酶的分离纯化

酶的分离纯化Tag内容描述：<p>1、碱性磷酸酶的分离纯化与酶学性质研究碱性磷酸酶的分离纯化与酶学性质研究 董静董静 201131301031201131301031 摘摘 要：要：以猪肝为原料，采用低浓度醋酸钠(低渗破膜作用)制备肝匀浆，醋酸镁则有保护和稳定 AKP 的作 用，匀浆中加入正丁醇可使部分杂蛋白变性，释出膜中酶，过滤后，以去除杂蛋白。含有 AKP 的滤液用 冷丙酮和冷乙酸进行重复分离纯化。根据 AKP 在 33的丙酮或 30的乙醇中溶解，而在 50的丙酮或 60的乙酸中不溶解的性质，用冷丙酮和冷乙醇重复分离提取，可从含有 AKP 的滤液中获得较为纯净的 碱性磷酸酶。酶学性质研究表明。</p><p>2、植酸酶高产菌株的筛选与酶的分离纯化一、研究意义植酸酶是催化植酸及植酸盐水解为肌醇与磷酸（磷酸盐）的一类酶的总称。植酸及其盐类普遍存在于植物体中，是植物种子及营养器官中磷的主要贮存方式，一般植酸磷占禾谷种子及油料作物总磷60%80%。在人和单胃动物食物中，植酸具有强烈的抗营养作用。这是由于一方面人和单胃动物缺乏分解植酸的酶类， 无法利用植酸中的磷，另一方面植酸能与矿质元素如铁锌、钙和镁等蛋白质形成不溶性的稳定的复合物，降低了矿质元素和蛋白质的利用率。植酸酶作为一种新型的饲料添加剂，能分解饲料中的植酸，形。</p><p>3、第二章 酶的生产与分离纯化第2章 酶的生产与分离纯化 主要内容： 2.1 国内外酶制剂工业生产及应用现状2.2 酶的发酵技术2.3 酶的分离纯化2.4 酶分离、纯化的评价2.5 酶的剂型与保存2.1国内外酶制剂工业生产及应用现状2.1.1 新技术在生产中的应用： w 三种方法： n 组织提取：木瓜蛋白酶、凝乳蛋白酶 n 微生物发酵：最大量的来源 n 化学及生物合成：生物重组 w 高新技术的应用：酶的修饰、固定化、基因重组、膜分离技术、冷冻干燥、微胶囊 2.1.2. 集中垄断，市场全球化： w 规模企业由20世纪80年代初的80多家减少至20多家，占市场90%w 丹麦。</p><p>4、产磷酸甘油氧化酶菌种的筛选、鉴定及酶的分离纯化与性质研究第三章 酶的分离纯化第三章 酶的分离纯化第一节 酶分离纯化工作的基本原则及步骤 第二节 细胞破碎 第三节 酶的抽提 第四节 酶的纯化 第五节 酶的纯度与产量第六节 酶的剂型与保存第一节 酶分离纯化工作的基本原则及步骤1926年Summer制备了第一个结晶酶，自此以后，酶分离纯化工作进展很快，现已有数以百计的酶制成了结晶，相当数量的酶达到了高度纯净，并根据酶的作用特点，理化性质、发展了各种类型的分离纯化方法、试剂和设备。一、基本原则 二、 酶分离纯化的基本步骤为了。</p><p>5、第三章 酶的分离纯化第三章 酶的分离纯化第一节 酶分离纯化工作的基本原则及步骤 第二节 细胞破碎 第三节 酶的抽提 第四节 酶的纯化 第五节 酶的纯度与产量第六节 酶的剂型与保存第一节 酶分离纯化工作的基本原则及步骤1926年Summer制备了第一个结晶酶，自此以后，酶分离纯化工作进展很快，现已有数以百计的酶制成了结晶，相当数量的酶达到了高度纯净，并根据酶的作用特点，理化性质、发展了各种类型的分离纯化方法、试剂和设备。一、基本原则 二、 酶分离纯化的基本步骤为了能成功地进行酶的分离纯化，需注意以下两个基本原则：1。</p><p>6、碱性磷酸酶的分离纯化与酶学性质研究董静 201131301031摘 要：以猪肝为原料，采用低浓度醋酸钠(低渗破膜作用)制备肝匀浆，醋酸镁则有保护和稳定AKP 的作用，匀浆中加入正丁醇可使部分杂蛋白变性，释出膜中酶，过滤后，以去除杂蛋白。含有AKP 的滤液用冷丙酮和冷乙酸进行重复分离纯化。根据AKP 在33的丙酮或30的乙醇中溶解，而在50的丙酮或60的乙酸中不溶解的性质，用冷丙酮和冷乙醇重复分离提取，可从含有AKP 的滤液中获得较为纯净的碱性磷酸酶。