20224届高考生物一轮复习课件微生物的培养技术及应用

10.2微生物的培养技术及应用考点一微生物的培养技术及应用相关信息＝＝＝＝＝＝＝＝＝微生物1.概念：难以用肉眼观察的微小生物的统称。SARS病毒、新冠病毒等RAN病毒；噬菌体等DNA病毒本章提及的微生物主要指用于发酵的细菌和真菌。细菌、真菌、病毒及一些原生生物教材P91.

是研究和应用微生物的前提，也是发酵工程的重要基础。2.实验室培养微生物的条件：①为微生物提供合适的

条件；②要确保

，并将需要的微生物分离出来。防止杂菌污染，获得纯净的微生物培养物微生物结构简单、形体微小，眼睛看不到，若想得到纯净的微生物，就必须对其进行培养和分离。营养和环境其他微生物无法混入培养基无菌技术微生物的纯培养教材P9一、培养基的配制1.培养基的概念:人们按照微生物对

的不同需求，配制出供其_________的营养基质。营养物质生长繁殖3.营养组成:2.培养基的作用:用以

微生物或

。积累其代谢物培养、分离、鉴定、保存碳源、氮源、（能源）、水、无机盐有机碳源：⑴碳源（提供碳元素）⑵氮源（提供氮元素）无机碳源：CO2、CO32-、HCO3-自养微生物糖类、脂质、蛋白质、有机酸、石油等异养微生物无机氮源：NH4＋、NO3-、NH3等固氮微生物有机氮源：牛肉膏、蛋白胨、尿素、氨基酸等功能：①构成细胞物质和一些代谢产物②有机碳既是碳源又是能源。功能：氮是微生物合成蛋白质、核酸等物质必须的元素。(p10左上角)来源于动物，含有糖、维生素和有机氮等营养物质教材P9在主要营养物质的基础上，培养基还需要满足微生物生长的其它条件：对pH、特殊营养物质以及O2的需求。如：培养乳酸杆菌需要添加______

培养霉菌要将培养基PH调至_____

培养细菌要将培养基PH调至_____

培养厌氧微生物需提供

条件维生素酸性中性或弱碱性无氧表1-11000ml牛肉膏蛋白胨培养基的营养组成组分含量提供的主要营养牛肉膏5g碳源、氮源、磷酸盐和维生素等蛋白胨10g碳源、氮源和维生素等NaCl5g无机盐H2O定容至1000ml水教材P10培养微生物后液体培养基：固体培养基：不同培养基的比较：分离、计数、鉴定、菌种保存等有无凝固剂如琼脂

微生物在琼脂固体培养基表面或内部生长形成肉眼可见的菌落用于扩大微生物种群数量教材P9划分标准培养基种类特点用途物理性质用途4、培养基的种类不加凝固剂加凝固剂，如琼脂工业生产微生物分离、鉴定、活菌计数、保藏菌种允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基。P16培养、分离出特定微生物在培养基中加入某种指示剂或化学药品,用以鉴别不同种类的微生物鉴别不同种类微生物选择培养基液体培养基固体培养基鉴别培养基例如，在培养基中加入青霉素，以抑制细菌、放线菌的生长，从而分离到酵母菌和霉菌。又如，在培养基中加入高浓度的食盐可以抑制多种细菌的生长，但不影响金黄色葡萄球菌的生长。例如，P20

在含纤维素的培养基中加入刚果红时，刚果红与纤维素形成红色复合物，当纤维素被纤维素分解菌分解后，复合物无法形成，培养基中会出现以这些菌为中心的透明圈

思考、液体培养基，振荡培养的目的?提高培养基中溶解氧的含量；使微生物充分接触营养物质，提高对营养物质的利用率。（提高微生物对营养物质的充分利用）讲义P3391、下表表示某培养基的配方，下列叙述正确的是A．从用途看，该培养基属于选择培养基B．培养基中属于碳源的物质主要是葡萄糖，属于氮源的物质是蛋白胨C．该培养基没有提供维生素等营养D．该培养基调节到合适的pH后就可以接种使用B成分蛋白胨葡萄糖

<m></m>

伊红亚甲蓝蒸馏水含量

<m></m>

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<m></m>

<m></m>

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<m></m>

【随堂练习】2．采用下表配方配制的培养液分离果胶酶产生菌时，该表X处的成分应是________(填“葡萄糖”或“果胶”)，不选另一种成分的原因是________________________________________________。K2HPO4MgSO4NaNO3FeSO4XH2O0.1g0.5g3g0.01g2g加至1L大多数微生物以葡萄糖作为碳源，不具有选择作用果胶

