生命科学学院生物科学专业毕业论文BMP2在组织中的表达

本科毕业论文论文题目： 学生姓名： 学 号 ： 专 业 ： 指导教师： 学 院： 1 2014 年 5 月 20 日I毕业论文（设计）内容介绍论文（设计）题 目 BMP2 在组织中的表达 选题时间 完成时间论文（设计）字数7850关 键 词 先兆子痫；蜕膜化；BMP2论文（设计）题目的来源、理论和实践意义：题目来源：张丛教授选题理论和实践意义： 先兆子痫属于妊高症的一种，它是指孕妇在妊娠 24 周左右，在高血压和蛋白尿的基础上，出现的头痛、眼花、恶心、呕吐、上腹不适等症状，患有先兆子痫的孕妇如果得不到及时治疗，往往会出现一些并发症，对母亲而言会造成子痫发作，对胎儿而言更为严重，会引起胎盘早剥、发育迟缓、宫内死胎等。先兆子痫发病率不低，也引起了人们对它的重视， ，尽管已经研究多年，但这种妊娠特有疾病的病因和发病机制至今尚未完全阐明，目前认为先兆子痫是由于胎盘发育异常引起，而胎盘的发育与子宫内膜蜕膜化有密切的关系，在子宫内膜的正常蜕膜化过程中 BMP2 发挥重要的作用。因此猜想，先兆子痫可能与 BMP2 的异常表达直接相关。论文（设计）的主要内容及创新点：论文的主要内容：通过实验探究先兆子痫病人子宫内膜蜕膜中 BMP2 表达量与正常人的是否有明显差异，从而证明先兆子痫与 BMP2 的异常表达是否直接相关。创新点：，尽管已经研究多年，但这种妊娠特有疾病的病因和发病机制至今尚未完全阐明，目前认为先兆子痫是由于胎盘发育异常引起，而胎盘的发育与子宫内膜蜕膜化有密切的关系，在子宫内膜的正常蜕膜化过程中 BMP2 发挥重要的作用。首次将先兆子痫与蜕膜化有关基因 BMP2 直接联系在一起。II附：论文（设计） 本人签名： 2014 年 5 月 20 日目录中文摘要 .1英文摘要 .11 引言 .31.1 研究背景目的及意义 .31.2 先兆子痫的概念 .31.3 先兆子痫病因的研究进展 .31.4 子宫内膜蜕膜化的概念 .41.5 BMP2 的概述 .52 实验材料和方法 .62.1 实验材料 .62.2 试剂及仪器 .62.3 实验方法 .62.4 实验过程 .63 实验结果 .164 讨论 .18参考文献 .19致谢 .201BMP2在组织中的表达摘要：先兆子痫属于妊高症的一种，它是指孕妇在妊娠 24 周左右，在高血压和蛋白尿的基础上，出现的头痛、眼花、恶心、呕吐、上腹不适等症状，患有先兆子痫的孕妇如果得不到及时治疗，往往会出现一些并发症，对母亲而言会造成子痫发作，对胎儿而言更为严重，会引起胎盘早剥、发育迟缓、宫内死胎等。先兆子痫发病率不低，也引起了人们对它的重视，尽管已经研究多年，但这种妊娠特有疾病的病因和发病机制至今尚未完全阐明，目前认为先兆子痫是由于胎盘发育异常引起，而胎盘的发育与子宫内膜蜕膜化有密切的关系，在子宫内膜的正常蜕膜化过程中 BMP2 发挥重要的作用。因此猜想，先兆子痫可能与BMP2 的异常表达直接相关。关键词：先兆子痫；蜕膜化；BMP2The Expression of BMP2 in Endometrium DecidualAbstract: Preeclampsia (PE) is one of pregnancy hypertension. It refers to the pregnant women who appear have a headache, giddy, disgusting, vomiting, epigatic discomfort and other symptoms on the basis of high blood pressure and proteinuria 24 week after pregnancy. If the woman who has Preeclmapsis left untreated will get some complications, for the mother, it can cause eclampsia attack, more serious for fetus, it can cause placental abruption, retardation, intrauterine demise and so on.2The incidence of PE is not low, so it has aroused peoples attention. Although people has studied it for years, the endemic disease etiology and pathogenesis has not been fully clarify. Now most people think preeclampsia is caused by abnormal placenta, and the development of placenta has a close relationship with endometrial decidualization, in the normal process of endometrial decidualization BMP 2 play an important role. So I guess the preeclampsia has a directly related with the abnormally expression of BMP2.Key words: preeclmapsis；decidualization ；BMP2 31 引言1.1 研究背景、目的及意义先兆子痫(PE )是母婴死亡的主要妊娠并发症之一, 临床发病率约5 %, 表现为高血压蛋白尿, 并伴有头痛、眼花、恶心、胃区疼痛及呕吐等症状, 可损坏中枢神经系统和循环系统。