微波提取鱼腥草黄铜工艺研究

生 物 制 药 工 程 技 术 论 文院 ： 工 学 院 专 业 ： 生 物 工 程 年 级 ： 10 级 题 目 : 微 波 提 取 鱼 腥 草 黄 铜 工 艺 条 件 的 研 究 学 生 ： 张 舒 学 号 ： 1004011212 指 导 教 师 ：杨 文 婷 职 称 : 目 录摘要 .1关键词 .1Abstract.2Key words .21.仪器材料 .32 方法 .32.1 鱼腥草中总黄酮的萃取工艺流程 .32.2 对照品溶液的制备 .32.3 标准曲线的绘制 .32.4 溶液的配置 .32.5 鱼腥草中总黄酮含量的测定 .42.6 单因素试验方法 .42.7 鱼腥草叶黄铜提取工艺参数的优化 .43 结果与分析 .43.1 乙醇浓度对鱼腥草黄铜提取率的影响 .43.2 料液比对鱼腥草黄铜提取率的影响 .43.3 微波时间对鱼腥草黄铜提取率的影响 .53.4 鱼腥草黄铜提取工艺参数的优化 .63.5 优化工艺的验证 .64 结论 .6参考文献 .7微波提取鱼腥草黄铜工艺条件研究摘要： 目的 对鱼腥草进行微波辅助处理,考察微波作用对鱼腥草总黄酮提取的影响。方法： 实验中以总黄酮的提取量为考察指标,考察微波作用时间、溶剂用量、乙醇浓度等因素的影响。结果：鱼腥草、微波作用时间 3 min、固液比 1: 15( g/ml)及浸乙醇浓度为40%，, 鱼腥草中总黄酮的提取效果最佳。结论 本实验所用方法为鱼腥草总黄酮提取的最佳工艺条件。关键词： 鱼腥草;总黄酮;微波;提取率Study on the process of Extration and separation of flavonoids from huttugnia cordata ThunbAbstract：Objective ：Microwave2assisted extracting was used in extracting flavonoids from leonurushetreophyllus. Method：Three factors including the reacting, the ratio of samp le to solventand the time of immersion were studied by taking the rate of flavonoids extractig as target. Result：For leonurushetreophyllus, the experimental results show that the hightest extraction yield can be obtained when microwaveirradiation time is 3 minutes , the ratio of samp le weight to solvent volumeis 1 to 15, the optimized conditions were alcohol volume fraction of 40%,. Conclusion：This experiment p roved the best way for totalflavones in leonurus hetreophyllus.Key words：Leonurus hetreophyllus; Total flavones; Microwave; Extraction鱼腥草为三白草科( saururaceae)蕺菜属植物蕺菜( hout2tuynia cordata)的全草 1 。鱼腥草具有清热解毒、消肿排脓、利尿通淋及止咳化痰等功效,并对多种细菌有抑制作用,现代药理研究表明鱼腥草具有增强机体免疫力、抗病毒和抑癌等作用 2 。微波具有穿透力强、选择性高、加热效率高等特点。微波辅助萃取技术就是利用微波对细胞的破壁作用和加热作用,加速细胞内有效成分的快速溶出 3 。鱼腥草自古以来共食药两用 【4】 。具有清热解毒、消肿排脓等作用 【5、6】 。本研究以水为溶剂,以鱼腥草中总黄酮的提取量为指标,对鱼腥草进行微波辅助处理,考察微波作用时间、溶剂用量、乙醇浓度等因素的影响,为鱼腥草中总黄酮的提取提供一个较佳工艺条件。1.仪器材料721 紫外分光光度计、微波炉、鱼腥草（市售）、芦丁、95%乙醇、硝酸铝、亚硝酸钠、氢氧化钠均为分析品2 方法2.1 鱼腥草中总黄酮的萃取工艺流程 鱼腥草粉碎称重乙醇浸泡微波处理过滤稀释定容样品液。2.2 对照品溶液的制备称取干燥至恒重的芦丁对照品20mg,加60%的乙醇溶解,置于50 ml容量瓶中,加60%的乙醇至刻度,摇匀。吸取10 ml上述溶液,置于100 ml容量瓶中2.3 标准曲线的绘制 精密吸取芦丁对照品溶液0,1.0,2.0,3.0,4.0,5.0,6.0ml,分别置于25 ml容量瓶中,各加入水使其体积为6.0 ml,然后分别加入0.7mol/L的亚硝酸钠溶1 ml,摇匀,放置6 min;加入0.5mol/L的硝酸铝溶液1 ml,摇匀,放置6 min;加入1 .0mol/L氢氧化钠溶液10 ml,加纯化水定容至25 ml,摇匀,放置15 min.于510 nm波长处测定吸光度,以吸光度为纵坐标,以质量浓度为横坐标, 得标准曲线。标准曲线方程为y=0.439x-0.0093 R 2=0.9971芦 丁 标 准 曲 线 y = 0.4391x - 0.0093R2 = 0.9971-0.100.10.20.30.40.50.60 0.5 1 1.5所 含 芦 丁 质 量 /ug吸光度 系 列 1线 性 (系 列 1)2.4 溶液的配置5%的亚硝酸钠25ml：称取1.25g亚硝酸钠至于25ml的容量瓶中，摇匀备用。