酶学性质研究表明该酶催化对磷酸苯二钠水解反应的最适PH值为10.0，最适温度为37,米氏常数值K。</p><p>7、Chapter 3 The Extraction, Separation and Purification of Enzyme 酶的分离纯化 制作：郑穗平 Contents of chapter 3 1、酶的提取与分离纯化技术路线 2、细胞破碎 3、酶的提取 4、酶的分离方法 Go Go Go Go 5、酶的组合分离纯化策略 Go 6、酶的浓缩、干燥与结晶 Go 细胞结构与酶分布 3.1 酶的提取、分离纯化技术路线 细胞破碎 酶提取 酶分离纯化 酶浓缩 酶贮存 动物、植物或微生物细胞 发酵液 离心分离，过滤分离，沉淀分 离，层析分离，电泳分离，萃 取分离，结晶分离等。 酶的纯纯化过过程，约约可分为为 三个阶段： (1) 粗蛋白质 (cr。</p><p>8、第四章 酶的提取与分离纯化,将酶从细胞或发酵液中取出，再与杂质分开，获得所需的酶产品。 酶的分离纯化工作,是酶学研究的基础. 酶的纯化过程就目前而言,还是门实验科学.,酶的纯化过程与一般蛋白纯化过程相比有本身独有的特点:一是特定的一种酶在细胞中含量很少;二是酶可通过测定活力的方法加以跟踪.,1、建立一个可靠和快速的测活方法； 2、酶原料的选择； 3、酶的提取； 4、酶的提纯； 5、酶的纯度检验。,酶分离纯化的一般原则:,第一节 细胞破碎（link)第二节 酶的提取 (link) 第三节 沉淀分离(link) 第四节 离心分离 第五节 过滤与膜分。</p><p>9、第三章 酶的分离纯化,酶分离纯化的目的,酶分离纯化的目的是使酶制剂产品达到应用所需的纯度。,分离纯化过程包括3个基本步骤： 1 抽提 2 纯化 3 制剂,Crude product concentration versus selling price (Dwyer, 1984),某些生化物质在原料液中的 浓度与价格的关系(1984年),在分离纯化中必须注意： 1 防止酶的变性失活； 2 在分离纯化过程中的每一步都 应检测酶的活性，以确定酶的 纯化程度和回收率。,第一节 酶活力的测定,几个名词 1 酶活力或酶活性 2 酶活力单位 3 mol催化活性（分子活性）和转换 数（催化中心活力) 4 酶的比活力,酶活力。</p><p>10、第三节 酶的精制 (纯化) 酶纯化的基本原则： 建立一个方便灵敏的分析方法； 选择有效的纯化方法，尽可能减少纯化步骤； 常在低温（4）条件下进行纯化，以避免酶的变性。,第三章 酶的提取与分离纯化,一、膜分离 借助一定孔径的高分子薄膜，将不同大小、形状、性质的颗粒或分子进行分离的技术。,1 扩散膜分离 透析（dialysis）,溶质分子Y 从高浓度一侧通过膜向低浓度一侧移动,蛋白质透析,透析膜 材 料：纤维素衍生物 袋的形状: 管状 目 的: 除杂质 保 存: 防腐剂冷藏。,2 加压膜分离 根据所截留物质颗粒大小的不同，分为：,微滤(Microfiltra。</p><p>11、第三章 酶的分离纯化,一、提取 二、分离纯化,大规模提取纯化的特殊性,在选择酶的提取和分离纯化方法时，必须考虑到小规模工艺过程和大规模工艺过程之间的关系。酶的提取和分离纯化方法有多种，但并不是都适合大规模的操作过程。例如超声波处理、冻融、研磨等方法能有效地破碎细胞，但是扩大这些技术的使用规模，多数是不实用的，有些也效果不佳。,胞外酶的提取,微生物产生的酶分为胞内酶和胞外酶，胞内酶还分为游离状态和膜结合状态两类。要得到胞内酶，必须首先破碎细胞，使酶从细胞内释放出来，进入提取液中，以后的分离纯化步骤就与胞。</p><p>12、第二章 酶的生产与分离纯化,第一节 酶的发酵生产 第二节 酶的纯化 第三节 酶纯度的评价 第四节 酶的剂型与保存,第二章 酶的生产与分离纯化,第一节 酶的发酵生产,一、产酶菌株的获得 二、酶生产的发酵技术,第二章 酶的生产与分离纯化,一、产酶菌株的获得,1.