名C-erbB-2,Her-2/neu定位于17q12.1-21◆Her-2属于EGFR家族成员◆为原癌基因,编码185KD的跨膜型酪氨酸激酶生长因子受体◆现有研究说明,在30%以上的人类肿瘤中存在Her-2基因的扩增/过度表达(如乳腺癌、卵巢癌、子宫内膜癌、输卵管癌、胃癌和前列腺癌等〕其中25~30%的乳腺癌为Her-2基因的扩增/过度表达。19整理课件国外文献报道的乳腺肿瘤

HER2阳性情况

HER2StudynStagepositive,%Ross(2003)5003Ⅰ-Ⅲ22Owens(2004)6556Ⅰ-Ⅳ24Ross(2003)279Ⅳ26Penault-Llorca(2005)699Ⅳ30

20整理课件〔二〕HER-2/neu癌基因的致瘤机制◆抑制凋亡，促进增殖；

HER-2过表达通过PI3K/AKT和Ras/Raf/MEK/MAPK通路抑制野生型P53蛋白,促进P21waf1/cip1蛋白表达◆增加肿瘤细胞的侵袭力；

HER-2下调和阻断粘附分子整合蛋白、CD44等蛋白表达及粘附功能◆促进肿瘤血管新生和淋巴管新生

HER-2过表达上调血管／淋巴管新生调控因子VEGF-A,-C,-D表达21整理课件

〔三〕、乳腺癌中HER-2扩增/过度表达的临床意义22整理课件1987年Slamon等首次报道乳腺癌原癌基因HER-2的扩增，导致肿瘤易复发，与患者总生存期短密切相关．SlamonDJ,etal.Science.1987,235(4785):177-82.

23整理课件HER2阳性患者的生存期比正常者缩短一半以上转移性乳腺癌患者的中位生存期HER2阳性 8-10个月HER2阴性 17-22个月SlamonDJetal.Science1987;235:177–8224整理课件

〔一〕无病生存期和总生存期短相关,肿瘤预后差.在多变量分析结果中，HER2是肿瘤复发和总生存期长短的独立预后因素复发率(P=0.001)总生存(P=0.02)至今为止已有国内外数百篇文献研究HER-2与乳腺癌的关系，国外八十多篇文献报道报道HER-2扩增／过表达与患者预后差相关．Her-2是目前公认的一个乳腺癌重要的预后/预测因子25整理课件1.000.750.500.250累计生存率024487296120144无扩增扩增基因扩增:>10拷贝数无基因扩增:<3拷贝数临界值:不包括死亡时间(月数)Logrankp<0.001RossJS,FletcherJA.StemCells1998;16:413–428HER2阳性状态的患者无病生存期缩短淋巴结阴性SeshadriRetal.JClinOncol1993;11:1936–42100806040200

0122436486072无病生存概率死亡时间(月数)HER2基因<3拷贝数HER2基因³3拷贝数对数秩检验p=0.001淋巴结阳性26整理课件2005年St.Gallen指南乳腺癌危险度分级低度危险◆LN〔-〕且◆标本中病灶大小〔pT〕≤2CM◆分级1级◆瘤周脉管未见肿瘤侵犯◆HER2基因没有过度表达或扩增◆年龄≥35岁27整理课件2005年St.Gallen指南乳腺癌危险度分级中度危险◆LN〔-〕阴性且有以下至少一条标本中病灶大小〔pT〕≥2CM分级2-3级有瘤周脉管肿瘤侵犯HER2过度表达或扩增年龄≤35岁◆LN1-3个〔+〕且未见HER2过度表达或扩增高度危险◆LN1-3个〔+〕且HER2过度表达或扩增◆LN4个及以上〔+〕28整理课件(二)HER2阳性状态可以预示肿瘤对常规治疗的反响情况◆内分泌治疗HER2阳性患者相对耐药◆CMF方案 HER2阳性患者相对耐药◆蒽环类 对大剂量蒽环类相对敏感◆紫杉类药物相对敏感29整理课件

〔三〕、靶向Her-2的人源化单抗—赫赛汀

30整理课件赫赛汀®靶向HER2的人源化单抗用于治疗HER2阳性乳腺癌生存率提高达45%疗效改善并持续维持生活质量95%人源化,5%鼠抗，具有高度亲和性(Kd=0.1nM)和特异性，显著降低免疫原性(HAMA)31整理课件

〔四〕.Her-2阳性状态的检测方法32整理课件〔一〕组织标本的制备注意环节1、标本的类型：新鲜标本、针吸活检标本、粗针穿刺标本、外科手术标本细针穿刺液基细胞111例IHC、CISH与FISH检测一致的乳腺癌中，53例FNAs〔切除外科标本〕与组织病理标本结果高度一致。VocaturoA.NovelliF,etal.Oncologist.2006Sep;11(8):878-86.