5%的硝酸铝25ml：称取1.25g亚硝酸铝至于25ml的容量瓶中，摇匀备用。1mol/L的氢氧化钠500ml：称取20.0g氢氧化钠至于500ml的容量瓶中，摇匀备用。用95%乙醇分别配置Y=40%，50%，60%，70%，80%，90%的乙醇溶液95ml。设X为95%乙醇的毫升数，根据公式95%X=Y*95，可算出X，再以95-X 可算出需加多少水。2.5 鱼腥草中总黄酮含量的测定分光光度法：吸取提取液1mll,置25ml容量瓶中,另一只试管为空白对照品加入纯水补至6ml,加入5%亚硝酸钠溶液1.0 ml,摇匀,放置6 min; 加入10%硝酸铝溶液1.0 ml,掏匀,放置6 min;加1mol/L 氢氧化钠溶液10 ml加水至刻度,掏匀,放置15 min。,510 nm波长处测定吸光度,代入标准曲线方程求得供试品溶液中总黄酮的含量,再换算成鱼腥草中总黄酮的含量。2.6 单因素试验方法分别研究料液比、乙醇浓度、微波作用时间、等因素对鱼腥草黄铜提取率的影响。2.7 鱼腥草叶黄铜提取工艺参数的优化在单因素的基础上采用L 9(34)正交实验表进行正交试验，优化鱼腥草黄铜提取的工艺条件3 结果与分析3.1 乙醇浓度对鱼腥草黄铜提取率的影响准确称取1g鱼腥草粉末，分别加入30ml40%、50%、60%、70%、80%、90%的乙醇溶液，中小火微波2min，实验结果见下。表一乙醇浓度 40%50% 60% 70% 80% 90%鱼腥草质量（g）1.00301.00221.00071.00081.00271.0003黄酮含量（mg/g）16.6419.68 15.99 16.98 15.83 12.82图二乙 醇 浓 度 对 提 取 率 的 影 响05101520250% 20% 40% 60% 80% 100%乙 醇 浓 度 （ %）提取率mg/g系 列 1图一表明，乙醇为50%最佳，当乙醇为50%以下时，随着浓度的增加提取率也随之增加；但当浓度超过50%时随着浓度的增加提取率反而减少，这可能是因为鱼腥草叶中黄铜为多种化合物的混合物，包括多种黄酮苷和苷元。3.2 料液比对鱼腥草黄铜提取率的影响准确称取1g鱼腥草粉末，分别加入15ml、20ml、25ml、30ml、35ml、40ml的50%乙醇，微波提取2min，实验结果如下表二料液比 1:15 1:20 1:25 1:30 1:35 1:40鱼腥草质量（g）1.00191.00151.00041.00041.00031.0017黄酮含量（mg/g）39.4432.22 21.94 19.83 17.71 12.91图三料 液 比 对 对 提 取 率 的 影 响010203040500:00 0:14 0:28 0:43 0:57 1:12 1:26 1:40 1:55料 液 比 (g:ml)提取率（mg/g）系 列 1由图可知料液比太大难以保证原料中黄铜较为彻底地转移到液相中，而且乙醇是易挥发物质可造成物料粘度大，过滤困难，提取不完全。由图中可知料液比在1:15提取率最高，1:15之后提取率随着固液比的增高而下降，选择料液比为1:15为宜。3.3 微波时间对鱼腥草黄铜提取率的影响准确称取1g鱼腥草粉末，加入30ml50%乙醇溶液，分别微波1min、1.5min、2min、2.5min、3min、3.5min、表三微波时间 1min 1.5min2min 2.5min3min 3.5min鱼腥草质量（g）1.00130.99971.00031.00091.00011.0018黄酮含量（mg/g）21.4425.03 30.27 32.51 25.16 18.57图四时 间 对 提 取 率 的 影 响051015202530350 0.5 1 1.5 2 2.5 3 3.5 4时 间 /min提取率（mg/g）系 列 1从图三中可以看出，微波时间为2.5min时可以达到较好的结果。.3.4 鱼腥草黄铜提取工艺参数的优化为了全方面的考虑影响因素，设计了三因素三水平的正交试验，设计因素水平见表四，实验结果见表五表四正交试验因素水平表因素水平 A 乙醇浓度（%）B 微波时间（min） C 料液比12340507022.531:151:201:25表五正交试验结果试验号 A B C 总黄酮比吸附量（ mg/g）123456789K1K2K3R11122233353.1352.7647.955.8112312312345.9652.8155.079.1112323131253.6449.0951.114.5547.1555.3556.8945.4051.1061.7945.3451.9846.52从正交试验结果可以看出，乙醇提取鱼腥草叶中黄酮类化合物的影响因素主次为微波时间乙醇浓度料液比，最佳工艺条件为A 1B3C1即乙醇浓度为40%，微波时间3min，料液比为1:153.5 优化工艺的验证依据试验及分析所得到的最终优化条件，进行三次重复试验提取率均在62.2mg/g,表明此优化工艺稳定可行，结果见表六表六优化工艺条件验证结果试验号 黄铜提取率（mg/g）1 61.722 62.833 62.514 结论本实验研究鱼腥草提取黄铜的工艺条件，从试验可以得出：乙醇提取鱼腥草叶中黄酮类化合物的影响因素主次为微波时间乙醇浓度料液比，最佳工艺条件为A 1B3C1即乙醇浓度为40%，微波时间3min，料液比为1:15基本上可以可把鱼腥草中的黄铜提取出来这