产酶菌株 用于发酵生产的细胞需具备条件： 酶产量高。通过各种育种。 容易培养和管理。培养条件易于实现和控制。 产酶稳定性好。不易退化。 利于酶的分离纯化。细胞及其他杂质可分离。 安全可靠。使用的细胞及其代谢产物安全无毒。,第二章 酶的生产与分离纯化,产酶微生物,第二章 酶的。</p><p>13、酶的提取与分离纯化,（制作人：王众 黄文辉 王晨）,要点,：细胞破碎 ：提取 ：沉淀分离 ：离心分离 ：过滤与膜分离 ：层析分离 ：电泳分离 ：萃取分离 ： 结晶 10：浓缩与干燥,1 细胞破碎,细胞破碎是通过各种过程使细胞外层结构破坏的技术过程。 细胞破碎的方法 机械破碎法 物理破碎法 化学破碎法 酶促破碎法,机械破碎法,1 捣碎法 定义 利用捣碎机的高速旋转叶片所产生的剪切力将组织细胞破碎的方法。 使用范围 动物内脏 植物叶芽 细菌 2 研磨法 利用研钵，石磨，细菌磨，球磨等研磨器械所产生的剪切力将组织细胞破碎的方法。必要时加入石。</p><p>14、11 酶的提取与分离纯化,暨南大学食品科学与工程系 包惠燕 tbhyjnu.edu.cn,食品酶学-包惠燕-11,思考题,1.酶提取纯化过程中应注意些什么？ 2.酶提取前进行的预处理包括什么？ 3.酶提取过程 中为什么要破细胞？破细胞的方法有哪些？其中哪些可用于大规模生产？ 4.酶的抽提剂中常见成分的作用？ 5.酶和其它蛋白质的分离常依据哪些性质差异？分别有哪些主要的分离方法？ 6. SDS-PAGE指什么？试述其原理和应用。 7.试述亲和色谱原理，画出示意图。,本章主要内容,酶的提取、纯化的基本原则 细胞破碎 酶的抽提 浓缩与初步提纯 酶的分离纯化方法 酶。</p><p>15、第四章 酶的分离与纯化,一、酶的分离 二、酶的精制 三、电泳 四、酶的浓缩 五、酶结晶,一般程序 1. 预处理和固液分离：加速固液相分离 2. 细胞破碎分离胞内产物 3. 初步纯化（提取）：除去与目的产物性质差异很大的杂质 4. 高度纯化（精致）：除去与产物性质相似的杂质 5. 产品加工,一、酶的分离,（一）发酵液预处理 目的： 改变发酵液物理性质 尽可能使产物转入便于后处理的某一相中 去除部分杂质,1、发酵液的相对纯化,（1）无机离子的去除 Ca2+ 常用草酸 Mg2+ 三聚磷酸钠，生成可溶性络合物 Na5P3O10+Mg2+ =MgNa3P3O10+2Na+ Fe3+ 黄血盐。</p><p>16、第四章 酶的提取与分离纯化,将酶从细胞或发酵液中取出，再与杂质分开，获得所需的酶产品。 酶的分离纯化工作,是酶学研究的基础. 酶的纯化过程就目前而言,还是门实验科学.,酶的纯化过程与一般蛋白纯化过程相比有本身独有的特点:一是特定的一种酶在细胞中含量很少;二是酶可通过测定活力的方法加以跟踪.,1、建立一个可靠和快速的测活方法； 2、酶原料的选择； 3、酶的提取； 4、酶的提纯； 5、酶的纯度检验。,酶分离纯化的一般原则:,第一节 细胞破碎（link)第二节 酶的提取 (link) 第三节 沉淀分离(link) 第四节 离心分离 第五节 过滤与膜分。</p><p>17、Chapter 3 The Extraction, Separation and Purification of Enzyme,酶的分离纯化,制作：郑穗平,Contents of chapter 3,1、酶的提取与分离纯化技术路线,2、细胞破碎,3、酶的提取,4、酶的分离方法,Go,Go,Go,Go,5、酶的组合分离纯化策略,Go,6、酶的浓缩、干燥与结晶,Go,细胞结构与酶分布,3.1 酶的提取、分离纯化技术路线,细胞破碎,酶提取,酶分离纯化,酶浓缩,酶贮存,动物、植物或微生物细胞,发酵液,离心分离，过滤分离，沉淀分离，层析分离，电泳分离，萃取分离，结晶分离等。,酶的纯化过程，约可分为三个阶段： (1) 粗蛋白质 (crude protein。</p>