尿素

(1)目的：获得

。(2)关键：

。（3）无菌技术主要包括

。纯净的培养物防止杂菌污染二无菌技术教材P10消毒和灭菌二、无菌技术(1)对实验操作的空间、操作者的衣着和手，进行

。(2)将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等器具进行

。注意事项：实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品

。为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在

。清洁和消毒灭菌超净工作台上并在酒精灯火焰附近进行相接触1.消毒和灭菌工作主要包括两方面：教材P10条件结果常用方法应用范围消毒灭菌

(3)常用的灭菌、消毒方法比较较为温和的物理或化学方法强烈的理化因素仅杀死物体表面或内部的部分微生物.杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子煮沸消毒法巴氏消毒法化学药剂消毒法紫外线消毒法灼烧灭菌法干热灭菌法湿热灭菌法日常用品不耐高温的液体，如牛奶用酒精擦拭双手，用氯气消毒水源用紫外灯照射接种室、接种箱、超净工作台使用前的消毒。接种工具(涂布器、接种环)、试管口或瓶口玻璃器皿、金属用具培养基，无菌水教材P11生物消毒法：（2018·全国Ⅱ卷）在生产、生活和科研实践中，经常通过消毒和灭菌来避免杂菌的污染。回答下列问题：(1)在实验室中，玻璃和金属材质的实验器具_______(填“可以”或“不可以”)放入干热灭菌箱中进行干热灭菌。 (2)牛奶的消毒常采用巴氏消毒法或高温瞬时消毒法，与煮沸消毒法相比，这两种方法的优点是_________________。(3)密闭空间内的空气可采用紫外线照射消毒，其原因是紫外线能__________________。在照射前，适量喷洒________，可强化消毒效果。(4)水厂供应的自来水通常是经过________(填“氯气”“乙醇”或“高锰酸钾”)消毒的。(5)某同学在使用高压蒸汽灭菌锅时，若压力达到设定要求，而锅内并没有达到相应温度，最可能的原因是_______________。可以营养物质损失少破坏DNA的结构消毒液氯气冷空气未排尽三.微生物的纯培养培养物纯培养物纯培养将接种于培养基内，在合适条件下形成的含特定种类微生物的群体由单一个体繁殖所获得的微生物群体过程配制培养基→灭菌→接种→分离→培养菌落（课本P12）=微生物群分散单个细胞单个菌落繁殖（课本P11）2、微生物的纯培养（实例——酵母菌的纯培养）(课本P12-13)过程平板划线法过程

将接种后的平板倒置，放入28℃恒温培养箱中培养一段时间。(可用于计数)接种和分离制备培养基培养①配制培养基②灭菌③倒平板培养基：湿热灭菌（高压蒸汽灭菌法）培养皿：干热灭菌温度：50℃左右冷凝后倒置操作：酒精灯火焰附近稀释涂布平板法培养对照将一个未接种的平板倒置，放入相同环境中培养相同时间。思考：①在未接种的培养基表面有菌落生长，说明了？

②如何区别微生物的种类？培养基被杂菌污染了根据菌落特征，如菌落的颜色、形状、大小等念珠菌显色培养基大肠杆菌培养基酵母菌培养基金黄色葡萄球菌和枯草杆菌培养基菌落是鉴定菌种的重要依据。c、倒平板①拔出锥形瓶的棉塞②将瓶口迅速通过火焰③用拇指和食指将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙，将培养基（10～20mL）倒入培养皿，立即盖上皿盖④等待培养基冷却凝固后，将培养皿倒转过来放置课P11返回目的：既可以防止培养基表面的水分挥发；又可以防止皿盖上的冷凝水珠落入培养基造成污染。倒平板注意事项：温度：50℃左右冷凝后平板倒置操作：在酒精灯火焰附近平板划线法接种结束后接种环灭菌：杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者（课本P13）通过接种环在固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基表面。经过数次划线后培养可以分离得到单菌落。12345第1区划线接种环灭菌第2区划线接种环灭菌第3区划线接种环灭菌接种环灭菌12345平板划线法蘸取菌液