患有先兆子痫的孕妇如果得不到及时治疗，往往会出现一些并发症，对母亲而言会造成子痫发作，对胎儿而言更为严重，会引起胎盘早剥、发育迟缓、宫内死胎等。 1, 2, 3先兆子痫发病率不低，也引起了人们对它的重视， ，尽管已经研究多年，但这种妊娠特有疾病的病因和发病机制至今尚未完全阐明，目前认为先兆子痫是由于胎盘发育异常引起，而胎盘的发育与子宫内膜蜕膜化有密切的关系，在子宫内膜的正常蜕膜化过程中 BMP2发挥重要的作用。因此猜想，先兆子痫可能与 BMP2的异常表达直接相关。 通过实验探究先兆子痫病人子宫内膜蜕膜中 BMP2表达量与正常人的是否有明显差异，从而证明先兆子痫与 BMP2的异常表达是否直接相关。1.2先兆子痫的概念及并发症先兆子痫属于妊高症的一种，它是指孕妇在妊娠24周左右，在高血压和蛋白尿的基础上，出现的头痛、眼花、恶心、呕吐、上腹不适等症状。患有先兆子痫的孕妇如果得不到及时治疗，往往会出现一些并发症，对母亲而言会造成子痫发作，对胎儿而言更为严重，会引起胎盘早剥、发育迟缓、宫内死胎等 4。1.3先兆子痫病因的研究进展先兆子痫发病率不低，也引起了人们对它的重视， ，虽然已经研究多年，但其病因和发病机制至今尚未完全阐明，关于PE 的发病机制,认为它是多因素引4起的综合征, 目前提出先兆子痫是由于胎盘发育异常引起。妊娠过程中子宫在血压调节中起重要作用。母体血容量可增加50%，为适应这一过程，子宫螺旋动脉发生重构，从卷曲狭窄变宽变薄，从而减少压力，增加胎儿的血供。先兆子痫患者发生子宫螺旋动脉重构障碍，而造成高血压的一系列症状。 51.4 子宫内膜蜕膜化的概念及作用图 一 子 宫 结 构 图 (引 自 中 医 世 家 组 织 学 与 胚 胎 学 )子宫内膜蜕膜化是指子宫内膜的基质细胞在受到蜕膜化诱导因子的刺激下，增生、分化形成的一种特殊的组织，它对于妊娠的建立及维持具有至关重要的作用。月经周期的分泌晚期，基质细胞开始增生分化成前蜕膜细胞及蜕膜组织。若受精卵着床于子宫内膜，前蜕膜细胞在孕激素的影响下，继续发育、增大，即可成为蜕膜细胞及妊娠蜕膜 6，7 。蜕膜的特定功能也不是不清楚。一个可能就是蜕膜能控制滋养层侵入到母体动脉中的程度。如果这个侵入过程能正确发生,母体就不会因为胚胎侵入的太深而招致损害, 胎儿也会获得充分的营养。但如果没有蜕膜的存在, 滋养层就能直接侵入到子宫肌层中，侵入过程就不会被限制在肌层的内侧, 可能会导致肌肉组织的破坏和子宫的破裂等。因此, 蜕膜最重要的作用很可能是作为一个屏障, 使的母体免受由于胎儿的过渡侵入带来损害。 8, 951.5 BMP2的 概 述BMP即 骨 形 态 发 生 蛋 白 （ bone morphogenetic protein） ,最 早 作 为 体 内能 够 诱 导 骨 与 软 骨 形 成 的 因 子 被 人 认 识 ， 又 被 称 作 “成 骨 素 ”， 属 于 转 化 生长 因 子 TGF-超 家 族 。 BMP家 族 成 员 除 了 有 明 显 的 的 成 骨 作 用 外 ， 还 参 与 了肿 瘤 的 发 生 和 发 展 ， 能 抑 制 细 胞 的 生 长 、 增 殖 ， 促 进 细 胞 分 化 和 凋 亡 10。BMP2作 为 BMP家 族 的 一 员 ， 可 与 细 胞 膜 表 面 的 受 体 结 合 ， 激 活 细 胞 内 的Smad信 号 通 路 ， 促 进 人 子 宫 内 膜 基 质 细 胞 发 生 蜕 膜 化 11。62 实验材料和方法2.1 实验材料试验材料：本实验选取正常人和患有先兆子痫的病人的子宫内膜蜕膜组织。材料来源：齐鲁医院，医生分别在正常人和先兆子痫病人分娩后（或流产后）取其子宫内膜蜕膜组织，液氮保存待用2.2 试剂及仪器试剂：1）液氮 2）裂解液 3）SDS 上样缓冲液 4）电泳缓冲液 5）转移缓冲液 6）封闭液 7）TBST 8）洗脱抗体缓冲液 9）显影液 10）定影液 11）BMP2 抗体仪器： 1）垂直板电泳转移装置 2）离心机 3）移液枪及配套枪头 4）玻璃匀浆器 5）酶标仪 6）超声波破碎仪 7）冰箱 8）镊子 9） PVDF膜 10）小塑料盆 11）冰袋 12）冰盒 13）刀片 14）铅笔 15）marker笔 16）孵育袋 17）热封口器15 ) 脱色摇床 16）培养皿 17）ECL显影仪 18）电磁炉 2.3 实验方法 对所得蛋白样品定量后，在等量的蛋白样品中，采用 Western Blot 对正常人和患有先兆子痫病人来源的子宫内膜蜕膜组织中 BMP2 表达量进行比较。实验中用人体组织中的一中管家基因 -actin 作为内参。2.4 实验过程一、溶液配制（一）蛋白裂解、定量：1、PBS 缓冲液： 4保存。NaCl 0.8015 gKCl 0.0202 gNa2HPO4 0.142 gKH2PO4 0.0239 g7DDW 80 ml0.1M HCl/ 0.5M NaOH 调节 PH7.4DDW 定容至 100 ml2、10m M PMSF（10xPMSF）(蛋白酶抑制剂)： -20保存。PMSF(MW174.2) 0.0174 g 异丙醇 10 ml（二）制胶：1、30%丙烯酰胺溶液： 4避光保存。丙烯酰胺（Acr） 29.2 g（29.2%）甲叉双丙烯酰胺（Bic） 0.8 g（0.8%）DDW 定容至 100ml37水浴溶解，0.45m 过滤器过滤。2、1