33整理课件HER2表达在原发肿瘤和转移灶呈高度一致StudyPercentageIHCoverexpressionPrimarytumorsMetastasesMasood&Bui(2000)32%32%Shimizuetal(2000)38%38%Simonetal(2001)25%22%Tanneretal(2001)28%28%Gancbergetal(2002)29%27%Vincent-Salomonetal(2002)25%20%Tsutsuietal(2002)25%25%Carlssonetal(2004)55%55%

34整理课件

2.标本的固定〔1〕取材到固定时间<1小时〔2〕固定时间6-48时间，一般不超过24小时〔3〕固定液10%中性福尔马林固定液35整理课件

3.标本的取材<5mm4.组织蜡块和组织切片〔1〕切片后不宜置于恒温时间过长〔<4-6周〕〔2〕厚度IHC3-5umCISH/FISH4-5um36整理课件〔二〕常用检测方法1.免疫组化〔IHC〕检测Her-2蛋白表达〔1〕抗原修复：95-99℃EDTA〔1mMpH80〕或枸橼酸钠〔0.05MpH6.0〕37整理课件〔2〕常用IHC检测的抗体/试剂盒HercepTest:美国FDA批准用于临床诊断公司名Novacastra(newcastle,upontyne,UK)Genentech(SanFrancisco,CA)Zymed(SanFrancisco,CA)DAKO(SanFrancisco,CA)DAKO(SanFrancisco,CA)38整理课件抗体阳性率HerceptTest(DAKO)31/86(38.1%)AO485(DAKO)25/66(37.8%)4D5(Genetech)15/86(17.4%)CB11(BiogenexNovocastra)25/86（9.1%）39整理课件

◆CB11或4D5〔+++〕HerceptTest〔+++〕;HerceptTest〔++〕CB11或4D5〔-〕◆FISH(+),HerceptTest+++:19/20;FISH(-),HerceptTest++:5;FISH(+),IHC(-):3例。GouveaAP,MilaneziF,etal.ApplImmunohistochemMolMorphol.2006Mar;14(1):103-8.40整理课件〔3〕结果判读注意点：◆计数胞膜完全着色的细胞比例及着色强度◆胞浆着色忽略不计◆评定浸润部位的着色情况◆正常上皮细胞不应着色41整理课件染色形态 评分 染色图例完全没有染色或是肿瘤细胞中 0

少于10%肿瘤细胞有细胞膜染色大于10%的肿瘤细胞有呈现清淡地/ 1+稍微地并且是不完整的细胞膜染色

这些细胞只染在局部的细胞膜 大于10%的肿瘤细胞有呈现 2+轻度至中度的完整的细胞膜染色 大于10%的肿瘤细胞有呈现 3+

强度的完整的细胞膜染色 HercepTestTM判读标准42整理课件01+3+2+免疫组织化学法0-3+评分系统

Immunohistochemistry(IHC)43整理课件3+CerbB244整理课件3+CerbB245整理课件2+CerbB246整理课件2+CerbB247整理课件1+CerbB248整理课件49整理课件50整理课件51整理课件52整理课件2.显色原位杂交〔CISH〕

一种用碱性磷酸酶标记的探针，在甲醛固定、石蜡包埋组织切片上进行杂交，再用鼠抗地高辛抗体和辣根过氧化物酶抗鼠抗体进行免疫结合，DAB显色，普通光学显微镜观察有无基因扩增的异常信号的方法。CISH技术比FISH简单，试剂较廉价，不需昂贵的仪器设备，且可长期保存切片。53整理课件〔1〕所需主要设备◆电炉、带温度计的高压锅或微波炉◆原位PCR仪或原位杂交炉◆37℃温箱◆亮视野显微镜54整理课件〔2〕检测三大关键步骤◆标本的加热预处理用电炉，15分钟98℃–100℃所有载玻片必需全部浸入缓冲液◆酶消化室温10分钟或37℃3分钟◆严格冲洗0.5xSSC,75-80℃,5分钟55整理课件过度酶消化56整理课件

酶消化不够57整理课件恰当的酶消化

58整理课件〔3〕结果判读◆无扩增：大于50%的肿瘤细胞中有1-5个信号点◆低拷贝扩增：大于50%的肿瘤细胞核内有6-10个信号点◆高拷贝扩增：大于50%的肿瘤细胞核内有大于10个信号点或者凝结成团块状、簇状粗颗粒信号59整理课件Adiploid-triploidHER2copynumberisusuallyclearCISH检测无HER2基因扩增样本

60整理课件CISH检测低扩增样本

61整理课件Genecopyclusters:100%evidenceofgeneamplification

CISH检测高扩增样本

62整理课件

HER2/CISHNoHER2amplificationHER2amplification

63整理课件3.荧光原位杂交〔FISH〕是一种通过荧光标记的DNA探针与细胞核内的DNA靶序列杂交，在荧光显微镜下能原位显示细胞核内杂交信号的分子细胞遗传学技术。FISH技术用于检测基因扩增的准确性比其他检测技术高，可以防止由于染色体的多体而呈现的假阳性，故被誉为“金标准〞。但FISH技术操作较复杂，试剂(荧光标记的探针试剂盒)和仪器设备(荧光显微镜)昂贵，目前在国内只有少数实验室具有相应技术条件进行该技术的检测。64整理课件〔1〕两种探针◆应用Her-2和17号染色体双荧光标记探针，两种信号的比值〔<2或者>=2〕Her-2是否扩增◆应用单一针对Her-2的地高辛标记探针，直接定量Her-2的扩增程度65整理课件〔2〕FISH主要设备：荧光显微镜原位杂交仪细胞遗传分析工作站高压消毒炉66整理课件〔3〕结果观察◆75%以上癌细胞核中都有杂交信号◆细胞核大小一致、边界完整、染色均一、无重叠67整理课件FISH:PathVysionTM无扩增扩增比值<2提示Her-2无扩增比值³2提示Her-2有扩增68整理课件FISH:INFORM®低扩增高扩增69整理课件EGFR70整理课件EGFR高扩增吉非替尼(gefitinib):商品名为易瑞沙(ire