课P13目的：杀死上次划线时残留菌种，确保每次划线菌种来自上次划线的末端，从而使每次划线时菌种数目逐渐减少，直至得到单个细胞①接种环只蘸一次菌液,但要在培养基不同位置连续划线多次.②划线首尾不能相接③每次划线前接种环进行灭菌④划线后,培养皿倒置培养(2)在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？需要。划线结束后灼烧接种环，能及时杀死接种环上残留的菌种，避免污染环境和感染操作者。完成大本338页的拓展(3)在第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？

划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。(4)接种结束后，为什么要将一个未接种的培养基和一个已接种的培养基放在一起培养，未接种的培养基表面如果有菌落生长，说明了什么？培养未接种的培养基的作用是对照，未接种的培养基经过培养后无菌落生长，说明培养基的制备是成功的；若有菌落形成，说明培养基灭菌不彻底，或培养基被污染了，需要重新制备。1.自然界里有多种微生物，将其进行合理的筛选、培养和应用，能给医药和化工等生产领域带来巨大经济效益。回答下列问题： (1)对培养基进行灭菌时，多采取________法，而对接种环或涂布器灭菌时则用________法，若要将微生物采用平板划线法进行分离操作，在固体培养基表面连续进行了5次划线，则需要对接种环灼烧________次。平板划线在做第二次及其后的划线操作时，要从上次划线的________开始划线，最后一次划的线不能与第一次划的线________。 (2)将接种后的固体培养基和一个未接种的固体培养基放入恒温箱中________培养，以减少培养基中水分的挥发。其中，培养未接种的固体培养基是为了_____________________。高压蒸汽灭菌灼烧灭菌6末端相连倒置作为对照组，检测培养基是否被杂菌污染(3)甲、乙两组同学用稀释涂布平板法测定某种微生物的数量，在同一稀释倍数下每隔一段时间记录数据(统计时间内微生物总数小于环境容纳量)，得到如表结果：培养时间/小时24487296甲组菌落均值/个18253632乙组菌落均值/个20283832据表可知，计数时最好取培养________小时记录的菌落数作为实验结果，一方面是由于培养时间较短，会遗漏菌落数目，另一方面是由于____________________________________。72培养时间过长，两个或多个菌落连成一个菌落2.回答下列与细菌培养相关的问题。 (1)在细菌培养时，培养基中能同时提供碳源、氮源的成分是________(填“蛋白胨”“葡萄糖”或“NaNO3”)。通常，制备培养基时要根据所培养细菌的不同来调节培养基的pH，其原因是_____________________________________。硝化细菌在没有碳源的培养基上________(填“能够”或“不能”)生长，原因是___________________________________________________________。(2)用平板培养细菌时一般需要将平板________(填“倒置”或“正置”)。(3)单个细菌在平板上会形成菌落，研究人员通常可根据菌落的形状、大小、颜色等特征来初步区分不同种的微生物，原因是___________________________。(4)有些使用后的培养基在丢弃前需要经过________处理，这种处理可以杀死丢弃物中所有的微生物。蛋白胨不同细菌生长繁殖所需的最适pH不同能够硝化细菌可以利用空气中的CO2作为碳源倒置在一定的培养条件下，不同种微生物表现出各自稳定的菌落特征灭菌3．(2022·广东韶关二模)海洋塑料垃圾每年造成数十万海洋动物死亡，其中聚乙烯(PE)塑料因缺乏有效降解的微生物和酶类而难以降解，危害巨大。2021年，中科院海洋所首次发现能有效降解PE塑料的海洋微生物菌群。(1)要获得能有效降解PE塑料的海洋微生物菌群，应选择__________________的环境进行筛选。(2)研究人员利用______________________法纯化降解PE塑料的微生物菌群，使其生长出单个菌落，然后根据菌落的___________________________________(至少写出两种)等来进行初步区分，从中获得了3株能稳定降解PE塑料的菌种P1、P2和P3。沿海中富含PE塑料平板划线或稀释涂布平板形状、大小(或颜色、隆起程度等)(3)研究人员将红色PE塑料粉碎成粉末，均匀混合在无碳固体培养基中，之后再接种经过稀释的三种菌液，一段时间后可测得透明圈大小(D)与菌圈大小(d)(如右图所示)。如使用单一菌种进行扩大培养，应选用__________菌种，理由是__________________________________。(4)与传统填埋、焚烧相比，该微生物菌群对PE塑料的降解具有__________________的优点。不会造成二次污染P1的D/d值最大，对PE塑料的降解效果最佳P11.(2023·河北邢台高三模拟)在实验室培养微生物，需要人为地为微生物提供适宜的营养和环境条件。下列关于培养基配制的说法正确的是A.培养基中需要碳源、氮源、水和无机盐齐全B.培养基中必须添加琼脂C.培养基制备中均需调节pH至酸性D.无论哪种培养基均需要灭菌突破

强化关键能力D完成大本338页2.(2023·江苏无锡高三模拟)下列操作不能达到灭菌目的的是A.使用高压锅处理器皿B.在火焰上灼烧接种环C.用干热灭菌箱处理金属用具D.防疫期间用石炭酸喷洒教室D突破

强化关键能力3.(2023·河南开封高三模拟)下图为微生物的实验室培养的有关操作，下列相关叙述错误的是A.步骤①中，需将接种工具灼烧至变红，以杀灭杂菌B.步骤②中，将接种工具冷却时不宜距酒精灯火焰太远C.图中接种方法的目的是使菌种逐渐稀释，经培养后获得单个菌落D.接种后应将培养皿倒置培养，培养后可以根据结果进行微生物计数D突破

强化关键能力4.(2023·江苏无锡高三模拟)下列操作不能达到灭菌目的的是A.使用高压锅处理器皿B.在火焰上灼烧接种环C.用干热灭菌箱处理金属用具D.防疫期间用石炭酸喷洒教室D防疫期间用石炭酸喷洒教室，属于消毒，不能达到灭菌的目的完成大本338页的突破突破

强化关键能力考点二微生物的选择培养和计数1.选择培养基分解尿素的细菌合成的脲酶可以将尿素分解成氨，氨会使培养基的碱性增强，在培养基中加入酚红指示剂培养细菌，若指示剂变红，可确定该细菌能够分解尿素1.分离原理绝大多数微生物都能利用葡萄糖，但是只有能合成_____的微生物才能分解尿素，利用________________的_____培养基，可以从土壤中分离出_______的细菌脲酶以尿素作为唯一氮源选择分解尿素四、土壤中分解尿素的细菌的分离和计数2.制备培养基葡萄糖10.0g尿素1.0gKH2PO41.4gNa2HPO42.1gMgSO4·7H2O0.2g琼脂15.0g蒸馏水1000ml制备选择培养基（尿素为唯一氮源）制备牛肉膏蛋白胨培养基用牛肉膏蛋白胨培养基作为对照组，用以尿素为唯一氮源的培养基做实验组，用来判断选择培养基是否具有选择作用。①提供无机盐；②调节pH。思考：怎么证明一个选择培养基真的具有选择性呢？设置基础培养基（如牛肉膏蛋白胨培养基）作为对照，若基础培养基中生长的菌落数明显多于该选择培养基，则说明该选择培养基具有选择性。①土壤取样①铲取土样，将样品装入纸袋中要求：从酸碱度接近中性的潮湿土壤中取样；取样层：先铲去表层土，在距地表约3～8cm的土壤层取样取土样用的小铁铲和盛土样的的信封在使用前都要灭菌。3.操作流程：加入90mL无菌水10g土1ⅹ10②.系列稀释加入90mL无菌水10g土1ⅹ10加入9mL无菌水取1ml上清液1ⅹ102加入9mL无菌水取1ml上清液1ⅹ103注意：10g土样加入盛有90mL无菌水中后，已稀释10倍，再计算时，不要忽略；在初次实验中，对于稀释的范围没有把握，怎样做才能保证从中选择出菌落数在30～300的平板进行计数？思考不同微生物的含量不同，分离不同的微生物采用不同的稀释度，以保证获得菌落数在30～300之间的平板。*测细菌时，一般选用104、105、106倍稀释的稀释液进行平板培养①取菌液：取0.1mL菌液，滴加到培养基表面。②涂布器消毒：将涂布器浸在盛有酒精的烧杯中。③涂布器灭菌：将涂布器放在火焰上灼烧，待酒精燃尽、涂布器冷却后，再进行涂布。待涂布的菌液被培养基吸收后，将平板倒置，培养④涂布平板：用涂布器将菌液均匀地涂布在培养基表面。涂布时可转动培养皿，使涂布均匀。③.涂布平板操作：二、微生物的选择培养——稀释涂布平板法④微生物的培养与观察待涂布的菌液被培养基吸收后，将平板_____，放入___________中培养1-2d，在涂布有合适浓度菌液的平板上就可以观察到分离的_______；倒置恒温培养箱单菌落在菌落计数时，每隔24h统计一次菌落数目。选取菌落数目稳定时的记录作为结果，以防止因培养时间不足而遗漏菌落的数目。为保证结果准确和适于计数，应取菌落数为30～300个的平板偏小（原因：）⑤.微生物的数量测定(背)(1）、稀释涂布平板法①原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个单菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。菌落数为30~300、适于计数的平板②减少误差同一稀释度下，应至少对3个平板进行重复计数，然后求出平均值③结果：（2)、显微镜直接计数①工具：显微镜、血细胞计数板（较大的细胞）、细菌计数板（较小的细胞）②结果：当两个或多个细胞连在一起，平板上观察到的只是一个菌落。偏大（原因：）统计的结果一般是活菌数和死菌数的总和。

每克样品中的细菌数=（C÷V）×MC：代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数。V：代表涂布平板时所用的稀释液的体积（mL）。M：代表稀释倍数。例题：甲同学在稀释倍数为105的培养基中测得平板上菌落数分别是80、90、100，涂布平板时均使用0.1ml菌液，试计算每克土壤中可以分离尿素的细菌数目？（80+90+100）/30.1×105=9×107个稀释涂布平板法

两种纯培养方法的比较项目平板划线法稀释涂布平板法分离结果纯化原理通过连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散①一系列的梯度稀释；②涂布平板操作接种用具接种环涂布器优点可以观察菌落特征，对混合菌进行分离可以计数，可以观察菌落特征缺点不能计数操作较麻烦，平板不干燥效果不好，容易蔓延共同点都要用到固体培养基；都需进行无菌操作；都会在培养基表面形成单个的菌落；都可用于观察菌落特征1、尿素容易保存，是目前使用量较大的一种化学氮肥，尿素分子并不能直接被农作物吸收，只有被尿素分解菌分解成氨之后才能被植物利用。下图是从土壤中分离、计数尿素分解菌的过程，有关分析正确的是A．若②过程稀释了10倍，则乙锥形瓶里盛有9mL无菌水B．③的接种方法可用平板划线法或稀释涂布平板法C．a、b、c培养基可以用牛肉膏蛋白胨培养基D．若①②过程稀释了10倍，a、b、c培养基上的菌落数依次为57、58、56个，则10g土样中的尿素分解菌数量为5.7×109个D18mL稀释涂布平板法尿素为唯一的氮源57/0.1x106x106．分解纤维素的微生物的分离(1)分离方法与原理。(2)纤维素分解菌的培养基成分及鉴定原理。纤维素刚果红红色复合物(2)实验结果分析与评价30～3004.下列有关培养基的叙述正确的是A.筛选、培养硝化细菌的培养基中不能加入氮源B.固体培养基中的琼脂能为微生物生长提供碳源C.在进行微生物的富集培养时常选用液体培养基D.培养基中加入刚果红可用于尿素分解菌的鉴定c突破

强化关键能力大本341页5.(2021·江苏1月适应性考试，14)稀释涂布平板法是分离菌种常用的方法，下列相关叙述不恰当的是A.固体培养基灭菌后，应冷却至50℃左右时倒平板B.倒好的平板需立即使用，以免表面干燥，影响菌的生长C.稀释涂布平板分离到的单菌落需进一步划线纯化D.稀释涂布平板法既可用于微生物的分离，也可用于微生物的计数B1.(2021·山东，14)解脂菌能利用分泌的脂肪酶将脂肪分解成甘油和脂肪酸并吸收利用。脂肪酸会使醇溶青琼脂平板变为深蓝色。将不能直接吸收脂肪的甲、乙两种菌分别等量接种在醇溶青琼脂平板上培养。甲菌菌落周围呈现深蓝色，乙菌菌落周围不变色，下列说法错误的是A.甲菌属于解脂菌B.实验中所用培养基以脂肪为唯一碳源C.可将两种菌分别接种在同一平板的不同区域进行对比D.该平板可用来比较解脂菌分泌脂肪酶的能力B重温高考真题演练2.(2021·北京，12)人体皮肤表面存在着多种微生物，某同学拟从中分离出葡萄球菌。下述操作不正确的是A.对配制的培养基进行高压蒸汽灭菌B.使用无菌棉拭子从皮肤表面取样C.用取样后的棉拭子在固体培养基上涂布D.观察菌落的形态和颜色等进行初步判断C重温高考真题演练3.(2020·江苏，19)为纯化菌种，在鉴别培养基上划线接种纤维素降解细菌，培养结果如图所示。下列叙述正确的是A.倒平板后需间歇晃动，以保证表面平整B.图中Ⅰ、Ⅱ区的细菌数量均太多，应从Ⅲ区

挑取单菌落C.该实验结果因单菌落太多，不能达到菌种纯化的目的D.菌落周围的纤维素被降解后，可被刚果红染成红色B重温高考真题演练(2)称取1.0g某土壤样品，转入99mL无菌水中，制备成菌悬液，经___________后，获得细胞密度不同的菌悬液。分别取0.1mL菌悬液涂布在固体培养基上，其中10倍稀释的菌悬液培养后平均长出了46个酵母菌落，则该样本中每克土壤约含酵母菌__________________个。4.(2020·江苏，31)产脂肪酶酵母可用于含油废水处理。为筛选产脂肪酶酵母菌株，科研人员开展了相关研究。请回答下列问题：(1)常规微生物实验中，下列物品及其灭菌方法错误的是_____(填编号)。④编号①②③④物品培养基接种环培养皿涂布器灭菌方法高压蒸汽火焰灼烧干热臭氧稀释等比4.6×105(或460000)重温高考真题演练(3)为了进一步提高酵母菌产酶能力，对分离所得的菌株，采用射线辐照进行______育种。将辐照处理后的酵母菌涂布在以_______为唯一碳源的固体培养基上，培养一段时间后，按照菌落直径大小进行初筛，选择直径______的菌落，纯化后获得A、B两突变菌株。诱变脂肪较大(4)在处理含油废水的同时，可获得单细胞蛋白，实现污染物资源化。为评价A、B两菌株的相关性能，进行了培养研究，结果如图。据图分析，应选择菌株____进行后续相关研究，理由是___________________单细胞蛋白产量高；降解脂肪能力强，净化效果好B该菌株增殖速度快，______________________________________________。5.(2022全国卷)某同学从被石油污染的土壤中分离得到A和B两株可以降解石油的细菌，在此基础上采用平板培养法比较二者降解石油的能力，并分析两个菌株的其他生理功能。实验所用的培养基成分如下。培养基Ⅰ：K2HPO4，MgSO4，NH4NO3，石油。培养基Ⅱ：K2HPO4，MgSO4，石油。操作步骤：①将A、B菌株分别接种在两瓶液体培养基Ⅰ中培养，得到A、B菌液；②液体培养基Ⅰ、Ⅱ中添加琼脂，分别制成平板Ⅰ、Ⅱ，并按图中所示在平板上打甲、乙两孔。回答下列问题。（1）实验所用培养基中作为碳源的成分是

。培养基中NH4NO3的作用是为菌株的生长提供氮源，氮源在菌体内可以参与合成

（答出2种即可）等生物大分子。石油DNA、RNA、蛋白质（2）步骤①中，在资源和空间不受限制的阶段，若最初接种N0个A细菌，繁殖n代后细菌的数量是

。（3）为了比较A、B降解石油的能力，某同学利用步骤②所得到的平板Ⅰ、Ⅱ进行实验，结果如表所示（“+”表示有透明圈，“+”越多表示透明圈越大，“-”表示无透明圈），推测该同学的实验思路是N0•2n菌株透明圈大小平板Ⅰ平板ⅡA+++++B++-在无菌条件下，将等量等浓度的A菌液和B菌液分别接种到平板Ⅰ的甲和乙两孔处，平板Ⅱ也进行同样的操作，在相同且适宜条件下培养一段时间，比较两个平板的两孔处的透明圈大小并作记录，根据透明圈大降解能力强，透明圈小降解能力弱，进而比较A、B降解石油的能力培养基Ⅰ：K2HPO4，MgSO4，NH4NO3，石油。培养基Ⅱ：K2HPO4，MgSO4，石油。操作步骤：①将A、B菌株分别接种在两瓶液体培养基Ⅰ中培养，得到A、B菌液；②液体培养基Ⅰ、Ⅱ中添加琼脂，分别制成平板Ⅰ、Ⅱ，并按图中所示在平板上打甲、乙两孔。（4）现有一贫氮且被石油污染的土壤，根据上表所示实验结果，治理石油污染应选用的菌株是

，理由是